S100A10mRNA在α-干扰素诱导抑郁症中的应用制造技术

本发明专利技术提供了S100A10mRNA在α-干扰素诱导抑郁症中的应用，通过实时定量荧光PCR方法，检测患者PBMC中S100A10 mRNA表达水平，在患者接受IFN-α治疗前，取其外周血，分离PBMC，无菌培养，加入终浓度为1000国际单位/mL的人源重组IFN-α刺激PBMC，同时设加生理盐水的对照组，于细胞培养18h后检测PBMC中S100A10 mRNA水平，评价患者在长期接受IFN-α治疗过程中产生精神抑郁的发病风险。本发明专利技术技术为患者在接受IFN-α治疗前预测其发生IFN-α诱导抑郁的风险提供了技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种S100A10 mRNA在α-干扰素诱导抑郁症中的应用。
技术介绍
干扰素-α(Interferon-α,IFN-α)以其显著的抗病毒和抗肿瘤作用，在临床上常用于病毒感染或肿瘤疾病的治疗，如慢性丙型肝炎、慢性乙型肝炎、黑色素瘤和乳腺癌等，但是IFN-α的长期使用(一般超过2-3个月)往往会引起部分患者发生不同程度的精神抑郁，这给患者带来额外的痛苦，抑郁严重者甚至会出现自杀行为，许多人因出现抑郁症状而被迫终止IFN-α治疗，这大大限制了IFN-α的临床应用。因此，寻找一种有效的方法来预测IFN-α诱导抑郁的发生几率，以便及时采取措施来避免产生抑郁，显得尤为重要。目前，在IFN-α诱导抑郁症的临床诊断方面，主要采用传统的心理量表如常用的汉密顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale，HAMD)，Zung抑郁症自测量表(Zung Depressi on Scale,ZDS)。上述方法具有一定的主观性，且当患者出现症状时往往已经形成抑郁状态；实验室诊断方面，IFN-α长期治疗可以因起外周血促炎因子IL-1(白细胞介素-1)、IL-6(白细胞介素-6)和TNF-α(肿瘤坏死因子-α)的水平升高，以及2’3-吲哚胺双加氧酶的活化和5-羟色胺的合成减少。但以上实验室指标在判断抑郁发病风险方面特异性不强，多种病毒、细菌感染性疾病(如：疱疹)和过敏反应也可引起上述指标的升高。总之，目前国内、外还没有报道任何可以有效预测IFN-α诱导性精神抑郁发病风险的检测技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了S100A10mRNA(messenger ribonucleic acid)在α-干扰素诱导抑郁症上的应用，为患者在接受IFN-α治疗前预测其发生IFN-α诱导抑郁的风险提供了技术支持。本专利技术具体通过以下技术方案实现：本专利技术提供了S100A10mRNA在预测α-干扰素诱导抑郁症发病风险中的应用，其通过时定量荧光PCR方法，检测受测者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中S100A10mRNA表达水平来完成，具体通过以下方法：1)采集细胞活力>95％的人PBMC；2)PBMC培养和IFN-α刺激：将采集的PBMC转入DMEM培养基培养，并加入用无菌PBS缓冲液稀释的人源重组IFN-α-2b针剂，混匀后置于含5％二氧化碳、37℃细胞培养箱中培养18小时。3)PBMC mRNA提取：将培养的人PBMC用无核酶枪头吹打，使之彻底裂解，并用氯仿离心分离，取上清液加入等体积异丙醇混匀，并用0.5％DEPC水溶解。4)PBMC mRNA经逆转录合成cDNA；所述的逆转录体系为：5×M-MLV Buffer：5μL、10mM dNTPs：2μL、Oligo dT：3μL、M-MLV逆转录酶：1μL、RNA：13.5μL、RNA酶抑制剂：0.5μL。5)实时定量PCR扩增cDNA中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)及S100A10mRNA基因；所述的实时荧光定量PCR检测程序为：第一步95℃2分钟，第二步95℃秒、2060℃秒1450个循环。S100A10上游引物序列：5’-CCCAAGCTTATGCCATCTCAAAT GG-3’下游引物序列：5’-CCGGAATTCCTACTTCTTTCCCTTC-3’扩增片段长度为319bp；GAPDH上游引物序列：5’-TCAACAGCGACAC CCACTCC-3’，下游引物序列：5’-TGAGGTCCACCACCCTGTTG-3’扩增片段长度为126bp。