采用模拟移动床色谱纯化抗体制造技术

本发明专利技术涉及采用模拟移动床色谱纯化抗体。本发明专利技术涉及用于抗体(例如单克隆抗体)的色谱纯化的组合物和方法，其采用改进的模拟移动床分离策略以及在某些实施方案中采用拉曼光谱。

【技术实现步骤摘要】
本申请是国际申请日为2011年9月16日的国际申请PCT/US2011/051874进入中国、申请号为201180055293.8的题为“采用模拟移动床色谱纯化抗体”的专利技术专利申请的分案申请。本申请要求2011年9月20日提交的美国专利申请第61/384,620号的申请日的权益，其内容在此整体引入作为参考。1.
本专利技术涉及用于抗体(例如单克隆抗体(“mAbs”))的色谱纯化的组合物和方法，其采用改进的模拟移动床(“SMB”)分离策略以及在某些实施方案中采用拉曼光谱。2.
技术介绍
蛋白质纯化策略通常采用一个或多个色谱分离步骤以将宿主细胞蛋白(“HCPs”)从最终纯化的蛋白制剂中排除。此色谱分离步骤通常以“批处理方式”来进行，其中将填充有特定的色谱固定相的单柱连续进行平衡、装载、洗涤、洗脱，并随后再生。由于批处理方式色谱法只依赖于装载的柱的动态容量，而不是装载的柱的饱和容量，因此装载和分离的每个循环仅使用该柱实际结合容量的30%至50%。因此，批处理方式分离需要使用具有当这些柱子在其饱和容量下运行时所需要的两至三倍以上体积的柱子。仅利用了30%-50%的柱的实际结合容量，批处理方式色谱法因此涉及使用明显更高的色谱分离固定相的量，且延长完成装载和分离的每个循环所需要的时间，其大幅度地增加了蛋白质纯化相关的成本。此外，如果在饱和时进行分离，使用具有两到三倍体积的柱子将是必要的，这导致单个分离循环中所使用的平衡、洗涤和洗脱缓冲液的量显著增加，造成额外的成本和时间的低效。鉴于上述情况，本领域中需要改进的方法以更有效地纯化蛋白质，包括治疗性抗体。本专利技术通过将改进的模拟移动床分离策略纳入蛋白质的纯化中解决了这一需求。3.
技术实现思路
在某些实施方案中，本专利技术涉及从含靶蛋白和至少一种HCP的样品混合物制备宿主细胞蛋白(HCP)降低的靶蛋白制剂的方法。在某些实施方案中，本专利技术的方法包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。本专利技术的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂和选自亲和色谱树脂、离子交换色谱树脂和疏水相互作用色谱树脂的色谱树脂。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。本专利技术的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂并且所述靶蛋白选自：酶；肽类激素；多克隆抗体；人单克隆抗体；人源化单克隆抗体；嵌合单克隆抗体；单链抗体；Fab抗体片段；F(ab')2抗体片段；Fd抗体片段；Fv抗体片段；分离的CDRs；双抗体；DVDs和免疫粘附素。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。本专利技术的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂，并且将色谱树脂充填入一系列被流体导管分隔的流体连接柱，其中流体连接柱的数量选自2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个单柱。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。本专利技术的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂，并且将色谱树脂充填入一系列被流体导管分隔的至少2个流体连接柱，其中所述柱子被流体导管分隔以允许引入缓冲液，如平衡、洗涤和洗脱缓冲液，以及洗脱液的移出。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。本专利技术的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂，并且样品混合物与色谱树脂接触以获得选自约0.5至约12分钟范围的保留时间，在一个实施方案中，其可以选自高达约0.5分钟、高达约1分钟、高达约2分钟、高达约3分钟、高达约4分钟、高达约5分钟、高达约6分钟、高达约7分钟、高达约8分钟、高达约9分钟、高达约10分钟、高达约11分钟和高达约12分钟。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。本专利技术的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-100%，包括大于约50%、大于约60%、大于约70%、大于约80%和大于约90%，并收集色谱样品，其中所述色谱样品包括所述HCP降低的靶蛋白制剂，并且所述方法进一步包括在接触样品混合物前平衡色谱树脂和接触样品混合物后洗涤色谱树脂的步骤，其中平衡和洗涤缓冲液为相同缓冲液。在某些这样的实施方案中，采用拉曼光谱以便监测和/或确定涉及此HCP降低的靶蛋白制剂的制备的一种或多种多组分混合物的组成。本专利技术的某些实施方案涉及HCP降低的靶蛋白制剂的制备，其包括使含靶蛋白的...

【技术保护点】
一种从样品混合物制备宿主细胞蛋白(HCP)降低的靶蛋白制剂的方法，所述样品混合物包含靶蛋白和至少一种HCP，所述方法包括：(a) 进行所述样品混合物的拉曼光谱分析；(b) 使所述样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%‑100%；和(c) 收集色谱样品；和(d) 进行所述色谱样品的拉曼光谱分析以鉴定其为HCP减少的靶蛋白制剂。

【技术特征摘要】
2010.09.20 US 61/3846201.一种从样品混合物制备宿主细胞蛋白(HCP)降低的靶蛋白制剂的方法，所述样品混
合物包含靶蛋白和至少一种HCP，所述方法包括：
(a)进行所述样品混合物的拉曼光谱分析；
(b)使所述样品混合物接触色谱树脂，使得树脂被装载至其饱和结合容量的约50%-
100%；和
(c)收集色谱样品；和
(d)进行所述色谱样品的拉曼光谱分析以鉴定其为HCP减少的靶蛋白制剂。
2.权利要求1的方法，其中色谱树脂选自亲和色谱树脂、离子交换色谱树脂和疏水相互
作用色谱树脂。
3.权利要求1的方法，其中靶蛋白选自：酶；肽类激素；多克隆抗体；人单克隆抗体；人源
化单克隆抗体；嵌合单克隆抗体；单链抗体；Fab抗体片段；F(ab')2抗体片段；Fd抗体片段；
Fv抗体片段；分离的CDRs；双抗体；...

【专利技术属性】
技术研发人员：SK刘，D董，S卢，
申请(专利权)人：ABBVIE公司，
类型：发明
国别省市：美国;US