本发明专利技术公开了一种辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因的专用引物及其应用。所述专用引物包括p53引物对；所述p53引物对由序列1和2所示DNA组成。所述专用引物还包括p21引物对、chek1引物对、atm引物对、cdk1引物对和helb引物对中的至少一种；p21引物对由序列3和4所示DNA组成；chek1引物对由序列5和6所示DNA组成；atm引物对由序列7和8所示DNA组成；cdk1引物对由序列9和10所示DNA组成；helb引物对由序列11和12所示DNA组成。本发明专利技术提供的方法具有操作简单、高效特异的特点，同时具有较高的应用价值，可为转基因猪的安全性评价和标准制定提供参考。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因的专用引物及其应用。
技术介绍
在动物的基因组中，p21、cdkl、p53、chekl、helb、atm等基因是维持动物遗传稳定的主要基因，它们在细胞内复杂的调控网络中占据了重要的位置，这些基因的稳定表达对细胞的生长、维持和分化都具有重要意义。Cdkl蛋白能够与核苷酸结合，是周期蛋白依赖蛋白激酶，参与蛋白氨基酸磷酸化， 调控有丝分裂细胞周期，负调控细胞增殖。P21基因也称cdknla，编码周期蛋白依赖激酶抑制因子1A，分布于细胞核中，具有蛋白激酶活性，是周期蛋白依赖蛋白激酶抑制因子，调控周期蛋白依赖蛋白激酶，介导负调控细胞增殖，细胞内信号诱导细胞凋亡。Chekl是CHKl检控点同源物(裂殖酵母)分布于浓缩核染色体；具有、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性；参与 DNA损伤检控点，调控周期蛋白依赖蛋白激酶、具有DNA修复功能等。Helb基因编码解旋酶 (DNA)B0 atm基因被公认为是一个肿瘤抑制基因，共济失调毛细血管扩张突变(包括互补组 A，C和D)分布于细胞核，可以直接或间接的参与DNA损伤修复，从而影响细胞周期、减数分裂重组、信号转导和负调控进程。其突变或缺损后共济失调毛细血管扩张、抑癌功能随之丧失，引起乳腺癌、淋巴瘤等病变。P53是一种肿瘤抑制基因，在所有恶性肿瘤中，50%以上会出现该基因的突变，P53介导的细胞信号转导途径在调节细胞正常生命活动中起重要作用， 它与细胞内其它信号转导通路间的联系十分复杂，其中P53参与调控的基因已超过160种。转基因猪的研究已经逐渐成熟，技术方法和应用不断创新。如通过基因组中导入外源功能基因，改良猪肉品质、增强猪抗病和对环境的适应能力。另外，转基因猪可以为医学研究提供动物病理模型和生产人用药品及组织器官等。然而其安全性逐渐成为大众广泛关注的问题。外源基因插入位点的不同可造成不同程度的基因改变，可能引起非预期效应。 常常因外源基因的表达产物意外激活(或抑制)其他自然基因的表达，进而改变动物体内一些正常生理过程，从而导致猪发育异常或产生疾病；被修饰的基因产物有可能破坏细胞正常生理功能及代谢平衡，影响猪的健康，甚至具有潜在的致癌性。因此在转基因猪的生产和研究中，检测转基因猪自然基因表达情况的十分必要，尤其是与遗传稳定性相关的基因。 因此，建立检测p21基因、cdkl基因、p53基因、chekl基因、helb基因和atm基因的RT-PCR 方法对检测遗传稳定性具有重要意义，有助于安全评价标准的制定。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因的专用引物及其应用。本专利技术提供的辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因的专用引物(引物组合物)，包括 P53引物对；所述p53引物对由序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成。所述专用引物还可包括p21引物对、chekl引物对、atm引物对、cdkl引物对和 helb引物对中的至少一种；所述p21引物对由序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成；所述chekl引物对由序列表的序列5所示DNA和序列表的序列6所示DNA 组成；所述atm引物对由序列表的序列7所示DNA和序列表的序列8所示DNA组成；所述 cdkl引物对由序列表的序列9所示DNA和序列表的序列10所示DNA组成；所述helb引物对由序列表的序列11和序列表的序列12所示DNA组成。所述专用引物具体可由所述p53引物对、所述p21引物对、所述chekl引物对、所述atm引物对、所述cdkl引物对和所述helb引物对组成。所述猪遗传稳定性相关基因具体可为p53基因、p21基因、chekl基因、atm 基因、cdkl基因和helb基因中的至少一个；所述p53基因如序列表的序列13所示 (GenBankAccession No. AF124298. 1)；所述 p21 基因如序列表的序列 14 所示(GenBank Accession No. ΧΜ_001929558. 1)；所述 chekl 基因如序列表的序列 15 所示(GenBank Accession No. XM_003130047. 1)；所述 atm 基因如序列表的序列 16 所示(GenBank Accession No. NM_001123080. 1)；所述 cdkl 基因如序列表的序列 17 所示(GenBank Accession No. NM_001159304. 2)；所述 helb 基因如序列表的序列 18 所示(GenBank Accession No. XM_003126364. 1)。