糖型特异性纳米抗体及其使用方法技术

本公开至少部分基于一个出乎意料的发现，即新的纳米抗体及其变体能够特异性结合非岩藻糖基化或唾液酸化的

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】糖型特异性纳米抗体及其使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据
35 U.S.C.
§
119(e)
要求
2021
年3月
12
日提交的美国临时申请
63/160,054
的优先权，该申请通过引用整体并入本文
。
[0003]关于联邦资助研究的声明
[0004]本专利技术是在国家过敏和感染性疾病研究所
(National Institute of Allergy and Infectious Diseases)
授予的
R01AI137276
和
U19AI111825
政府资助下完成的
。
政府对本专利技术享有一定权利
。


[0005]本专利技术涉及糖型特异性纳米抗体和多肽以及使用方法
。

技术介绍

[0006]登革
(Dengue)
是最普遍的节肢动物传播的病毒性疾病
。
世界上有一半人口生活在有登革病毒
(DENV)
感染风险的地区，每年导致约
3.9
亿例感染
。
在这中间，估计约3亿例是不明显的和未检测到的，产生的不适感不足以扰乱个体的日常生活
。
目前认为针对
DENV
的免疫状态是被感染
DENV
的蚊子叮咬后需要住院治疗的最大风险因素
。/>根据感染的
DENV
血清型，原发性感染通常导致不明显的感染或轻度疾病症状，而继发性感染可导致症状加重，这可能是威胁生命的，需要住院治疗
。
假定感染血清型与记忆适应性应答之间的错配导致异常且加剧的免疫应答；然而，这种机制的细节有待揭示
。
已经提出疾病增强是由于预先存在的
DENV
反应性
IgG
抗体的存在，其通过促进特定白细胞群体的感染而以亚中和水平加重疾病
。
这种现象称为感染的抗体依赖性增强
(ADE)
，已经在体外实验系统中被广泛研究，并且依赖于
IgG Fc
结构域与在靶细胞表面表达的
Fc
γ
受体
(Fc
γ
R)
的相互作用
。Fc
‑
Fc
γ
R
相互作用被认为促进了表达
Fc
γ
R
的细胞对
IgG
‑
病毒免疫复合物的内化，从而导致被感染细胞的频率提高
、
融合增加和
/
或免疫应答改变
。
[0007]与所提出的
IgG
抗体的致病作用一致，最近的流行病学研究支持了：预先存在的抗
DENV
抗体的血清水平是对有症状的继发性登革感染的易感性的关键决定因素
。
尽管较高的抗
DENV
滴度产生了针对严重登革病的保护作用，但中等的亚中和水平通过
ADE
机制增强了疾病
。
尽管免疫史和预先存在的抗
DENV
滴度水平代表对登革病的易感性的主要风险因素，但是这些因素本身并不能解释为什么只有一小部分
(
＜5％
)
的具有预先存在的抗
DENV IgG
的患者发生严重的登革病，表明存在对疾病易感性有贡献的另外的宿主免疫因素
。
[0008]因此，仍然强烈需要一种新的对病毒性和炎性疾病的诊断和预后工具
。

