含高浓度抗体的溶液制剂制造技术

本发明专利技术提供一种稳定的含抗体的溶液制剂，其特征在于含有精氨酸和甲硫氨酸，所述制剂是长期保存时二聚体的生成及脱酰胺化被抑制的、稳定的、适于皮下施用的含抗体的制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含高浓度抗体的溶液制剂
本专利技术涉及含抗体的制剂，尤其涉及稳定的含高浓度抗体的溶液制剂。
技术介绍
近年来，开发出各种抗体制剂供于实用，但很多抗体制剂是作为静脉注射用制剂来使用的。另一方面，由于医疗现场的实际需求，开发作为可以自己注射的皮下注射用含抗体的制剂的呼声越来越高。一方面单次抗体施用量较大(约100～200mg)，另一方面通常皮下注射液量有限，因此在设计皮下注射用含抗体的制剂时，有必要将施用液中的抗体高浓度化。因此要用比冻干前更少容量的水将冻干制剂再溶解，制成高浓度溶液制剂，所谓利用冻干浓缩技术制备的高浓度制剂现已被广泛使用。但是，对于不需再溶解工序就可使用的方便的溶液制剂的需求也很大。另外，在制备冻干制剂时，由于添加糖等冻结保护剂导致制剂粘度增大，一般认为不适于作皮下注射用制剂，如果是溶液制剂的话，就能够避免这个问题。含高浓度抗体的溶液，由于蛋白质大分子特性及分子间相互作用导致其具有形成自体粘度较高溶液的倾向。另外，将蛋白质以高浓度的溶液保存时，存在以生成不溶性及/或可溶性凝集体为首的劣化现象的问题，应预防。特别是抗体制剂，以溶液状态保存时，容易生成聚合体及不溶性凝集体。另外，溶液制剂长时间保存时，也有由于天冬酰胺以外的其他氨基酸残基发生脱酰胺化导致抗体分子丧失生理活性的问题。通常，为了使蛋白制剂在长期保存以后也能保证活性成分损失较少，需要采用各种手段，将活性成分与各种添加剂溶解在缓冲液中来得到稳定化制剂。但是，尤其是防止在含高浓度抗体的溶液制剂中生成抗体二聚体及发生脱酰胺化的技术仍不完善。因此，对于一种含高浓度抗体的制剂存在需求，此种制剂的特点是：长期保存时能够抑制二聚体的生成及脱酰胺化的发生、稳定、适于皮下施用。
技术实现思路
专利技术拟解决的技术课题本专利技术的目的是提供一种含高浓度抗体的制剂，此种制剂的特点是长期保存时可以抑制二聚体的生成及脱酰胺化的发生、稳定、适于皮下施用。解决课题的技术方案为了达成上述目的，经过锐意努力的研究，本专利技术的专利技术人们发现通过添加精氨酸这种氨基酸及其盐作为稳定剂，可以得到一种稳定的含高浓度抗体的溶液制剂，进而完成本专利技术。即本专利技术提供以下内容。(1)稳定的含抗体的溶液制剂，其特征在于，含有精氨酸和甲硫氨酸。(2)(1)的溶液制剂，其还含有组氨酸缓冲剂。(3)(1)或(2)的溶液制剂，其还含有表面活性剂。(4)(1)～(3)的溶液制剂，其中所述抗体浓度为50mg/mL以上。(5)(1)～(3)的溶液制剂，其中所述抗体浓度为100mg/mL以上。(6)(1)～(3)的溶液制剂，其中所述抗体浓度为120mg/mL以上。(7)(1)～(6)的溶液制剂，其中所述抗体为抗白细胞介素-6受体抗体。(8)稳定的含抗白细胞介素-6受体抗体的溶液制剂，其特征在于，含有精氨酸或甲硫氨酸。(9)(1)～(8)的溶液制剂，其中所述抗体为人源化抗体或人抗体。(10)(1)～(9)的溶液制剂，其还含有色氨酸。(11)(1)～(10)的溶液制剂，其中所述溶液制剂的pH为4～8。(12)(1)～(11)的溶液制剂，其中所述精氨酸的含量为50～1500mM。(13)(1)～(12)的溶液制剂，其粘度为2～15mPa·s。(14)(1)～(13)的溶液制剂，其中所述溶液制剂于22～28℃至少6个月稳定。(15)(1)～(13)的溶液制剂，其特征在于，抗体二聚体的生成被抑制。(16)(1)～(13)的溶液制剂，其特征在于，抗体分子的脱酰胺化被抑制。(17)(1)～(13)的溶液制剂，其被皮下施用。(18)(1)～(13)的溶液制剂，其中所述溶液制剂的制备过程中不包括冻干工序而被制备出。(19)抑制含抗体的溶液制剂的抗体分子的脱酰胺化的方法，包括：向所述溶液中添加精氨酸。(20)抑制含抗体的溶液制剂的抗体二聚体生成的方法，包括：向所述溶液中添加精氨酸和甲硫氨酸。专利技术效果不需要通过冻干浓缩进行重构及再溶解等工序，就可以提供含高浓度抗体的溶液制剂。本专利技术的含高浓度抗体的溶液制剂可在溶液状态下长期稳定保存，由于在制备过程中不包括冻干工序，因此不需要添加作为冻干保护剂的糖类等。附图简述[图1]示实施例1典型的层析图。[图2]示实施例1凝胶过滤层析法(SEC)的评价结果。[图3]示实施例1凝胶过滤层析法(SEC)的评价结果。[图4]示实施例2典型的层析图。