亲吻肽拮抗剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及亲吻肽拮抗剂在制备用于治疗个体中由亲吻肽活性引起和／或使恶化的病症的药物中的用途。本发明专利技术还提供了某些定义的肽分子，其可以作为亲吻肽拮抗剂，用于治疗个体中由亲吻肽活性引起和／或使恶化的病症。此外，本发明专利技术提供鉴定和／或使用亲吻肽拮抗剂和／或所述定义的肽及其药物组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】亲吻肽拮抗剂及其用途本专利技术涉及亲吻肽(kisspeptin)拮抗剂及其在用于治疗个体中由亲吻肽活性引 起和/或使恶化的病症中的用途。此外，本专利技术还涉及用于鉴定亲吻肽拮抗剂的方法。RFamide是在其C_末端具有通常的Arg-Phe_NH2基序一组肽激素，并且都与G蛋 白偶联受体结合。已表明RFamide参与全身的许多过程，包括炎症反应、对食物摄入和发育 的控制。RFamide发挥作用的一个主要方面是生殖，其涉及两种RFamide 促性腺激素抑制 激素(GnlH)和亲吻肽。KiSS-1基因位于人染色体lq32上，由四个外显子-两个非翻译和两个部分翻译的 外显子组成，产生145个氨基酸(aa)的肽[1]。前体肽被剪切成54个氨基酸的长度，还可 以进一步被截短至14、13或10个氨基酸；这些截短物被统称为亲吻肽，并且在哺乳动物中 高度保守。目前已知这些肽是孤儿G蛋白偶联受体(GPCR)(在大鼠中被称为GPR54，在人中 被称为AX0R12)的配体[2-4]。10aa的肽，YNWNSreLRF_NH2足以激活受体。GPR54受体具有396aa的开放阅读框架，并与甘丙肽(galanin)受体家族相关，但 是其并不与甘丙肽结合。大鼠GPR54在且哺乳动物中高度保守，与人受体有81 %的同源性， 与小鼠有85%的同源性[2，4，5]。在脑和外周组织中的受体和配体已得到充分表征，其中 GPR54和KiSS-1位于下丘脑、主动脉、卵巢、前列腺和胎盘，GPR54还表达于垂体中[2，4，6， 7]。考虑到受体和配体表达的位置，假设了它们在生殖中起作用，并且通过证明GPR54 因杂合和纯合突变性功能缺失而引起特发性低促性腺激素性性腺功能减退症(iHH)而得 到证实，在iHH患者中表现青春期延迟或无青春期(failed puberty)，以低或无血浆促黄 体激素(LH)脉冲为特征[8-13]。这也在GPR54-/-小鼠中观察到，其具有小的睾丸/卵巢， 小的外生殖器和输精管，发育不全的Leydig细胞和子宫角，与在iHH人患者中看到的非常 相似[14]。这就使得关注KiSS-1和GPR54在控制青春期尤其是其时机中起作用的假设。 之后，发现青春期猴子的KiSS-1 mRNA水平比幼年期猴子更高[15]。小鼠在第10日(dlO) 没有KiSS-1神经元，从第25日开始在前腹侧室旁核(Anterioventral Paraventricular nucleus,AVPV)中出现KiSS-1神经元，并且雄性小鼠大约在第45日而雌性小鼠在第61日 增加至成年水平。这与这些动物的青春期时机相一致[16]。然而，GPR54 mRNA水平在出生 后的整个青春期保持恒定，因此，亲吻肽输注可在所有阶段刺激LH释放。因此，亲吻肽被认 为青春期始发中GnRH分泌的主要调节剂[17]。亲吻肽和GPR54在下丘脑中的表达产生了亲吻肽可能参与调控下丘脑_垂体_性 腺(HPG)轴的假设。已通过证明亲吻肽在雄性大鼠和人中以剂量依赖的方式快速增加血 浆促黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)和睾丸素(其中其对LH的强效作用是对FSH的10 倍)[18-20]而证实了这种假设。还进一步证明可以通过施用促性腺激素释放激素受体 (GnRHR)拮抗剂而消除所述促性腺激素的增加。