本发明专利技术涉及一种干扰素诱导跨膜蛋白家族分子(Interferon-induced?transmembrane?protein，IFITMs)在制药工程中的新用途，更具体地说是干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)在制备治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染相关疾病的药物中的应用。本实验室利用分子生物学的方法分别构建了IFITM1、IFITM2、IFITM3的真核表达载体，通过体内外实验发现IFITM1、IFITM2、IFITM3均可显著抑制HBV的复制，其中以IFITM3效果最为显著。因此，本发明专利技术涉及IFITM3蛋白及其编码基因有望成为治疗乙型肝炎病毒相关疾病，减少乙型肝炎相关性疾病危害性的新型治疗药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生物化学物质在基因工程、蛋白质工程和制药工程中的新用途， 更具体地说就是干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM;3)及其核苷酸编码序列在制备治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染相关性疾病药物中的应用。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HBV)感染严重威胁人类健康，是导致肝炎、肝硬化和肝癌的重要诱因。全世界有3. 5亿乙型肝炎病毒携带者，中国约有1. 2亿HBV携带者，其中2000多万人为慢性乙肝患者，每年我国在慢性病毒性肝炎方面的直接治疗费用超过500亿人民币。HBV 感染不仅给患者及其家庭造成巨大的经济和精神负担，而且给国家造成了巨大的劳动力和经济损失，乃至导致严重的就业等社会问题。目前仍然缺乏有效的HBV治疗药物，疫苗虽然可起到一定的预防作用，但对已感染者及免疫耐受者无效。临床应用的抗HBV药物主要有干扰素以及一些核苷类似物。干扰素的治愈率有限，副作用较多，停用后通常会出现复发现象。核苷类似物如拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等是HBV DNA聚合酶的强抑制剂，能有效阻断病毒复制，但长期用药会导致病毒变异，产生耐药性，而且部分病人停药后会复发。因此，新型抗HBV药物的研制具有重大的社会和经济效益。乙肝病毒的基因组含有四个基本阅读框架，编码四种蛋白，它们分别是表面蛋白 (又称为表面抗原，HBs)、核心蛋白(核心抗原，HBc)、聚合酶和X蛋白(HBx)。乙肝病毒基因的表达受到病毒四个基本启动子和两个增强子的调控，即核心蛋白启动子/增强子 II(ENII/Cp)、前表面蛋白启动子(Spl)、表面蛋白启动子(Sp》和X蛋白启动子/增强子 (ENI/Xp)。细胞内一些转录调控因子通过结合上述调控区从而调控乙肝病毒基因的表达。 由于乙肝病毒基因组复制过程存在反转录，其模板是前基因组RNA(pgRNA)，因此，乙肝病毒基因的表达，特别是由Cp/ENII启动的pgRNA的转录将直接关系到乙肝病毒能否顺利复制和增殖，其在病毒的生活史中具有中心的地位。干扰素诱导跨膜蛋白蛋白家族分子是一类人体自身产生的蛋白，首次发现于1984 年，大多数细胞里这种蛋白的表达水平较低。最近研究显示其家族分子IFITMl、IFITM2和 IFITM3分子体外可显著抑制Hmi流感病毒、西尼罗河病毒和登革热病毒的感染。目前有关 IFITMs蛋白分子抗乙型肝炎病毒的作用尚未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种IFITMs蛋白家族分子用于治疗HBV感染相关疾病中的新用途。具体说，本专利技术涉及IFITM3蛋白及其核苷酸编码序列在制备治疗HBV感染引起的相关疾病的药物中的应用。本专利技术提供一种IFITM3蛋白的医药新用途以IFITM3蛋白3为活性成分，配以制药可接受的载体，制成多种制剂，用以治疗和预防HBV感染及其相关疾病。所说的制药可接受的载体包括药用稀释剂、稳定剂、赋形剂、吸收促进剂、促渗透齐U、蛋白酶抑制剂、阻聚剂等，如甘氨酸、PH7.0磷酸盐缓冲液、右旋糖酐、乳糖、氯化钠、柠檬酸、明胶、注射用水、生理盐水、脂质体、胆盐、脂肪酸、皂角苷、辛酸钠、月桂酸钠、聚丙烯酸、梭链孢酸衍生物(如牛磺酸二氢梭链孢酸盐、环糊精等)、甘油、A-zone、表面活性剂、 脂肪酸、胆盐、水杨酸钠、Zonula occludens toxin(ZOT)、甘胆酸钠、camostat mesilate、 bacitracin, aprotinin、大豆胰酶抑制剂、非离子表面活性剂、糖、甘露醇、山梨醇、PEG、人血清白蛋白等，可同时使用其中的一种或多种。本专利技术药物可制作适合于静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔给药、肺部给药、口服给药以及透皮给药用剂型，包括溶液型注射剂、冻干粉针、微球、粉末、粉雾剂、气雾剂、肠溶衣、毫微球、微乳、复乳等剂型。根据本专利技术，细胞内高表达IFITM3蛋白或其突变体蛋白均可特异性抑制乙肝病毒的复制和表达，IFITM3可能成为治疗及预防HBV感染相关疾病的新型生物工程药物。本专利技术另一方面提供了一种编码本专利技术蛋白的核苷酸序列。根据本专利技术，将含有 IFITM3表达序列标签(CDS)序列构建到pAAVMCS载体中与HBV复制载体共转染H印G2细胞，能够特异性抑制乙肝病毒的复制和表达，因此含有编码IFITM3核苷酸序列的载体可能成为制备治疗及预防HBV感染相关疾病的生物工程药物。