促进由成纤维细胞生成ECM和/或促进生物体系中成纤维细胞迁移制造技术

本发明专利技术涉及促进生物体系中由一种或多种成纤维细胞生成细胞外基质的一种或多种成分和/或促进生物体系中一种或多种成纤维细胞的迁移的方法。所述方法包括将生物体系中的一种或多种成纤维细胞暴露于有效量的具有过氧化物酶活性的物质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及促进生物体系中由成纤维细胞生成细胞外基质的一种或多种成分的 方法、组合物以及基材，并涉及用于促进生物体系中成纤维细胞的迁移的方法、组合物以及基材。
技术介绍
脊椎动物的细胞外基质(ECM)是复杂的结构体，其围绕并支持在哺乳动物组 织中发现的细胞。哺乳动物组织的ECM包括结构蛋白(胶原蛋白和弹性蛋白)、特异性 (specialized)蛋白(原纤维蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白)以及蛋白多糖。主要的纤维结 构蛋白胶原蛋白和弹性蛋白负责组织强度和弹性，并在促进细胞生长和分化中起显著的作 用。胶原蛋白是身体中最丰富的蛋白，并占总身体蛋白的约50%。构成所述细胞外基质的大分子由结缔组织细胞例如在组织中广泛分布的成纤维 细胞生成、分泌以及沉积。ECM丧失可在许多条件下发生。例如，ECM丧失导致体积减损(volumedepletion) 以及软组织外形缺陷(contour defect)、深层皱纹、鱼尾纹(crowsfeet)、法令纹 (nasolabial fold)以及木偶纹(marionette grooves)。体积减损以及软组织外形缺陷可 由萎缩性病症、痤疮后的疤痕、外伤性疤痕、外科手术疤痕、水痘疤痕引起。通常，将填充物用于这些病症的治疗。填充物可以是自体的(即来自对象自身)、 异源的(动物来源或人类来源)或异质的(化学性质的生物材料)。通常将填充物注射入 或植入需要扩增(augmentation)的皮肤区域。它们可被用于美容性(cosmetic)改善如丰 唇、鼻整形术、颊部扩增和颧部扩增、隆下颚、泪槽外形修整、吸脂术缺陷、眼眶扩大、口腔软 组织牙脊扩增、乳头扩增以及阴茎成形术。但是，在ECM丧失的治疗中仍存在大量不足。例如，获得一定量的ECM蛋白如用于 商业应用的胶原蛋白可涉及从一些来源例如牛或猪来源的皮肤、蹄等中提取所述蛋白质。 由于它们具有造成疾病和免疫原性反应的危险，因此通常不期望将这些物质用于人类。另 一方面，人体组织也带有一些疾病转移的危险，并且只能以有限的量获得。由于细胞培养物 的高成本以及胶原蛋白的低产率，在细胞培养物中制备非免疫原性的人类胶原蛋白的体外 方法通常不被认为是商业可靠的。还有一些对于提供组织的扩增、修复和/或愈合将是有利的情形。例如，创伤表 示了这样的情形在许多情况下，创伤的扩增和/或修复将是有利的。将从有助于扩增、 修复和/或愈合的物质中获益的创伤的实例包括部分厚度和全厚度创伤、褥疮(pressure ulcer)、静脉性溃疡、糖尿病溃疡、慢性血管溃疡、外科手术创伤(供体部位/移植物、莫氏 外科手术后、激光外科手术后、足部开裂伤)、外伤性创伤(擦伤、裂伤、二度和三度烧伤、皮 肤撕裂伤)以及引流创伤。创伤位点的多种特异性细胞的募集(recruitment)是创伤愈合过程的关键部分。该过程需要细胞外基质和基底膜沉积、血管再生、选择性蛋白酶活动以及上皮再形成。所述 愈合过程的一个关键组成部分是成纤维细胞的刺激，以生成所述细胞外基质。该细胞外基 质构成进行发育以修复创伤区域的结缔组织的主要成分。持续需要开发促进创伤愈合的方 法和药物。由此，需要对于涉及ECM丧失病症的新治疗方法、或对于可以从组织扩增和/或修 复中获益的病症的新治疗方法。本专利技术涉及用于治疗所述病症的方法和组合物。在此作为现有技术所给出的专利文件或其它材料的参考资料并不能被认为是承 认所述文件或材料在任何一项权利要求的优先权日时是已知的，或者其所包含的信息是公 知常识的一部分。
技术实现思路
