用于治疗变态反应的重组的或纯化的多克隆抗体制造技术

本发明专利技术描述了一种用于治疗变态反应的药物组合物。该组合物含有能够与变应原发生反应或进行结合的重组多克隆抗体或由不同单克隆抗体组成的混合物作为活性成分以及一种或多种药用赋形剂。该组合物可以以溶液、分散体、粉剂或微球体的形式进行局部使用。所述多克隆抗体优选地是通过噬菌体展示技术制备的重组多克隆抗体。从原始多克隆免疫应答反应保留下来的或通过利用待研究的变应原的淘选技术筛选的特异性免疫球蛋白可变区轻链与重链的配对优选地通过将所述配对整体转移到一个表达载体中来保持。所述变应原可以是来自以下物质的变应原：屋尘螨，例如Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓｆａｒｉｎａｅ或屋尘螨；猫、狗或马的皮屑；树花粉，例如桦树白桦树、桤木、榛树、橡树、柳树、悬铃木、山毛榉、榆树、枫木、岑树和鹅耳枥的花粉；草花粉，例如梯牧草梯牧草、六月禾早熟禾、黑麦草黑麦草、果园草鸭茅、豚草豕草、甜春草黄花茅和黑麦黑麦的花粉；或真菌（例如链格孢属、曲霉属、枝孢属和青霉属）。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种含有能够与变应原发生反应或进行结合的重组多克隆抗体或由不同单克隆抗体组成的混合物或分离的或纯化的多克隆抗体的组合物，以及能够与变应原发生反应或进行结合的多克隆抗体用于治疗变态反应的用途。所有抗体的整体结构相似，导致在生理化学特性如电荷和溶解性方面的某些相似性。所有抗体具有一个由两条相同轻链和两条相同重链组成的共同核心结构，每条轻链约为24千道尔顿，每条重链约为55-70千道尔顿。一条轻链与每条重链相连，并且两条重链彼此相连。轻链和重链均含有一系列重复同源单元，每个单元的长度大约为110氨基酸残基并且各自独立地折叠成一个共同的球形基元，该基元被称作免疫球蛋白(Ig)结构域。通过两条重链结合形成的抗体分子区域是疏水性的。已知当抗体处于不利的物理或化学条件时，抗体在轻链与重链连接的位点处发生裂解。由于抗体含有多个半胱氨酸残基，所以它们具有多个半胱氨酸-半胱氨酸二硫键。所有Ig结构域都含有两层β-折叠，具有三条或四条反向平行的多肽链。尽管抗体在总体上相似，但是根据生理化学特性如大小、电荷和溶解性以及与抗原结合的行为，可以将抗体分子分成不同的类别和亚类。对于人类来说，抗体分子的类是IgA，IgD，IgE，IgG和IgM。每一类的成员被认为是相同的同种型。IgA和IgG同种型被进一步分为亚型，这些亚型被称作IgA1，IgA2和IgG1，IgG2，IgG3和IgG4。同种型中的所有抗体分子的重链都具有广泛区域的氨基酸序列同一性，但是与属于其它同种型或亚型的抗体有差别。重链用对应于抗体分子整体同种型的希腊字母来表示，例如，IgA含有α，IgD含有δ，IgE含有ε，IgG含有γ，以及IgM含有μ重链。IgG，IgE和IgD环成单体。通过上皮分泌到体腔粘膜内层的IgA分子是同型二聚体而IgM分子是五聚体。环化的IgA主要以单体的形式存在。多聚体形式的IgA和IgM都通过所谓的J链来稳定。分泌性IgA(S-IgA)由定居在固有层中的B细胞产生并通过多-免疫球蛋白受体(pIgR)被基底外侧的上皮细胞所摄取，通过上皮细胞进行运输并被分泌到腔壁的粘膜中。当IgAJ链pIgR复合体被释放时，pIgR被蛋白酶裂解并且被称作分泌组分(SC)的pIgR分子的一部分仍然与IgAJ链复合体保持结合。因此，S-IgA是由IgA、J链和SC组成的复合体，其中J链和SC与IgA分子通过二硫键共价结合。S-IgA对上皮粘膜如呼吸道或胃肠道中的上皮粘膜的蛋白水解环境具有很强的抗性，因而构成这些部位中的主要特异性免疫系统。已经表明S-IgA具有免疫调节作用并且可以诱导产生针对它们所结合抗原的耐受性。在每一个体当中存在着108至1010个结构不同的抗体分子，每个抗体分子在它们的抗原结合位点具有独特的氨基酸序列。抗体序列多样性主要被发现存在于称作可变区(V)的重链和轻链的氨基末端区域内的三段短序列中，区别于更加保守的恒定区(C)。免疫球蛋白E(IgE)引起所谓的1型超敏反应，它本身为常见疾病如过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、枯草热、过敏性(外因性)哮喘、蜂毒过敏以及食物过敏。在患有由IgE介导的变态反应的患者体内过量产生变应原-特异性IgE。IgE在血液中循环并与血液、各种组织或粘膜表面上的嗜碱性粒细胞和肥大细胞上的针对IgE的高-亲和力Fc受体结合。