这表明亲吻肽在下丘脑水平发挥作用以 刺激GnRH释放[15]。有关下丘脑的中间隆起处的GnRH神经元具有GPR54受体，而90% 的KiSS-1神经元纤维与GnRH-免疫反应性神经元共定位的发现进一步证实了这一点[21， 22]。另外，GT1-7下丘脑细胞也表达KiSS-1和GPR54 mRNA，其因对雌二醇反应而增加，而亲吻肽在24小时后刺激这些细胞释放GnRH[23]。以上数据还表明亲吻肽并不在垂体水平起 作用，但是尚未排除直接在垂体水平起作用。其他研究小组还证明亲吻肽在垂体中的促性 腺激素细胞和生长激素细胞中表达，并且亲吻肽可以直接刺激LH和生长激素的释放[24， 25]。KiSS-1神经元定位于啮齿动物和灵长动物下丘脑的弓状核(ARC)和AVPV。然而 在羊和大鼠中，仅在ARC中发现KiSS-1神经元[16，26，27]。现在已确定ARC参与类固醇的 负调节，而AVPV参与促性腺激素释放的正反馈控制。首次注意到，在将雄性小鼠阉割之后， 观察到在ARC中，KiSS-1细胞数量和mRNA表达水平增加，并且雌激素替代使其降低至正常 水平，而在AVPV中，KiSS-1细胞数量减少，并且雌激素给药使其升高回正常水平[26]。现 在已证明KiSS-1细胞体表达雌激素受体a (ERa )和黄体酮受体，表明KiSS_l在类固醇反 馈环中的作用[27，28]。这表明ARC在负控制下调节LH脉冲，而AVPV在正控制下可能刺激 LH激增和诱导排卵。这通过亲吻肽抗血清甚至在高雌激素存在下也抑制大鼠LH激增而得 到证明，此外，还因为雌鼠AVPV中的KiSS-1神经元比雄鼠多10倍。该类固醇控制在整个 发情周期是起作用的，因为在AVPV中的KiSS-1-阳性细胞数量在动情前期最高，而在动情 间期最低，而在ARC中的情形则与其相反[16，29]。对于羊，作用于ARC上的正和负反馈产 生与其它哺乳动物尾部区域促进LH激增相同的反应。除了类固醇控制，KiSS-1还通过褪 黑素受到光周期的调节，而且KiSS-1神经元在其细胞体上具有Mellc受体。与保持在长日 照条件下的雌性西伯利亚仓鼠相比，保持在短日照下的雌性西伯利亚仓鼠对外源性亲吻肽 的反应也降低[30-33]。瘦素(leptin)似乎也具有影响作用，因为严格禁食的啮齿动物具 有降低的KiSS-1 mRNA、GnRH、LH和FSH以及延迟的青春期[34，35]。还在HPG轴外部的诸如心脏血管系统的外周组织中发现亲吻肽，已证明亲吻 肽-10/13作为主动脉平滑肌的血管收缩剂起作用[7，36]。GPR54还高度表达于中枢神经系 统(CNS)，脑海马区域中，已证明其通过涉及MAP激酶的机理可逆地增强海马齿状回颗粒细 胞中的突触传递，其中所述机理似乎受到钙-激活激酶和酪氨酸激酶的调控[37]。KiSS-1 和GPR54 mRNA还定位于大鼠卵巢中，其在大鼠卵巢中的表达同样与动情周期相关。在卵巢 中，KiSS-1定位于卵巢表面上皮细胞、间质腺、黄体以及在卵泡中，直至动情前期都存在于 膜细胞中，而动情前期时表达移至卵泡细胞层[6]。最近，在子宫输卵管中发现KiSS mRNA, 并且假设其参与防止异位妊娠[38]。然而，KiSS-1和GPR54的最高水平在胎盘中。在胎盘中，KiSS-1和GPR54定位于小鼠[39]和人[40]的合体滋养层细胞；和大 鼠的巨细胞[41]。GPR54还定位于外绒毛滋养层细胞，表明其可能有旁分泌作用[42]。在 人中，妊娠前三个月配体和受体都以高水平存在，但是足月仅有KiSS-1存在，而在大鼠中 到E18. 5期二者都不存在。这与滋养层的侵入相一致，而KiSS-1由于其抗转移性质而被假 设为该侵入的抑制剂[39，41]。还已知亲吻肽是许多癌症组织例如胰腺癌、甲状腺癌和肝细胞癌中的抗转移因 子[43-45]。已假设了此功能的不同机制，包括基质本文档来自技高网...

