本发明专利技术提供含有至少一个ＩｇＧ Ｆｃ区的多肽，所述至少一个ＩｇＧ Ｆｃ被至少一个通过α２，６键连与各自末端唾液酸配基连接的半乳糖配基所糖基化，并且所述多肽与未纯化的抗体相比，含有较高的抗炎症活性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于设计治疗炎症性疾病的治疗性多肽的新方法。
技术介绍
尽管免疫球蛋白细胞受体的首次鉴定早在将近40年以前，但在过去的十年中才发现 其在免疫应答中的核心作用。他们在免疫应答的传入(afferent)期和传出(efferent)期都 是非常关键的设定B细胞激活和抗体生成的阈值，调节树突状细胞的成熟并偶联抗体响 应效应器途径的精细的特异性，这些效应器途径诸如巨噬细胞吞噬、抗体依赖性细胞毒性 作用以及炎症细胞的募集和激活。他们的核心作用将人类免疫系统和天然效应器细胞联系 起来，使得他们成为用于增强或限制体内抗体活性的有吸引力的免疫治疗的靶标。抗体和抗体-抗原复合物与免疫系统中细胞的相互作用影响多种反应，包括抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)和补体依赖性细胞毒性作用(CDC)、巨噬细胞吞噬、炎症介质的释放、 抗原的清除，以及抗体的半衰期(综述见Daron,及ev /附wmwo/, 15, 203-234 (1997); Ward禾口 Ghetie, 7T era/ e2^c /附附imo/, 2, 77-94 (1995); Ravetch禾口 Kinet，i ev 7w附wwo/， 9,457-492(1991)，各自以参考文献形式并入本文)。抗体的恒定区不直接参与抗体对于抗原的结合，但呈现多种效应器功能。抗体或免疫 球蛋白根据其重链恒定区的氨基酸序列可被分为不同的类别。有五个主要的免疫球蛋白种 类IgA、 IgD、 IgE、 IgG，和IgM，其中几种可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgGl、 IgG2、 IgG3和IgG4; IgAl和IgA2。与不同种类的免疫球蛋白对应的重链恒定区分别被称 为a、 s、 s、 y，和P。在各种人类免疫球蛋白种类中，人IgGl和IgG3比IgG2和IgG4更 有效地介导ADCC。抗体经木瓜蛋白酶消化产生被称为Fab片段的两个相同的抗原结合片段，各自含有一个单一的抗原结合位点；以及一个残余的"Fc"片段，其命名反映出其容易结晶的能力。Fc区与抗体的效应器功能密切相关。已确定人类IgG Fc区的晶体结构(Deisenhofer,历oc/ ew/^7, 20, 2361-2370 (1981)，其以参考文献形式并入本文)。在人类IgG分子中，Fc区由木瓜蛋白酶裂解的N-末端至第226位的半胱氨酸(Cys226)而产生。长期以来， 一直认为IgG通过其Fc片段介导的相互作用既能介导促炎症作用，又能介导抗炎症作用。因此，虽然Fc-Fcy受体(Fc-FqR)相互作用负责免疫复合物与细胞毒性抗体的促炎症特性，静脉注射丙种球蛋白(IVIG)及其Fc片段是抗炎症的并被广泛用于抑制炎症性疾病。这种荒谬特性的精细机制尚不清楚，但有人提出IgG的糖基化对于调控IgG的细胞毒性和炎性的潜能是至关重要的。IgG在其两条重链的CH2区各自含有一个连在天冬酰胺297 (Asn297)上的单，N-连接聚糖。共价-连接的复合糖由一个核心，含有N-乙酰氨基葡萄糖(GIcNAc)的双天线五-多糖和甘露糖(man)组成。在血清抗体中观察到,核心糖结构的进一步修饰发现有岩藻糖、分支GIcNAc、半乳糖(gal)以及末端的唾液酸(sa)等不同的配基存在。已经检测到这个单一的糖基化位点上共价地连接有超过40种不同的糖型。Fujii等人.，《/历o/. C&w 265, 6009(1990)。已经表明IgG的糖基化通过维持两条重链的开放式构象而对所有的FcYR的结合都是必要的。Jefferis禾n Lund, /附ww"e./丄e". 82, 57 (2002), Sondermann等人.， / Mo/.历o/. 309，737 (2001)。