一种高效快速纯化制备片段抗体的方法技术

本发明专利技术公开了一种从动物细胞规模培养物中高效快速纯化制备片段抗体的方法，采用扩张柱床吸附、阴离子层析浓缩、疏水层析纯化方法，扩张柱床阳离子层析吸附大规模细胞培养物中的抗体ＩｇＧ，通过改变缓冲系统ｐＨ值进行洗脱；收集的洗脱峰即可直接进行阴离子层析；被充分浓缩纯化的抗体ＩｇＧ，直接被胃蛋白酶酶切获取片段抗体，进行疏水层析纯化，最终获取的片段抗体纯度不小于９７％，整个纯化过程在１２小时内即可完成。纯化工艺的衔接采用同一缓冲系统，通过改变ｐＨ值的方法进行洗脱，省去了缓冲系统更换步骤，使前后纯化过程衔接紧密；通过阳离子－阴离子色谱结合的浓缩方法替代传统的硫酸铵沉淀浓缩方法。具有高效、快速、成本低、纯度高、稳定、批次间结果差异小等特点。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
的蛋白质纯化技术，主要涉及抗体类包括单克隆抗体和小分子片段抗体，人源化或人-鼠嵌合抗体以及片段抗体的纯化制备工艺。特别涉及，适用于治疗用抗体类药物的生产制备。
技术介绍
抗体治疗已成为当今生物治疗肿瘤、流行性和感染性疾病的重要手段。至2004年2月，美国FDA已批准16个抗体治疗药物上市，市场销售额已超过2×109美金。抗体类药物以其高度的特异性、有效性和安全性成为国际药品市场上一大类新型治疗剂。在16个抗体治疗药物中，12个均为人源化或人鼠嵌合抗体(美国FDA网页http//www.fda.gov)。放射免疫治疗是(Radioimmuno-therapy，RIT)以抗体为载体，将携带的放射性核素借助于抗体的导向作用集中浓聚，从而提高对肿瘤细胞杀伤作用，减少正常组织损伤，在16个抗体治疗药物中有Y90和I131两种放射性核素标记的鼠原性抗体(90Y-IbritumomabIDEC 2002；Tositumomab and Iodine I131Tositumomab Corixa 2003)用于肿瘤导向治疗。F(ab’)2片段抗体和Fab小分子抗体，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效快速纯化制备片段抗体的方法，采用扩张柱床吸附－阴离子层析浓缩－疏水层析纯化三步纯化，从细胞规模培养物中分离纯化抗体ＩｇＧ，酶切后纯化制备片段抗体，整个纯化工艺的衔接采用同一缓冲系统，通过改变ｐＨ值的方法进行洗脱，减少了工艺过程缓冲系统置换的步骤，其特征在于，包括以下步骤：　　　　（１）动物细胞规模培养物中分离纯化抗体ＩｇＧ，先用Ｓｔｒｅａｍｌｉｎｅ　ＳＰ阳离子层析吸附动物细胞规模培养物中的抗体ＩｇＧ，得到初步纯化的抗体ＩｇＧ，其过程参数为：　　　　ａ．Ｓｔｒｅａｍｌｉｎｅ　ＳＰ阳离子层析，动物细胞培养物无须澄清和浓缩，用超纯水稀释至电导率为４ｍｓ／ｍｌ～６ｍｓ／ｍｌ，吸附条件用缓冲系统...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：米力，唐浩，余晓玲，谢丽，
申请(专利权)人：陈志南，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]