使用多基质的分析物检测制造技术

本公开提供了用于检测样品中的分析物的方法和/或试剂盒。一些实施方式提供了分析物检测系统、试剂盒和使用其的方法，包括：包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用多基质的分析物检测交叉引用本申请要求2015年10月2日提交的美国临时专利申请号62/236,676和2015年10月5日提交的美国临时专利申请号62/237,522的优先权益。前述所有关联申请被整体引入作为参考。
本公开涉及检测样品中的分析物的方法。序列表本申请包含以ASCII形式电子提交的序列表，其被整体引入作为参考。所述创建于2016年9月27日的ASCII拷贝被命名为013018-0008-228_SL.txt，大小2,227b。
技术介绍
样品中分析物的检测在许多行业中是重要的，包括例如研究、免疫学、水质评估、环境科学和工程学、医学等。参见例如美国专利号9,086,407和美国专利申请号15/222,376，其被整体引入作为参考。可以使用用于检测样品中的分析物的不同方法，包括，例如，高压液相色谱法(HPLC)、质谱法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)。尽管HPLC和质谱法可用于根据电荷和/或大小来检测分析物，但ELISA可用于检测基于分析物上可被检测试剂(例如，抗体，适配子等)捕获和识别的抗原的分析物，使其成为重要的检测方法，特别是在生命科学领域。ELISA可用于检测样品中分析物的存在、不存在或数量。尽管常规ELISA是广泛使用的方法，但仍然需要开发具有较低成本和减少的测定时间的改进的测定方法。首先，常规ELISA可能需要昂贵的捕获和检测试剂，如抗体。因此，对抗体的需求降低的技术可以减少检测费用。另外，常规的ELISA需要至少2小时才能完成，并且通常包括至少2次独立的孵育和洗涤步骤。因此，希望提供一种用于检测样品中的分析物的方法，与常规ELISA相比，其花费较少的时间和投入来执行，同时维持或提高检测的灵敏度。本说明书中对任何现有技术的引用不是也不应被视为承认或以任何形式暗示该现有技术在任何国家构成公知常识的一部分。专利技术概述某些实施方式可以提供用于检测分析物的系统，该系统包含：包含至少一个标签(例如生物素或肽标签)并能够结合分析物的第一试剂(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白)，共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白)，包含能够结合带标签的第一试剂的结合子(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白；抗生物素蛋白，链霉亲和素，抗生物素蛋白衍生物或链霉亲和素衍生物)的第一微珠，和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂(例如，单克隆抗体、多克隆抗体、多价抗体、嵌合抗体、多特异性抗体或其抗体片段；适配子；affimer；蛋白；蛋白受体；蛋白受体；蛋白配体；或包含例如免疫球蛋白融合伴侣、稳定受体或配体的融合伴侣或提供结合目标的融合伴侣的融合蛋白)的第二微珠。某些实施方式可以提供用于检测分析物的系统，该系统包含：多个能够结合分析物的第一试剂和多个能够结合分析物的第二试剂。每个第一试剂可以包括：能够结合分析物的第一抗原性方面的第一区域和多个第一标签。每个第二试剂可以包括：能够结合分析物的第二抗原性方面的第二区域和多个共价结合的肽第二标签。该系统可进一步包含第一微珠和第二微珠。第一微珠(例如乳胶微珠；例如包被或含有配置为在一个或多个光波长下发射单线态氧的基质的微珠)可以包括多个在其上缀合的结合子，其中该多个结合子中的至少一个能够选择性结合该多个第一标签中的至少一个。第二微珠(例如乳胶微珠；例如含有或包被配置为在用单线态氧激活然后照射后在预设的波长下发射光的铕或铽化合物的微珠)可以包括在其上缀合的多个抗肽试剂，其中至少一个抗肽试剂能够选择性结合该多个共价结合的肽第二标签中的至少一个。当第一微珠和第二微珠彼此被置于一定距离内时，第一微珠和第二微珠可以能够可检测地相互反应(例如通过化学迁移相互作用)。某些实施方式可以提供用于检测至少两种分析物的系统，包含：能够结合第一分析物的第一供体试剂；与供体微珠缀合的第一结合子，所述第一结合子能够结合第一供体试剂；能够结合第二分析物的带标签的第二供体试剂；与供体微珠缀合的第二结合子，所述第二结合子能够结合带标签的第二供体试剂；能够结合第一分析物的带标签的第一受体试剂，该带标签的第一受体试剂包含多个共价结合的第一肽标签；与抗第一肽试剂缀合的第一受体微珠，该抗第一肽试剂能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个；能够结合第二分析物的第二受体试剂；和能够结合第二受体试剂的第二受体微珠。