6)利用实时荧光定量PCR循环阈值Ct计算相关基因的变化情况，变化倍数≥0.8为无明显抑郁风险；0.6≤变化倍数<0.8为轻度抑郁风险；0.4≤变化倍数<0.6为中度抑郁风险；变化倍数<0.4为重度抑郁风险。步骤(6)中具体的计算方法为：变化倍数＝2-△△Ct，其中△△Ct＝给药组Ct－对照组Ct。本专利技术的有益效果为：提供S100A10mRNA在预测α-干扰素诱导抑郁症上发病风险的应用方法，为患者接受α-干扰素治疗时避免抑郁症的发病提供技术支持。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明，以下所述，仅是对本专利技术的较佳实施例而已，并非对本专利技术做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本专利技术的保护范围内。实施例11)患者PBMC采集①于患者接受IFN-α治疗前，静脉无菌采集其外周血5mL，装入10mL抗凝管内(注意：血液标本若存放4，℃则不能超过12小时)；②无菌环境下，将采集血液中缓慢加入5mL淋巴细胞分离液上，室温，水平离心500×g 20分钟，此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是PBMC，移液器吸取液体中间白色PBMC部分，获得PBMC(注意：整个过程无菌操作)；③将PBMC加入不完全DMEM培养基(DMEM培养基为商品，可购买获得，不再列出成分)中，300×g 20分钟，弃上清；④用含10％小牛血清(56℃处理30分钟)、终浓度100U/mL青霉素和终浓度100μg/mL链霉素的完全DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×106个/mL(正常操作下每mL人外周血可获得1×106～2×106个PBMC)，同时用1％台盼蓝染色检测细胞活力(细胞活力>95％为合格提取)。2)PBMC培养和IFN-α刺激①将上一步PBMC加入24孔板，每孔2～5×105个PBMC，补充完全DMEM培养基至总体积为1mL，共做10个复孔；②无菌PBS缓冲液稀释人源重组IFN-α-2b针剂至2×105国际单位(IU)/mL；③上述10个细胞培养孔内，选取5个作为给药组，加入终浓度1000IU/mL人源重组IFN-α-2b(上一步2×105IU/mL IFN-α-2b加入5μL)，加样枪轻轻吹匀；④剩余5个孔设为对照组，均加入5μL P BS缓冲液；⑤将PBMC置于含5％二氧化碳，37细℃胞培养箱中培养18小时。3)PBMC mRNA提取①将培养的PBMC分别本文档来自技高网...

【技术保护点】
S100A10mRNA在α‑干扰素诱导抑郁症中的应用。

【技术特征摘要】
1.S100A10mRNA在α-干扰素诱导抑郁症中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：实时定量荧光P
CR方法，检测PBMC中S100A10mRNA表达水平来判断α-干扰素
诱导抑郁症的发病风险，具体通过以下方法：
1)采集细胞活力>95％的PBMC；
2)PBMC培养和IFN-α刺激；
3)PBMC mRNA提取；
4)PBMC mRNA经逆转录合成cDNA；
5)实时定量PCR扩增cDNA中GAPDH及S100A10mRNA基
因；
6)利用实时荧光定量PCR循环阈值Ct计算相关基因的变化情
况，变化倍数≥0.8为无明显抑郁风险；0.6≤变化倍数<0.8为轻度抑
郁风险；0.4≤变化倍数<0.6为中度抑郁风险；变化倍数<0.4为重度
抑郁风险。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：步骤(2)具体为
将采集的PBMC转入DMEM培养基培养，并加入用无菌PBS缓冲
液稀释的人源重组IFN-α-2b针剂，置含5％二氧化碳...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辉，郭继强，张文，杨波，王洁，丁华夏，李桂芬，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：河南;41