一种制备环孢菌素Ａ的方法技术

本发明专利技术属生物医药技术领域，提供了一种工业化制备高纯度环孢素Ａ的方法，经发酵液提取、非极性大孔吸附树脂层析、硅胶柱层析、结晶纯化得环孢菌素Ａ，本发明专利技术采用等浓度洗脱，没有复杂的中间步骤溶剂置换过程，工艺操作简捷，适于工业化生产，纯度大于９８．５％，收率为６５％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种环孢菌素A的分离纯化工艺。
技术介绍
环孢菌素 A(Ciclosporin A, CsA)是从多孑L 木霉(Tolypocladium inflatum CSP3)，后正名为雪白白僵菌(Beauveria bassiana)的培养物中分离得到的一种含11个氨 基酸的环状多肽，是一种作用很强的免疫抑制剂，除了环孢菌素A外还有B、C、D等20多种 同系物。环孢素A用于肾脏、肝脏和心脏等移植手术的免疫抑制治疗，它还可以用来治疗一 些自身免疫疾病，如红斑狼疮、类风湿性关节炎、特发性血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、 重症肌无力、慢性肾炎、慢性活动性肝炎和肾病综合症等多种自身免疫性疾病。权利要求1.一种从发酵液中分离纯化环孢菌素A的方法，其过程包含以下步骤(1)环孢菌素A的提取向发酵液中加NaOH调PH值为中性，加入有机溶剂，搅拌提取5 8小时，将提取液滤 出菌体收集滤液；(2)大孔吸附树脂层析大孔吸附树脂装柱，对树脂进行预处理，提取液上样，用洗涤剂处理上样后的树脂，然 后洗脱液洗脱并收集洗脱液，加入石油醚萃取洗脱液，将萃取液浓缩待用；(3)硅胶柱层析硅胶装柱，将萃取浓缩液上样，用丙酮石油醚混合溶剂洗脱，收集纯度合格的环孢菌素 A洗脱液；(4)结晶纯化洗脱液真空浓缩并结晶，用丙酮洗涤，最后真空干燥得无色粉末状环孢菌素A纯品。2.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于发酵液与有机溶剂的体积比为 1 1 1 2。3.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于发酵液与有机溶剂的体积比为1 Io4.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于有机溶剂是甲醇、乙醇、乙酸乙酯 和丙酮中的一种或多种。5.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于有机溶剂是丙酮。6.根据权利要求1步骤(1)所述的方法，其特征在于发酵液提取温度为30°C 40°C。7.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂为非极性的。8.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂型号是D101、 H103、HP20、HPD300、XDA-6 或 X-5。9.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂型号是D101、 HP20 或 X-5。10.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于所用大孔吸附树脂型号是D101。11.根据权利要求1步骤( 所述的方法，其特征在于预处理树脂所用的洗涤剂依次是 纯水、3%氢氧化钠溶液和3%盐酸溶液。12.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于上样后的树脂洗涤剂依次为3% 盐酸和纯水。13.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于洗脱剂为乙酸乙酯、甲醇和丙酮 一种或多种。14.根据权利要求1步骤(2)所述的方法，其特征在于洗脱剂为丙酮。15.根据权利要求1步骤C3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析所选用的硅胶粒度为 200-300目和100-200目中的一种或两种。16.根据权利要求1步骤C3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析柱高径比为8 1 12 I017.根据权利要求1步骤C3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析柱高径比10 1。18.根据权利要求1步骤C3)所述的方法，其特征在于上样液为10% 30%柱体积。19.根据权利要求1步骤C3)所述的方法，其特征在于上样液为20%柱体积。20.根据权利要求1步骤( 所述的方法，其特征在于硅胶柱层析中洗脱液配比为体积 比丙酮石油醚=20 40 60 80。21.根据权利要求1步骤C3)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析中洗脱液配比为体积 比丙酮石油醚=30 70。22.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于硅胶柱层析洗脱液真空浓缩温度 为 60V 75°C。23.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于环孢菌素A的结晶温度为-5°C 20°C。24.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于环孢菌素A的结晶温度为-10°C。25.根据权利要求1步骤(4)所述的方法，其特征在于环孢菌素A的真空干燥温度为 40°C 70°C。全文摘要本专利技术属生物医药
，提供了一种工业化制备高纯度环孢素A的方法，经发酵液提取、非极性大孔吸附树脂层析、硅胶柱层析、结晶纯化得环孢菌素A，本专利技术采用等浓度洗脱，没有复杂的中间步骤溶剂置换过程，工艺操作简捷，适于工业化生产，纯度大于98.5％，收率为65％以上。文档编号A61P37/06GK102086226SQ20091025390公开日2011年6月8日 申请日期2009年12月4日 优先权日2009年12月4日专利技术者董惠钧, 赵军杰, 赵志全 申请人:山东新时代药业有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从发酵液中分离纯化环孢菌素Ａ的方法，其过程包含以下步骤：（１）环孢菌素Ａ的提取向发酵液中加ＮａＯＨ调ＰＨ值为中性，加入有机溶剂，搅拌提取５～８小时，将提取液滤出菌体收集滤液；（２）大孔吸附树脂层析大孔吸附树脂装柱，对树脂进行预处理，提取液上样，用洗涤剂处理上样后的树脂，然后洗脱液洗脱并收集洗脱液，加入石油醚萃取洗脱液，将萃取液浓缩待用；（３）硅胶柱层析硅胶装柱，将萃取浓缩液上样，用丙酮石油醚混合溶剂洗脱，收集纯度合格的环孢菌素Ａ洗脱液；（４）结晶纯化洗脱液真空浓缩并结晶，用丙酮洗涤，最后真空干燥得无色粉末状环孢菌素Ａ纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵志全，董惠钧，赵军杰，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]