本专利技术基于以下的发现具有过氧化物酶活性的物质在体内以及体外能够刺激由 成纤维细胞生成细胞外基质的多种成分。此外，具有过氧化物酶活性的物质能够促进成纤 维细胞的迁移，并由此可将其用于使成纤维细胞在某区域内繁殖。因此，本专利技术可用于促进细胞外基质的一种或多种成分在需要治疗的组织中的生 成，和/或促进一种或多种成纤维细胞迁移入需要治疗的组织中。因此，可将具有过氧化物 酶活性的物质用以促进体内纤维生成响应，并因此可将其用以促进组织生成、组织再生、组 织修复以及组织支持中的一项或多项。就此而言，本研究还证实了不但可以通过将所述物质直接引入组织中而将所述物 质递送至成纤维细胞，而且还可通过将所述物质连同基材一起递送而促进纤维生成响应。 在该情况中，细胞外基质的沉积和/或成纤维细胞向所述基材中的迁移通过具有过氧化物 酶活性的物质的作用而得到促进。因此，本专利技术提供促进生物体系中由一种或多种成纤维细胞生成细胞外基质的一 种或多种成分，和/或促进生物体系中一种或多种成纤维细胞迁移的方法，所述方法包括 将生物体系中的所述一种或多种成纤维细胞暴露于有效量的具有过氧化物酶活性的物质。本专利技术还提供在促进对象组织中的纤维生长响应的方法，所述方法包括向组织中 的一种或多种成纤维细胞递送有效量的具有过氧化物酶活性的物质。本专利技术还提供促进对象中的组织中的组织生成、组织再生、组织修复以及组织支 持中的一项或多项的方法，所述方法包括向所述组织递送有效量的具有过氧化物酶活性的 物质。本专利技术还提供用于治疗需要组织生成、组织再生、组织修复以及组织支持中的一 项或多项的对象的方法，所述方法包括向需要治疗的对象组织递送有效量的具有过氧化物 酶活性的物质。本专利技术还提供促进包括一个或多个间隙(interstice)的三维基材被一种或多种 成纤维细胞浸润(infiltration)的方法，所述方法包括将所述三维基材与具有过氧化物 酶活性的物质联合，并将所述具有所述具有过氧化物酶活性的物质的基材暴露于一种或多 种成纤维细胞，由此促进所述基材的间隙被所述一种或多种成纤维细胞浸润。本专利技术还提供用于组织生成、组织再生、组织修复以及组织支持中的一项或多项 的基材，所述基材包括与所述基材耦合或联合的具有过氧化物酶活性的物质。本专利技术还提供促进细胞外基质的一种或多种成分在包括一个或多个间隙的三维 基材中的沉积的方法，所述方法包括将所述三维基材与具有过氧化物酶活性的物质联合， 并将所述具有所述具有过氧化物酶活性的物质的基材暴露于一种或多种成纤维细胞，由此 通过所述一种或多种成纤维细胞促进细胞外基质的一种或多种成分在所述基材的间隙中 沉积。本专利技术还提供具有过氧化物酶活性的物质在制备用于治疗需要组织生成、组织再 生、组织修复以及组织支持中的一项或多项的对象的药物中的应用。本专利技术还提供用于治疗需要组织生成、组织再生、组织修复以及组织支持中的一 项或多项的对象的组合物，所述组合物包含具有过氧化物酶活性的物质。本专利技术还提供鉴定能够促进生物体系中由成纤维细胞生成细胞外基质的一种或 多种成分的物质和/或能够促进生物体系中成纤维细胞迁移的物质的方法，所述方法包 括(i)提供具有过氧化物酶活性的物质；(ii)测定所述物质促进生物体系中由成纤维细胞生成细胞外基质的一种或多种 成分的能力，和/或所述物质促进生物体系中成纤维细胞迁移的能力；并且(iii)鉴定能够促进由成纤维细胞生成细胞外基质的一种或多种成分，和/或能 够促进生物体系中成纤维细胞迁移的物质。本专利技术还提供促进生物体系中由一种或多种成纤维细胞生成细胞外基质的一种 或多种成分和/或促进生物体系中一种或多种成纤维细胞迁移的方法，所述方法包括将 生物体系本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．促进生物体系中由一种或多种成纤维细胞生成细胞外基质的一种或多种成分和／或促进生物体系中一种或多种成纤维细胞的迁移的方法，所述方法包括将生物体系中的一种或多种成纤维细胞暴露于有效量的具有过氧化物酶活性的物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.促进生物体系中由一种或多种成纤维细胞生成细胞外基质的一种或多种成分和/ 或促进生物体系中一种或多种成纤维细胞的迁移的方法，所述方法包括将生物体系中的一 种或多种成纤维细胞暴露于有效量的具有过氧化物酶活性的物质。