[图5]示实施例2离子交换层析法(IEC)的评价结果。[图6]示实施例2离子交换层析法(IEC)的评价结果。[图7]示实施例3凝胶过滤层析法(SEC)的评价结果。[图8]示实施例3离子交换层析法(IEC)的评价结果。实施方式以下，对本专利技术进行详细说明。在本专利技术中，含抗体的溶液制剂是指，含有抗体作为活性成分、以可以施用给人等动物的方式制备的溶液制剂，尤指在制备过程中不包含冻干工序而制备出的溶液制剂。本专利技术的含抗体的溶液制剂是指含高浓度抗体的溶液制剂，抗体浓度优选50mg/mL以上，更优选100mg/mL以上、更优选120mg/mL以上、更优选150mg/mL。特别是到目前为止，尚无含有120mg/mL以上，优选150mg/mL以上的抗体的溶液制剂被实用化的例子，因此通过本专利技术的配方可以首次实现这类含高浓度抗体的溶液制剂的实用化。另外，从制备的角度来看，本专利技术的含抗体的溶液制剂的抗体浓度上限一般在300mg/mL，优选250mg/mL，更优选200mg/mL。因此，本专利技术的含高浓度抗体的溶液制剂的抗体浓度优选50～300mg/mL，更优选100～300mg/mL，更优选120～250mg/mL，特别优选150～200mg/mL。本专利技术中使用的抗体只要可与所欲抗原结合，就无特定限制，可为多克隆抗体，也可为单克隆抗体，但出于稳定生产均质抗体考虑，优选单克隆抗体。作为在本专利技术中使用的单克隆抗体，不仅可为人、小鼠、大鼠、仓鼠、兔、羊、骆驼、猴等动物源单克隆抗体，也包括嵌合抗体、人源化抗体、双特异抗体等经人工改造的基因重组型抗体。而且，对抗体免疫球蛋白类别也无特定限制，可为IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等)、IgA、IgD、IgE、IgM等任一类别，但优选IgG及IgM。另外，本专利技术的抗体不仅包括全抗体，也包含Fv、Fab、F(ab)2等抗体片段，及将抗体可变区用多肽接头等接头连接的单价或二价以上的单链Fv(scFv、sc(Fv)2或scFv二聚体等双体抗体(Diabody)等)等低分子化抗体等。上述本专利技术的抗体，可按照本领域技术人员公知的方法制备。产生单克隆抗体的杂交瘤，基本可以使用公知方法如下制备。即，将所欲抗原或表达所欲抗原的细胞用作致敏抗原，将其通过常规免疫方法免疫，再通过常规细胞融合法将得到的免疫细胞与公知的母细胞融合，使用常规筛选法筛选出单克隆抗体产生细胞(杂交瘤)而进行制备。杂交瘤可以参照Milstein等人采用的方法(Kohler.G.andMilstein，C.，MethodsEnzymol.(1981)73：3-46)进行制备。当抗原的免疫原性低时，可通过结合白蛋白等具有免疫原性的巨大分子而进行免疫。此外，从杂交瘤克隆抗体基因，整合到合适的载体中，再将其导入宿主，可用使用基因重组技术产生的基因重组型抗体(如，参考Carl，A.K.Bor本文档来自技高网...

【技术保护点】
稳定的含抗体的溶液制剂，其特征在于，含有精氨酸和甲硫氨酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】JP 2007-12-27 2007-3363101.稳定的以100～300mg/mL的量含抗白细胞介素-6受体抗体的溶液制剂，其特征在于，含有100～300mM精氨酸和10～50mM甲硫氨酸，其中所述溶液制剂在制备过程中不包括冻干工序而被制备出。2.权利要求1的溶液制剂，其还含有组氨酸缓冲剂。3.权利要求2的溶液制剂，其还含有表面活性剂。4.权利要求3的溶液制剂，其含120mg/mL以上量的抗体。5.权利要求3或4的溶液制剂，其中所述溶液制剂的pH为4～8。6.权利要求5的溶液制剂，其中所述抗体为人源化抗体或人抗体。7.权利要求5的溶液制剂，其中抗体是人源化的抗-IL-6受体抗体，表面活性剂的量是0.0001～10w/v％，且组氨酸缓冲溶液的浓度是1～500mM。8.权利要求5的溶液制剂，其中抗体是人源化的抗-IL-6受体抗体MRA，作为表面活性剂的聚山梨酯80的量是0.005～3w/v％，组氨酸缓冲溶液的浓度是5～100mM，且抗体浓度是100～300mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：森近俊行，龟冈大介，今枝好美，前田照利，OB施陶赫，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，弗哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]