技术实现思路

[0009]本公开在多个方面解决了上述需要
。
在一个方面，本公开提供了特异性结合
IgG Fc
糖型
(
例如
IgG1 Fc
糖型
)
的分离的纳米抗体
。
所述方法包含三个互补决定区
(CDR1、CDR2
和
CDR3)。
[0010]在一些实施方案中，
CDR1
包含与
SEQ ID NO
：1的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR2
包含与
SEQ ID NO
：2的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR3
包含与
SEQ ID NO
：3的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列
。
[0011]在一些实施方案中，
CDR1
包含与
SEQ ID NO
：5的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR2
包含与
SEQ ID NO
：6的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR3
包含与
SEQ ID NO
：7的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列
。
[0012]在一些实施方案中，
CDR1
包含与
SEQ ID NO
：9的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR2
包含与
SEQ ID NO
：
10
的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR3
包含与
SEQ ID NO
：
11
的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列
。
[0013]在一些实施方案中，
CDR1
包含与
SEQ ID NO
：
13
的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR2
包含与
SEQ ID NO
：
14
的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR3
包含与
SEQ ID NO
：
15
的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列
。
[0014]在一些实施方案中，
CDR1
包含与
SEQ ID NO
：
17
的氨基酸序列具有至少
90
％序列同一性的氨基酸序列；
CDR2
包含与
SEQ ID NO
：
18
的氨基酸序列具有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
特异性结合
IgG Fc
糖型的分离的纳米抗体，其包含三个互补决定区
(CDR1、CDR2
和
CDR3)
，其中：
(a)CDR1
包含
SEQ ID NO
：1的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：2的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：3的氨基酸序列；
(b)CDR1
包含
SEQ ID NO
：5的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：6的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：7的氨基酸序列；
(c)CDR1
包含
SEQ ID NO
：9的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：
10
的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：
11
的氨基酸序列；
(d)CDR1
包含
SEQ ID NO
：
13
的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：
14
的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：
15
的氨基酸序列；
(e)CDR1
包含
SEQ ID NO
：
17
的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：
18
的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：
19
的氨基酸序列；
(f)CDR1
包含
SEQ ID NO
：
21
的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：
22
的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：
23
的氨基酸序列；
(g)CDR1
包含
SEQ ID NO
：
25
的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：
26
的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：
27
的氨基酸序列；
(h)CDR1
包含
SEQ ID NO
：
29
的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：
30
的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：
31
的氨基酸序列；或
(i)CDR1
包含
SEQ ID NO
：
33
的氨基酸序列，
CDR2
包含
SEQ ID NO
：
34
的氨基酸序列，
CDR3
包含
SEQ ID NO
：
35
的氨基酸序列
。2.
如权利要求1所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其包含与
SEQ ID NO
：
4、8、12、16、20、24、28、32
或
36
的氨基酸序列具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列，或包含
SEQ ID NO
：
4、8、12、16、20、24、28、32
或
36
的氨基酸序列
。3.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段特异性结合
IgG1 Fc
糖型
。4.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段特异性结合非岩藻糖基化的
IgG1 Fc
糖型
。5.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段特异性结合在
Asp297(EU
编号
)
处非岩藻糖基化的
IgG1 Fc
糖型
。6.
如权利要求1至3中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段特异性结合唾液酸化的
IgG1 Fc
糖型
。7.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段与
Fc
γ
受体
IIIA(Fc
γ
RIIIA)
竞争结合
IgG Fc
糖型
。8.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述
IgG Fc
糖型是抗登革病毒
(DENV)
抗体或抗
SARS
‑
CoV
‑2抗体的
IgG Fc
糖型
。9.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中两个或更多个所述纳米抗体或其抗原结合片段直接彼此连接或通过接头彼此连接
。10.
如权利要求9所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段寡聚化为四聚体
。
11.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段被可检测地标记或缀合至毒素
、
治疗剂
、
聚合物
、
受体
、
酶或受体配体
。12.
如权利要求
11
所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述聚合物是聚乙二醇
(PEG)。13.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段是生物素化的
。14.
如前述权利要求中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段是人源化纳米抗体
。15.
特异性结合
IgG Fc
糖型的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含三个重链互补决定区
(HCDR1、HCDR2
和
HCDR3)
，其中：
(i)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：1的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：2的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：3的氨基酸序列；
(ii)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：5的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：6的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：7的氨基酸序列；
(iii)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：9的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：
10
的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：
11
的氨基酸序列；
(iv)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：
13
的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：
14
的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：
15
的氨基酸序列；
(v)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：
17
的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：
18
的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：
19
的氨基酸序列；
(vi)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：
21
的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：
22
的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：
23
的氨基酸序列；
(vii)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：
25
的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：
26
的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：
27
的氨基酸序列；
(viii)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：
29
的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：
30
的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：
31
的氨基酸序列；或
(ix)HCDR1
包含
SEQ ID NO
：
33
的氨基酸序列，
HCDR2
包含
SEQ ID NO
：
34
的氨基酸序列，
HCDR3
包含
SEQ ID NO
：
35
的氨基酸序列
。16.
如权利要求
15
所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区
(HCVR)
，所述重链可变区包含与
SEQ ID NO
：
4、8、12、16、20、24、28、32
或
36
的氨基酸序列具有至少
80
％序列同一性的氨基酸序列，或包含
SEQ ID NO
：
4、8、12、16、20、24、28、32
或
36
的氨基酸序列

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：洛克菲勒大学，
类型：发明
国别省市：