这种FqR结合对于IgG糖基化的绝对需求是去糖基化的IgG抗体无法介导体内触发的炎症反应，诸如ADCC、巨噬细胞吞噬以及炎症介质的释放的原因。Nimmerjahn和Ravetch， /w附ww/^ 24， 19 (2006)。被报道的含有或缺少岩藻糖的IgG抗体的个体FcYR的亲和性的改变，以及因此对于细胞毒性的影响提示个体IgG的糖基化可能有助于调节炎症反应，这可进一步观察到。Shields等人.，乂历o/. O em. 277,26733 (2002)， Nimmeijahn和Ravetch, Sc&"ce 310, 1510 (2005)。已经在类风湿性关节炎和一些自身免疫性脉管炎患者中观察到自身免疫状态和IgG抗体的特定糖基化模式的联系，有报道这些患者中IgG抗体的半乳糖苷化和唾液酸化减少。Parekh等人.，iVaft^e 316, 452 (1985), Rademacher等人.，iVoc.扁,爿cad SW . 91, 6123 (1994), Matsumoto等人.,128, 621 (2000)， Holland等人.，5/oc/ 'ot.历op/z".Dec 27; 2005。已经报道IgG糖形的变化与衰老和免疫相关，尽管这些改变在体内的意义还没有确定。Shikata等人.，G/;;cocw /. J. 15, 683(1998)， Lastra,等人.，JWo/zwrn^z/^ 28, 25 (1998)。因此，需要开发产生多肽的方法，其可以解释体内IVIG性质的不同的观察结果。专利技术概述本专利技术通过提供这些方法和分子满足上述需要。 一方面，本专利技术提供含有至少一个IgGFc区的多肽，所述多肽与未纯化的抗体相比特性发生改变，其中分离的多肽的唾液酸化比未纯化的抗体制备物程度高。在一个实施方式中，含有至少一个IgGFc区的分离多肽被至少一个通过a 2,6键合与各自末端唾液酸配基连接的半乳糖配基所糖基化，并且，所述多肽与未纯化的抗体相比抗炎症活性增强。在一个实施方式中，含有至少一个IgGFc区的分离的多肽被至少一个通过a 2，6键连与各自末端唾液酸配基连接的半乳糖配基所糖基化，并且，所述多肽与未纯化的抗体制备物相比对于Fc激活受体的结合减弱。在进一步的实施方式中，Fc激活受体选自FcyRIIA、 FcyRIIC和FcyRIIIA。另一方面，本专利技术提供一种药物制剂，该制剂含有一种多肽和适当的载体或稀释剂，该多肽含有至少一个具有较高的抗炎活性Fc区。一种调节含有Fc区的多肽特性的方法，包括改变所述Fc区的多糖链唾液酸化的程度。在一个实施方式中，上述方法包括提供含有至少一个Fc区的未纯化多肽源，所述含有至少一个Fc区的未纯化多肽源含有多个至少含有一个Fc区、具有含有通过a 2,6键与半乳糖配基连接的末端唾液酸的多糖链的多肽；以及多个至少含有一个Fc区的、缺乏通过a 2,6键连与半乳糖配基连接的末端唾液酸的多糖链的多肽；和提高含有多个至少含有一个Fc区的、具有含有通过a 2,6键与半乳糖配基连接的末端唾液酸的多糖链的多肽，与多个至少含有一个Fc区的、缺乏通过a2，6键连与半乳糖配基连接的末端唾液酸的多糖链的多肽的比率。附图说明图1是SNA+ Fc键合的MALDI-TOF分析图。图2总结了证明唾液酸和半乳糖之间a 2,6键合的富集提高IVIG Fc片段的抗炎症特性的试验。图3总结了证明唾液酸和半乳糖之间a 2，6键合的去本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种含有至少一个ＩｇＧ Ｆｃ区的分离多肽，该多肽与未纯化抗体制备物相比具有改变的特性，其中分离多肽的唾液酸化程度比未纯化的抗体制备物高。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：福克尼莫雅恩，善藤金子，杰弗瑞V华弗治，
申请(专利权)人：洛克菲勒大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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