本专利技术另一方面提供了一种基因治疗载体，所述构建物含有本专利技术上述核苷酸序列以及与所述核苷酸序列操作性相连的表达调控序列。本专利技术另一方面提供了一种细胞，所述细胞含有本专利技术上述的蛋白，核苷酸序列或构建物。本专利技术获得的蛋白能抑制ENI/Xp、ENII/Cp、Spl以及Sp2的活性，从而能够抑制乙肝病毒基因的表达和病毒DNA的复制，显示出该蛋白作为特异的抑制剂在抗乙肝病毒感染中的应用前景，为研制新型抗乙肝病毒感染药物奠定了基础。本专利技术的实施对严重危害人类健康的乙型肝炎及其相关疾病的治疗具有重要的社会效益和经济效益。附图说明为了更好的理解本专利技术的实质，下面将结合图表、附图来说明其在制药领域的新用途。图l!fepG2细胞内过表达IFITMs (IFITM1、IFITM2、IFITM3)蛋白分子细胞活力检测结果图2fepG2细胞内过表达IFITMs (IFITM1、IFITM2、IFITiO)蛋白分子抗HBV复制检测结果图3fepG2细胞内过表达IFITMs (IFITM1、IFITM2、IFITM3)蛋白分子抑制HBV启动子活性检测结果图4小鼠体内过表达IFITMs (IFITM1、IFITM2、IFITM3)蛋白分子抑制HBsAg表达检测结果图5小鼠体内过表达IFITMs (IFITM1、IFITM2、IFITM3)蛋白分子抑制HBeAg表达检测结果图6IFITM3蛋白全长或缺失突变体体外抗HBV复制检测结果具体实施例方式本专利技术提供了一种生物化学物质在基因工程、蛋白质工程和制药工程中的新用途，更具体地说就是干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM;3)在制备治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染相关性疾病药物中的应用，其特征在于，所述蛋白含选自以下的氨基酸序列，(a)序列表SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列；(b)对于SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列有一个或多个氨基酸缺失，替代或插入且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列；(c)相对于SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列有90%以上同源性且能抑制乙肝病毒基因表达和病毒基因组复制的氨基酸序列。在本专利技术中，术语“蛋白质”、“肽”或“多肽”可互换使用。它们指通过肽键或酰胺键连接在一起的两个或多个氨基酸的链，无论是否经过翻译后修饰(例如糖基化或磷酸化)。本专利技术中的全长IFITM3蛋白即是具有序列表SEQ ID NO :1所示氨基酸序列的蛋白。 然而，本专利技术定义内还包括与所述IFITM3具有进化相关性的其他物种的IFITM3蛋白。本专利技术的蛋白还包括了所述蛋白的具有相同或相似生物活性或功能的变异形式。 这些变异形式包括(但并不限于)相对于天然蛋白的氨基酸序列有若干个(通常为1-50 个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失，插入和/或取代。另外，所述缺失或插入(增加)也可发生在C末端和/或N末端(通常有本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种蛋白在制备抗乙型肝炎病毒感染药物中的新用途，其特征在于所述蛋白含有以下的氨基酸序列：１．１序列表ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的氨基酸序列；１．２相对于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的氨基酸序列有一个或多个氨基酸的突变、缺失、添加且能抑制ＨＢＶ转录或复制的氨基酸序列；１．３相对于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示的氨基酸序列有９０％以上同源性且能抑制ＨＢＶ转录或复制的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1. 一种蛋白在制备抗乙型肝炎病毒感染药物中的新用途，其特征在于所述蛋白含有以下的氨基酸序列1.1序列表SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列；1.2相对于SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列有一个或多个氨基酸的突变、缺失、添加且能抑制HBV转录或复制的氨基酸序列；1.3相对于SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列有90%以上同源性且能抑制HBV转录或复制的氨基酸序列。2.一种核苷酸序列，其特征在于所述核苷酸序列编码权利要求1所述的蛋白。3.一种基因治疗载体，其特征在于所述载体含有权利要求2所...
【专利技术属性】
技术研发人员：王升启，王学军，李丹丹，赵海峰，李英，杨静，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：11
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