本发明专利技术涉及一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白及其生产方法和用途。所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其能够结合于FcεRI分子上的IgE的结合位点。本发明专利技术提供的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白能够用于过敏疾病，如过敏哮喘、鼻炎等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及用于治疗过敏疾病的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白以及制备方法和应用。
技术介绍
过敏疾病也称变态反应性疾病，属于常见疾病，发病时还可引起多种并发症。常见过敏疾病主要有过敏性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性休克等。随着全球范围内的空气和环境的恶化，发病率呈逐年上升的趋势。过敏疾病的发生主要由于机体内的过敏反应细胞(血液中的嗜碱性粒细胞和组织间隙中的肥大细胞)受抗原性物质(过敏原)，如花粉颗粒、尘螨、食物(牛奶、鸡蛋、虾蟹等)、药物(青霉素、磺胺等)、寄生虫等刺激后，释放大量的组胺等血管活性和促炎介质，这些介质作用于人体不同组织和器官，引起相应的临床症状，如作用于血管引起血管舒张并使血管通透性增加，作用于支气管引起支气管痉挛。参见文献，Fang C,Corrigan CJ,Ying S.The treatment targets of asthma:from laboratory to clinic.Inflammation Allergy-Drug Targets 2008,7:119-128并如图1所示，当体质差的人，或者说易过敏人群，首先接触到过敏原时，抗原递呈细胞通过抗原的递呈活化原态辅助T细胞(Th0)，Th0细胞进一步分化成Th1，Th2，Th17和TReg细胞，其中，Th2细胞释放IL-4和IL-13，并在B细胞生产过敏原特异的IgE抗体中发挥关键作用(Neurath MF,Finotto S,Glimcher LH.The role of Th1/Th2 polarization in mucosal immunity.Nat Med 2002,8:567-573.)。IgE抗体是过敏反应发生的关键分子。 目前已经发现两种IgE受体，高亲和力受体FcεRI(Ravetch JV.Fc receptors.Curr Opin Immunol 1997,9:121-125.)和低亲和力受体FcεRII(CD23)(Lemieux GA,Blumenkron F,Yeung N,Zhou P,Williams J,Grammer AC,Petrovich R,Lipsky PE,Moss ML,Werb Z.The low affinity IgE receptor(CD23)is cleaved by the metalloproteinase ADAM10.J Biol Chem 2007,282:14836-14844.)。高亲和力受体FcεRI表达在肥大细胞、嗜碱性粒细胞的表面，属于免疫球蛋白超家族，为四聚体蛋白， 含有α链、β链和通过二硫键相连的两个γ链。α链为配基结合链，其胞外功能区能与IgE重链恒定区第三域的末端部分相作用(Hakimi J,Seals C,Kondas JA,Pettine L,Danho W,Kochan J.The alpha subunit of the human IgE receptor(FcεRI)is sufficient for high affinity IgE binding.J Biol Chem 1990,265:22079-22081，Blank U,Ra CS,Kinet JP.Characterization of truncated alpha chain products from human,rat,and mouse high affinity receptor for immunoglobulin E.J Biol Chem 1991,266:2639-2646，Riske F,Hakimi J,Mallamaci M,Griffin M,Pilson B,Tobkes N,Lin P,Danho W,Kochan J,Chizzonite R.High affinity human IgE receptor(Fc epsilon RI).Analysis of functional domains of the alpha-subunit with monoclonal antibodies.J Biol Chem 1991,266:11245-11251.)。β链和γ链可介导信号转导(Shirakawa T,Li A,Dubowitz M,Dekker JW,Shaw AE,Faux JA,Ra C,Cookson W,Hopkin JM.Association between atopy and variants of theβsubunit of the high–affinity immunoglobulin E receptor.Nat Genet 1994,7:125-130.)。其中，β链跨膜4次，其N端和C端均位于胞浆内；γ链为跨膜蛋白，胞外的N段经二硫键相连成二聚体。β链和γ链胞浆内的C端末端分别含有免疫受体酪氨酸活化基序(Immunoreceptor tyrosine-based activation motif，ITAM)，与受体的信号传导相关。现已经鉴定出人IgE与人FcεRI相互作用的特异性氨基酸Arg-408、Ser-411、Lys-415、Glu-452、Arg-465和Met-469(Presta L,Shields R,O'Connell L,Lahr S,Porter J,Gorman C,Jardieu P.The binding site on human immunoglobulin E for its high affinity receptor.J Biol Chem 1994,269:26368-26373.)。IgE与FcεRI的作用具有非常高的特异性，结合常数约为10-10mol/L(Kinet JP.THE HIGH-AFFINITY I g E RECEPTOR(FcεRI):From Physiology to Pathology.Annu Rev Immunol 1999,17:931-972。Galli SJ,Kalesnikoff J,Grimbaldeston MA,Piliponsky AM,Williams CMM,Tsai M.Mast cells as“tunable”effector and immunoregulatory cells:recent advances.Annu Rev Immunol 2005,23:749-786.)。低亲和力受体FcεRII(CD23)表达在炎症细胞的表面，包括嗜酸粒细胞、粒性白细胞、B淋巴细胞、血小板和气道平滑肌细胞的表面。FcεRII不属于免疫球蛋白超家族，是氨基端在胞内的跨膜蛋白。现已知道有两种形式FcεRII，分别称为FcεRIIa和FcεRIIb。它们的胞外部分相同，胞内N端存在差异。FcεRIIa通常表达在B细胞的表面，FcεRIIb则表达在T细胞、B细胞、单核细胞和经IL-4诱导的嗜酸粒细胞表面。FcεRII与IgE抗体的生成有关，在过敏性疾病的炎症反应中发挥作用。 IgE通过与高亲和力受本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其能够结合于FcεRI分子上的IgE的结合位点。
【技术特征摘要】
1.一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其能够结合于FcεRI分子上的
IgE的结合位点。
2.如权利要求1所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其包含了人人
IgE-CH3中与人FcεRI相互作用的特异性氨基酸。
3.如权利要求1所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其包含了人IgE
的CH2-CH3-CH4区域。
4.如权利要求1所述的所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其包含人
IgE的CH2-CH3-CH4区域任何部位氨基酸残基片段进行突变修饰获得的变异体。
5.如权利要求1所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其如序列表中
SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其中至少有一个
核酸密码子采用CHO细胞进行突变。
7.如权利要求6所述的人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其所指的CHO
细胞包括CHO-K1或CHO-DG44。
8.如权利要求1所述人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)片段蛋白，其如序列表中
SEQ ID NO:2所示的核甘酸序列。
9.如权利要求1至8任一项权利要求所述的一种人免疫球蛋白ε重链恒定区(hIgE Fc)
片段蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将编码hIgE Fc核苷酸序列可操作地连于表达载体，得到hIgE Fc重组表达载体；
(2)将步骤(1)中的重组表达载体转录CHO细胞，筛选获得表达hIgE Fc的工程细胞
株；
(3)在合适的条件下培养步骤(2)获得的工程细胞株；
【专利技术属性】
技术研发人员：孙祥明，王红勋，祝道成，包骏，
申请(专利权)人：上海科新生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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