在某些实施方式中，结合子和第二结合子可以是相同种类的结合子。在某些实施方式中，第二受体试剂可直接缀合第二受体微珠。在某些实施方式中，第二受体试剂可以是包含多个共价结合的第二肽标签的带标签的第二受体试剂。某些实施方式可以提供分析物检测试剂盒，包含：包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂，包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。在某些实施方式中，分析物检测试剂盒可具有至少9个月的存储周期，例如至少1年或至少2年。某些实施方式可以提供分析物检测试剂盒，包含：包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂，包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。某些实施方式可以提供可用于检测单一样品中的多个分析物的一系列互补分析物检测试剂盒，其包含至少一个第一试剂盒和一个第二试剂盒。第一试剂盒可以包括：包含至少一个标签并能够结合该多个分析物的第一分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第一分析物的第二试剂，包含能够结合第一试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合第一试剂盒的第二试剂上存在的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。第二试剂盒可以包括：包含至少一个标签并能够结合该多个分析物的第二分析物的第一试剂，共价结合多个肽标签并能够结合第二分析物的第二试剂，包含能够结合第二试剂盒的带标签的第一试剂的结合子的供体微珠和包含能够结合第二试剂盒的第二试剂的多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的受体微珠。在某些实施方式中，常规结合子可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。在某些实施方式中，常规供体微珠可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。在某些实施方式中，常规肽标签和常规抗肽试剂可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。在某些实施方式中，常规受体微珠可被用于第一试剂盒和第二试剂盒。某些实施方式可以提供可用于检测相同样品中的多个分析物的一系列互补分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分析物检测系统，包含：i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.02 US 62/236,676;2015.10.05 US 62/237,5221.分析物检测系统，包含：i)包含至少一个标签并能够结合分析物的第一试剂；ii)共价结合多个肽标签并能够结合分析物的第二试剂；iii)包含能够结合带标签的第一试剂的结合子的第一微珠；和iv)包含能够结合该多个共价结合的肽标签中的至少一个的抗肽试剂的第二微珠。2.权利要求1的系统，其中抗肽试剂包含affimer。3.权利要求1的系统，其中第一试剂包含第一抗体。4.权利要求3的系统，其中该至少一个标签包含多种生物素或其衍生物。5.权利要求4的系统，其中第一微珠用链霉亲和素或其衍生物包被。6.权利要求1的系统，其中第二试剂包含第二抗体。7.权利要求6的系统，其中抗肽试剂包含抗肽抗体。8.权利要求7的系统，其中存在的抗肽抗体相对于第二抗体的重量：重量比为至少100：1。9.权利要求1的系统，其中：A)第一微珠是包含光敏剂的供体微珠；和B)第二微珠是配置为通过化学转移相互作用与供体微珠相互作用的受体微珠。10.权利要求9的系统，其中供体微珠在受到波长范围为650-700nm的光刺激时发射单线态氧。11.权利要求9的系统，其中受体微珠包含与单线态氧反应形成光敏指示剂的光敏指示剂前体，其中照射光敏指示剂发射波长范围为500-625nm的荧光。12.权利要求9的系统，其中每种第一微珠和第二微珠具有250-350nm范围的直径。13.权利要求9的系统，其中存在的第二微珠相对于第一微珠的比例范围为0.1...

【专利技术属性】
技术研发人员：安东尼·詹姆斯·希恩，迈克尔·弗朗西斯·克劳奇，
申请(专利权)人：TGR生物科学私人有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚,AU