2.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞外基质的一种或多种成分选自胶原蛋白I、 胶原蛋白III、胶原蛋白IV、胶原蛋白VI、纤连蛋白、弹性蛋白、层粘连蛋白、蛋白多糖、透明 质酸、和新生的细胞外基质或其功能性成分中的一种或多种。3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述具有过氧化物酶活性的物质是具有过氧化 物酶活性的蛋白。4.如权利要求1至3之一所述的方法，其中所述生物体系是人类或动物对象。5.如权利要求4所述的方法，其中通过将所述具有过氧化物酶活性的物质递送至人类 或动物对象中需要治疗的组织，从而将所述一种或多种成纤维细胞暴露于所述物质。6.如权利要求5所述的方法，其中通过植入需要治疗的组织和/或通过植入靠近需要 治疗组织的区域而递送所述物质。7.如权利要求5所述的方法，其中通过局部给药至需要治疗的组织和/或通过局部给 药至靠近需要治疗组织的区域而递送所述物质。8.如权利要求5至7之一所述的方法，其中将所述具有过氧化物酶活性的物质与基材 一起递送或与基材联合递送。9.如权利要求8所述的方法，其中在将所述基材递送至所述对象时，所述具有过氧化 物酶活性的物质从所述基材释放。10.如权利要求8或9所述的方法，其中所述基材是液体、凝胶、半固体基材或固体基材。11.如权利要求8至10之一所述的方法，其中所述的基材是生物相容的和/或可生物 降解的。12.如权利要求8至11之一所述的方法，其中所述的基材是用于组织生成、组织再生、 组织修复、组织支持和填充物中的一项或多项的模板。13.如权利要求12所述的方法，其中所述模板是包括一个或多个间隙的三维基质。14.如权利要求13所述的方法，其中所述模板选自细胞外基质、ECM来源的三维基质、 组织代用品、天然或合成的生物替代组织、同种异体移植物、自体移植物、创伤闭合装置、异 种移植物、皮肤代用品、天然或合成的三维聚合物以及创伤敷料。15.如权利要求12所述的方法，其中所述填充物是胶原蛋白、透明质酸、聚L-乳酸、包 括自体脂肪的脂肪、羟基磷灰石钙、天然或合成的聚合物、包括自体供体组织或异源供体组 织的供体组织、以及细胞外基质或其成分中的一种或多种。16.如权利要求8至15之一所述的方法，其中在递送至需要治疗的组织之前、在递送至 需要治疗的组织时、以及在递送至需要治疗的组织之后中的一种或多种情况下将所述基材 用具有过氧化物酶活性的物质进行预处理。17.如权利要求5至16之一所述的方法，其中所述具有过氧化物酶活性的物质与一种 或多种外源成纤维细胞、角化细胞、内皮细胞以及附器一起递送，并且其中所述一种或多种 外源成纤维细胞、角化细胞以及附器任选地是自体的。18.如权利要求17所述的方法，其中在递送至所述对象之前，将所述一种或多种外源成纤维细胞用具有过氧化物酶活性的物质进行预处理。19.如权利要求17或18所述的方法，其中所述一种或多种外源成纤维细胞表达和/或 分泌具有过氧化物酶活性的蛋白。20.如权利要求5至19之一所述的方法，其中将所述具有过氧化物酶活性的物质与甾 体抗炎药、钙调神经磷酸酶抑制剂、抗组胺剂、抗微生物剂、抗生素、生长因子、生长促进剂、 血管生成促进剂、蛋白酶抑制剂、抗氧化剂、麻醉剂、镇痛剂以及趋化剂中的一种或多种一 起进行递送。21.如权利要求1至20之一所述的方法，其中将所述方法用以促进在需要治疗的组织 中细胞外基质的一种或多种成分的生成和/或促进一种或多种成纤维细胞迁移入需要治 疗的组织。22.如权利要求1至21之一所述的方法，其中将所述的方法用以促进创伤的再生、修复 和/或愈合中的一项或多项，用以矫正真皮缺损，以及用以扩增组织。23.在对象的组织中促进纤维形成响应的方法，所述方法包括将有效量的具有过氧化 物酶活性的物质递送至所述组织中的一种或多种成纤维细胞。24.促进在对象的组织中的组织生成、组织再生、组织修复和组织支持中的一项或多项 的方法，所述方法包括将有效量的具有过氧化物酶活性的物质递送至所述组织。25.