在大多数变态反应中，变应原通过吸入、摄入或皮肤进入患者体内。所述变应原分子与预先形成的已经结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面上的高亲和力受体FcεR1的IgE相结合，结果导致几个IgE分子间发生交联并引发组胺和其它引起各种过敏症状的炎症介质的释放。对IgE-介导的局部变态反应最敏感的组织有结膜、鼻腔或口咽粘膜(过敏性鼻炎)、支气管的粘膜内衬和胃肠道粘膜。因此，变应原通过呼吸进入呼吸道并且在鼻内衬或呼吸道支气管的粘膜表面上被捕获。空气传播的变应原也与眼睛和耳朵的湿润表面相接触并保留在粘膜上。所述粘膜组织聚集了大量的肥大细胞，因此到达这些部位的变应原可以结合IgE并激活肥大细胞。对付变态反应的治疗原则和治疗方式在最近几年中没有发生实质性的变化。用于抑制免疫活性的免疫抑制药物如类固醇以及用于缓解哮喘症状的支气管扩张剂长期以来是对患有过敏性哮喘病人的主要治疗方式。脱敏免疫疗法是对病情严重患者最重要的新疗法，但是医学的发展已经局限于变应原物质的精确分类，诊断方法的改进以及提供控制得更好和更宽谱的变应原提取物用于免疫治疗。对于研究，在鉴定和分离变应原物质的主要变应原成分方面取得了进展。例如，豚草、屋尘螨以及猫和狗的皮屑和唾沫中的主要变应原成分已经得到鉴定。当变应原颗粒，例如梯牧草花粉到达气道粘膜时，这些颗粒就分解成主要和次要的变应原成分。抗体已被建议用于一些临床治疗医学免疫公司(MedImmuneInc.)正在研究抗呼吸道合胞病毒(RSV)的人源化单克隆抗体的用途并且上市了一种多克隆抗RSV人免疫球蛋白产品(RespiGam)，其分离自人供体血液并且被用于治疗RSV感染。MedImmune还上市了CytoGam，一种用于治疗CMV感染的抗CMV(巨细胞病毒)人免疫球蛋白。IDEC和Genentech正联合进行用于治疗复发性和顽固性低分级非霍奇金淋巴瘤的小鼠-人嵌合单克隆抗体(Rituxi-mab)的临床试验，其中所述抗体针对在成熟B细胞和大多数非霍奇金淋巴瘤上发现的CD20抗原。GalaGen正在研究牛多克隆免疫球蛋白(Diffistat-G)用于治疗艰难梭菌抗菌素相关性腹泻的用途。SmithKline Beecham和Schering-Plough正在开发在临床试验中已经显示出预防嗜酸性炎症和气道狭窄的抗-IL-5单克隆抗体。一种抗-IgE单克隆抗体正在被Genentech研制用来“关闭(switch-off)”变态反应。所述抗体Rhu-Mab-E25已显示在首次注射用药后降低游离IgE水平，该抗体是一种人源化的嵌合IgG1单克隆抗体，对人高度亲和性IgE受体(FcεRI)上的一种独特表位具有特异性。多次注射后，该抗体能够减弱针对吸入变应原的早期和晚期应答。治疗使用的抗体实例还包括一种抗RSV的鼻内使用的雾化IgG(Sandoz)；HNK20(Oravax)，一种抗-RSV IgA；和4B9(Bristol Myers-Squibb)，一种抗-B群链球菌IgM单克隆抗体。其它治疗用单克隆抗体包括单克隆的抗-CD4抗体、抗-IL-2抗体和抗-IL-4抗体。利用小颗粒的IgG气雾剂进行RSV感染免疫治疗已被Piazza等公开(传染病杂志(J.Infect，Dis.)，166卷，1422-1424页，1992)。该项研究表明与雾化的5％ IgG溶液接触15分钟结果使肺中病毒减少了50倍。Brown(Aerosol Science and Technology，24卷，45-56页，1996)公开了抗体作为抑制呼吸道炎症疾病或变应原诱导的哮喘反应的细胞因子抑制剂或拮抗剂的用途。还提到了用于治疗急性病毒或细菌呼吸道感染的病原体-特异性抗体的局部呼吸道送递。抗体脂质体，即免疫脂质体，已经被Maruyama等公开(Biochim.Biophys.Acta，1234卷，74-80页，1995)。用抗体包被脂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物组合物，其含有能够与变应原发生反应或进行结合的重组多克隆抗体或由各单克隆抗体组成的混合物或分离的或纯化的多克隆抗体作为活性成分以及一种或多种药用赋形剂。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JS豪鲁姆，K狄勒耶，UGW莫啻，
申请(专利权)人：西福根有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]