以上任一所述的专用引物均可用于辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因。所述猪遗传稳定性相关基因具体可为P53基因、p21基因、chekl基因、atm基因、 cdkl基因和helb基因中的至少一个；所述p53基因如序列表的序列13所示；所述p21基因如序列表的序列14所示；所述chekl基因如序列表的序列15所示；所述atm基因如序列表的序列16所示；所述cdkl基因如序列表的序列17所示；所述helb基因如序列表的序列 18所示。本专利技术还保护一种辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因的方法，包括如下步骤以待测猪的cDNA为模板，用所述专用引物中的每个引物对分别进行PCR扩增，根据PCR扩增产物辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因；所述猪遗传稳定性相关基因为p53基因、 p21基因、chekl基因、atm基因、cdkl基因和helb基因中的至少一个；所述p53基因如序列表的序列13所示；所述p21基因如序列表的序列14所示；所述chekl基因如序列表的序列15所示；所述atm基因如序列表的序列16所示；所述cdkl基因如序列表的序列17所示；所述helb基因如序列表的序列18所示。所述p53引物对用于辅助鉴定所述P53基因，其目的PCR扩增产物为474bp ；所述 P21引物对用于辅助鉴定所述p21基因，其目的PCR扩增产物为356bp ；所述chekl引物对用于辅助鉴定所述chekl基因，其目的PCR扩增产物为35!3bp ；所述atm引物对用于辅助鉴定所述atm基因，其目的PCR扩增产物为532bp ；所述cdkl引物对用于辅助鉴定所述cdkl 基因，其目的PCR扩增产物为598bp ；所述helb引物对用于辅助鉴定所述helb基因，其目的PCR扩增产物为49Ibp。所述PCR扩增的反应体系具体可为ddH20 17μ 1,10XPCR Buffer 2. 5μ 1, 2. 5mMdNTP 2 μ 1，10 μ mol/L 的每条引物各 0.5yl，cDNA 2 μ 1,2. 5U/μ L Taq polymeraseO. 5 μ 1。所述PCR 扩增的反应参数具体可为94°C 5min ；94°C 30s、60°C 30s,72°C 40s, 30 个循环；72 °C 5min。所述RNA可来自待测猪的各种细胞或组织。所述猪具体可为大约克夏品种的猪。本专利技术公开了辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因(p21基因、cdkl基因、p53基因、 chekl基因、helb基因和atm基因)的专用引物，基于该专用引物开发了助鉴定猪遗传稳定性相关基因的RT-PCR方法，本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因的专用引物，包括ｐ５３引物对；所述ｐ５３引物对由序列表的序列１所示ＤＮＡ和序列表的序列２所示ＤＮＡ组成。
【技术特征摘要】
1.辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因的专用引物，包括P53引物对；所述p53引物对由序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA组成。2.如权利要求1所述的专用引物，其特征在于所述专用引物还包括p21引物对、 chekl引物对、atm引物对、cdkl引物对和helb引物对中的至少一种；所述p21引物对由序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成；所述chekl引物对由序列表的序列5所示DNA和序列表的序列6所示DNA组成；所述atm引物对由序列表的序列7所示 DNA和序列表的序列8所示DNA组成；所述cdkl引物对由序列表的序列9所示DNA和序列表的序列10所示DNA组成；所述helb引物对由序列表的序列11和序列表的序列12所示 DNA组成。3.如权利要求2所述的专用引物，其特征在于所述专用引物由所述p53引物对、所述 p21引物对、所述chekl引物对、所述atm引物对、所述cdkl引物对和所述helb引物对组成。4.如权利要求1至3中任一所述的专用引物，其特征在于所述猪遗传稳定性相关基因为p53基因、p21基因、chekl基因、atm基因、cdkl基因和helb基因中的至少一个；所述 P53基因如序列表的序列13所示；所述p21基因如序列表的序列14所示；所述chekl基因如序列表的序列15所示；所述atm基因如序列表的序列16所示；所述cdkl基因如序列表的序列17所示；所述helb基因如序列表的序列18所示。5.权利要求1至4中任一所述的专用引物在辅助鉴定猪遗传稳定性相关基因中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述猪遗传稳定性相关基因为p53基因、 p21基因、chekl基因、atm基因、cdkl基因和helb基因中的至少一个；所述p53基因如序列表的序列13所示；所述p21基因如序列表的序列14所示；所述chekl基因如序列表的序列15所示；所述atm基因如序列表的序列16所示；所述cdkl基因...
【专利技术属性】
技术研发人员：常智杰，甘一迪，任芳丽，王银银，窦琳，夏永静，张诚，韩斌，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：11
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