治疗需要组织生成、组织再生、组织修复和组织支持中的一项或多项的对象的方 法，所述方法包括将有效量的具有过氧化物酶活性的物质递送至需要治疗的对象中的组幺口 /Ν ο26.如权利要求23至25之一所述的方法，其中所述具有过氧化物酶活性的物质是具有 过氧化物酶活性的蛋白。27.如权利要求23至26之一所述的方法，其中所述对象是人类或动物对象。28.如权利要求23至27之一所述的方法，其中通过植入所述组织和/或通过植入靠近 所述组织的区域而递送所述物质。29.如权利要求23至28之一所述的方法，其中通过局部给药至所述组织和/或通过局 部给药至靠近所述组织的区域而递送所述物质。30.如权利要求23至29之一所述的方法，其中所述具有过氧化物酶活性的物质与基材 一起递送或与基材联合递送，包括当与所述基材联合时任选地可从所述基材释放。31.如权利要求30所述的方法，其中所述基材是液体、凝胶、半固体基材或固体基材。32.如权利要求30或31所述的方法，其中所述基材是生物相容的和/或可生物降解的。33.如权利要求30至32之一所述的方法，其中所述基材是用于组织生成、组织再生、组 织修复、组织支持和填充物中的一项或多项的模板。34.如权利要求33所述的方法，其中所述模板是包括一个或多个间隙的三维基质。35.如权利要求34所述的方法，其中所述的模板选自细胞外基质、ECM来源的三维 基质、组织代用品、天然或合成的生物替代组织、同种异体移植物、自体移植物、创伤闭合装 置、异种移植物、皮肤代用品、天然或合成的三维聚合物以及创伤敷料。36.如权利要求33所述的方法，其中所述填充物是胶原蛋白、透明质酸、聚L-乳酸、包 括自体脂肪的脂肪、羟基磷灰石钙、天然或合成的聚合物、包括自体供体组织或异源供体组织的供体组织、以及细胞外基质或其成分中的一种或多种。37.如权利要求30至36之一所述的方法，其中在递送至需要治疗的组织之前、在递送 至需要治疗的组织时、以及在递送至需要治疗的组织之后中的一种或多种情况下将所述基 材用具有过氧化物酶活性的物质进行预处理。38.如权利要求23至37之一所述的方法，其中所述具有过氧化物酶活性的物质与一种 或多种外源成纤维细胞、角化细胞、内皮细胞以及附器一起递送，并且其中所述一种或多种 外源成纤维细胞、角化细胞以及附器任选地是自体的。39.如权利要求38所述的方法，其中在递送至所述对象之前，将所述一种或多种外源 成纤维细胞用具有过氧化物酶活性的物质进行预处理。40.如权利要求38或39所述的方法，其中所述一种或多种外源成纤维细胞表达和/或 分泌具有过氧化物酶活性的蛋白。41.如权利要求23至40之一所述的方法，其中将所述具有过氧化物酶活性的物质与甾 体抗炎药、钙调神经磷酸酶抑制剂、抗组胺剂、抗微生物剂、抗生素、生长因子、生长促进剂、 血管生成促进剂、蛋白酶抑制剂、抗氧化剂、麻醉剂、镇痛剂以及趋化剂中的一种或多种一 起递送。42.如权利要求23至41之一所述的方法，其中将所述的方法用以促进组织中的细胞外 基质的一种或多种成分的生成和/或促进一种或多种成纤维细胞迁移入组织。43.促进包括一个或多个间隙的三维基材被一种或多种成纤维细胞浸润的方法，所述 方法包括将所述三维基材与具有过氧化物酶活性的物质联合，并将所述具有所述具有过氧 化物酶活性的物质的基材暴露于一种或多种成纤维细胞，由此促进所述基材间隙被一种或 多种成纤维细胞浸润。44.如权利要求43所述的方法，其中所述具有过氧化物酶活性的物质是具有过氧化物 酶活性的蛋白。45.如权利要求43或44所述的方法，其中所述三维基材是生物相容的和/或可生物降 解的。46.如权利要求43至45之一所述的方法，其中所述三维基材是用于组织生成、组织再 生、组织修复、组织支持和填充物中的一项或多项的模板。47.如权利要求46所述的方法，其中所述三维基材选自细胞外基质、ECM来源的三维 基质、组织代用品、天然或合成的生物替代组织、同种异体移植物、自体移植物、创...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·E·雷纳，M·O·德尼奇洛，R·I·W·奥斯蒙德，A·T·米切尔，R·A·博罗维奇，
申请(专利权)人：TGR生物科学私人有限公司，
类型：发明
国别省市：AU