本发明专利技术提供一种含有大豆免疫肽的饲料添加剂及其制备方法和应用，是以豆粕或高温变性豆粕为原料，粉碎过筛后采用挤压膨化的方法对原料进行物理预处理；挤压膨化后的物料二次粉碎过筛后进行酶水解，水解液经喷雾干燥后制得本发明专利技术的方法所制备的产品。本方法原料来源广泛，且在制备过程中无需添加酸碱等化学药品，采用酶法水解工艺，条件温和，因此所得产品免疫活性较好，价格低廉，且产品无毒无副作用，获得了免疫特性较好的蛋白质或多肽以及对应的添加剂产品，既提高了豆粕的附加值，又为饲料添加剂产业开发提供了更多的产品。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种饲料添加剂及其制备方法和应用，具体涉及一种具有免疫功能的含有大豆免疫肽的饲料添加剂及其制备方法和应用。
技术介绍
目前由于免疫添加剂增强的免疫效果已被广泛认可，禽畜的免疫添加剂被广泛应用，常见的免疫添加剂既有包含西药成份的，也有包含中药成份的，但都存在不同程度的问题，化药免疫增强剂不同程度的存在降低畜禽生产性能，引发多耐药性菌株和残留污染畜产品出现，进而危害人类健康的弊病。因此一种植物蛋白源的免疫添加剂应运而生，一方面其能激活免疫系统，提高T淋巴细胞增殖，巨噬细胞的吞噬能力等，以使接种或饲喂后的禽畜获得较高水平的免疫反应，增强机体抵抗力，另一方面植物蛋白源的免疫添加剂具有消除上述免疫抑制的作用，其毒副作用轻、有害残留少。Takahashi等从大米清蛋白的胰蛋白酶解物中纯化出的八肽 Gly-Tyr-Pro-Met-Tyr-Pro-Leu-Arg 和少几个氨基酸的大米肽(oryzatensin)的 C 末端片段，能诱导人血白细胞的吞噬活性及刺激白细胞周围超氧化离子的产生，具有的免疫调节作用。^shikawa和Takahashi应用高效液相色谱技术从大豆蛋白的胰蛋白酶酶解物中得到一个肽链顺序为His-CyS-Gln-Arg-Pro-Arg的六肽，这种肽能刺激巨噬细胞和多核白细胞的吞噬作用，具有免疫调节功能。进一步酶解六肽，又获得了具有同样免疫调节作用的、一级结构为Gln-Arg-Pro-Arg的四肽。Jiun-rong Chen从大豆胃蛋白酶水解液中纯化和分离分别得到的 Ala-Glu-Ile-Asn-Met-Pro-Asp-Tyr，IIe-Gln-Gln-Gly-Asn, and Ser-Gly-Phe-Ala-Pro，能够刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖。大豆蛋白经酶解或微生物水解法可以得到 Lue — Lue 一 Tyr 和 Tyr-Tyr-Met — Pro 一 Leu 一 Tyr 只要极低计量(0. IMu) 就可以通过鼠腹膜巨噬细胞激活具有吞噬作用的绵羊红细胞，具有增强人体免疫功能的效果。Fumio等报道，大豆多肽与母本蛋白相比能显著增强大鼠肺泡巨噬细胞吞噬绵羊红细胞的功能，而且大豆多肽的作用优于酪蛋白多肽。Kim等报道，从大豆蛋白水解物中分离并纯化得到了一种抗癌活性肽(9肽)，其相对分子质量为1157KDa。从胰蛋白酶水解大豆蛋白的酶解物中可获得一种6肽，其一级结构为His-Cys-Gln-Arg-Pr0-Arg(HCQRPR)，这种肽能刺激巨噬细胞和多核白细胞的吞噬作用，具有免疫调节功能。进一步酶解HCQRPR，又获得了具有同样免疫调节作用的、一级结构为Gln-Arg-Pro-Arg^lRPR)的4肽。曾晓波等利用碱性蛋白酶水解“华杂三号”双低油菜籽(low erucic acid low glucosinalaterapeseed)蛋白，制得具有增强免疫能力和抑制肿瘤生长的潜力的菜籽肽。杨小军等用经氯化钠缓冲液洗涤法制备的面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物灌喂小鼠后发现，肠腔SIgA水平提高了观.6%， 血清IL-2水平上升了 38.4%，这也进一步说明了灌喂面筋蛋白胃蛋白酶酶解物能够增强机体肠黏膜的免疫功能，而且大豆蛋白酶解物的作用优于面筋蛋白酶解物。潘翠玲等也发现，大豆蛋白和酪蛋白酶解物均能不同程度地刺激经PHA诱导的10日龄仔猪外周血淋巴细胞的转化，且大豆蛋白酶解物的促淋巴细胞转化作用最强。水解法是将天然大蛋白分子中的肽链裂解成小分子的肽段，从而制备具有生物活性的短肽。主要有化学水解法(酸水解法、碱水解法)和生物水解法(酶水解法、微生物降解法)。蛋白质本身就是生物活性物的前体，选择合适的蛋白酶水解这些多肽链，把具有生物活性的肽段释放出来，从而可制备出具有生理功能的生物活性肽。采用酶法生产活性肽是当前研究的热点。酶法水解具有许多物理、化学改性无可比拟的优点。首先它是一种不完全、不彻底的水解，其产物主要是肽而不是氨基酸；其次是反应的条件温和，反应时间短， 效率高，不产生消旋作用，也不破坏氨基酸；再次是产品纯度高，产物易分离，成本低廉等； 此外，利用蛋白酶来水解蛋白质时，还可以通过选择酶的种类，控制反应条件等措施来得到具有特定生理功能的生物活性肽。目前商业化蛋白酶主要来源于植物(木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶等)、动物(胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等)和微生物(碱性蛋白酶、毛霉蛋白酶、栖土曲霉、黑曲霉等)。动物来源的蛋白酶具有专一性强等特性，如胰蛋白酶能专一水解赖氨酸和精氨酸结合的肽键，胰凝乳蛋白酶能水解酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的肽键。有许多报道用动物来源的蛋白酶制备生物活性肽。植物来源的蛋白酶虽然来源丰富且价格便宜但专一性不强。微生物来源的蛋白酶有细菌性蛋白酶和霉菌性蛋白酶等。其中细菌性来源的蛋白酶很多都已经商品化生产和销售了，如丹麦Novo公司生产的碱性蛋白酶Alcalase、 复合蛋白酶ftOtamex、中性蛋白酶Neutrase等，如江南大学的国明明2007年在“大豆肽的制备及其免疫调节作用的研究”一文中根据水解度、蛋白得率等条件筛选碱性蛋白酶水解低温豆粕制得免疫活性肽能刺激淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞吞噬能力，灌胃免疫力低下小鼠后，其抗体生成细胞和血清溶血素水平显著增加，同时得出免疫肽的活性与与水解度、 平均分子量并没有明显的相关性。故并不是水解越迅速，酶切位点越多，水解产物免疫活性越高，专一性强的胰蛋白酶虽然水解度不到10%，但是很多研究表明其水解产物的免疫效果好，并得到具有免疫活性物质的基因序列，如^shikaw从胰蛋白酶水解大豆蛋白的酶解物中可获得一种6肽，其一级结构为His-Cys-Gln-Arg-Pr0-Arg(HCQRPR)，这种肽能刺激巨噬细胞和多核白细胞的吞噬作用，具有免疫调节功能。进一步酶解HCQRPR，又获得了具有同样免疫调节作用的、一级结构为Gln-Arg-Pro-Arg^lRPR)的4肽。安徽医科大的李素萍采用胰蛋白酶对牛乳酪蛋白进行水解，原因一胰蛋白酶是机体内正常存在的活性物质，所以在胰蛋白酶水解酪蛋白后，不需要进行脱酸步骤，实验过程简便，高效，并且保证了在产物后续的性质实验中不影响产物活性。其二 采用胰蛋白酶对酪蛋白进行水解的最重要原因是，胰蛋白酶是机体内消化系统中最重要的消化酶，它们在食物的消化，吸收过程中发挥着重要作用。食物进入消化道后，都要经过胰蛋白酶等一系列消化酶的水解作用。而正是由于这一重要过程的存在，有许多可在体外发挥出高效生物活性的活性物质，在体内实验中， 由于不抗消化酶的水解，被分解成不能发挥生物活性或活性效果明显下降的水解产物而失去了原有的生物价值。胰蛋白酶是胰酶制剂的主要成分，胰蛋白酶的底物特异性对于免疫活性肽的产生是很重要的因素，且胰蛋白酶固定化技术已经基本成熟，可以节约成本，在工业生产中具有可行性。酶法生产功能物质也有一定的缺点，大部分酶，如碱性蛋白酶酶解一定时间，由于疏水性氨基酸暴露，产生苦味，此类疏水性氨基酸在多肽中所占比例越高，则苦味越明显。木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等植物蛋白酶具有酶解效率低，易失活等缺点，除此之外，多肽氨基酸序列，多肽分子量分布，多肽空间的结构也会对多肽的苦味产生一定的影响。中本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种含有大豆免疫肽的饲料添加剂，其特征在于以豆粕作为原料，通过挤压膨化的方法对粉碎过筛后的原料进行物理预处理，挤压膨化后的物料二次粉碎过筛后进行酶水解，水解液喷雾干燥后制得。
【技术特征摘要】
1.一种含有大豆免疫肽的饲料添加剂，其特征在于以豆粕作为原料，通过挤压膨化的方法对粉碎过筛后的原料进行物理预处理，挤压膨化后的物料二次粉碎过筛后进行酶水解，水解液喷雾干燥后制得。2.如权利要求1所述的饲料添加剂，其特征在于所述的原料为高温变性豆粕。3.一种制备权利要求1所述的饲料添加剂的方法，其特征在于以豆粕作为原料，粉碎过筛后采用了挤压膨化的方法对原料进行物理预处理；挤压膨化后的物料二次粉碎过筛后进行酶水解，水解液喷雾干燥后制得；具体地按以下步骤进行A、原料的粉碎，过筛；B、采用挤压膨化技术对粉碎过筛后的物料进行挤压膨化处理；C、挤压膨化后物料的二次粉碎、过筛；D、利用酶水解技术对二次粉碎、过筛后的物料进行水解处理；E、水解液经喷雾干燥后，即得本发明所述的产品。4.如权利要求3所述的饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述的原料为豆粕或高温变性豆粕。5.如权利要求3或4所述的饲料添加剂的制备方法，其特征在于所述原料粉碎成粉过 20目-60目筛网。6.如权利要求3或4所述的饲料添加剂的制备方法，其特征在于所...
【专利技术属性】
技术研发人员：江连洲，朱秀清，张智宇，许慧，吴瑕，
申请(专利权)人：黑龙江省大豆技术开发研究中心，
类型：发明
国别省市：93
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