【技术保护点】
亲吻肽拮抗剂在制备用于治疗个体中由亲吻肽活性引起和／或使恶化的病症的药物中的用途。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2007-10-8 0719592.8;US 2007-10-8 60/978,179亲吻肽拮抗剂在制备用于治疗个体中由亲吻肽活性引起和/或使恶化的病症的药物中的用途。2.亲吻肽拮抗剂，其用于治疗个体中由亲吻肽活性引起和/或使恶化的病症。3.包含以下序列的肽分子或者其片段或变体用于治疗患者中由亲吻肽活性引起和/ 或使恶化的病症的用途，或者在制备用于治疗患者中由亲吻肽活性引起和/或使恶化的病 症的药物中的用途，所述序列为X'-G/ff-X'-R/ (D) R-X3 其中X1为F或A或任意D-氨基酸残基； X2为L或A或任意D-氨基酸残基； X3为F或W ；且其中所述肽分子的C-末端氨基酸残基包含去除该残基上的电荷的基团z ；并且其中所述肽序列不为F-G-L-R-F ；F-G-L-R-W ；或F-G-(D)F-R-F。4.根据权利要求3所述的用途，其中所述肽序列不为 F-G-A-R-W ；F-G-L-(D)R-W ； F-G-(D) L-R-ff ；或 (D)F-G-L-R-W。5.根据权利要求3或4所述的用途，其中X1为(D)F。6.根据权利要求3至5中任一项所述的用途，其中X2为选自由⑶F、(D)L和(D)W组 成的组中的D-氨基酸残基。7.根据权利要求3至6中任一项所述的用途，其中所述肽序列选自由下述序列组成的组(D) F-W-L-R-W ；或 F-G-(D)W-R-F。8.根据权利要求3至7中任一项所述的用途，其中所述N-末端残基包含去除该残基上 的电荷的基团y。9.根据权利要求8所述的用途，其中X1包含去除该残基上的电荷的基团y。10.根据权利要求8或9所述的用途，其中基团y选自由下述基团组成的组乙酰基； 三氟乙酰基；环化氨基酸；或在N-末端不带电荷的合成氨基酸。11.根据权利要求3至10中任一项所述的用途，其中X3包含去除该残基上的电荷的基团z。12.根据权利要求3至11中任一项所述的用途，其中所述序列选自由下述序列组成的组I)ac.F-G- (D) F-R-ff. z ；II)ac.F-G-(D)L-R-ff. z ；III)ac.F-G-L-(D)R-ff. z ；IV)ac.F-G-A-R-ff. z ；V)ac.A-G-L-R-ff. z ；VI)ac. (D) F-ff-L-R-ff. z ；或VII)ac.F-G-(D)ff-R-F. z。13.包含以下序列的肽分子或者其片段或变体用于治疗患者中由亲吻肽活性引起和/ 或使恶化的病症的用途，或者在制备用于治疗患者中由亲吻肽活性引起和/或使恶化的病 症的药物中的用途，所述序列为xa-xb-xc-n-xd-xe-g-xf-r-f 其中或任意D-氨基酸残基； XB为N或任意D-氨基酸残基； 或任意D-氨基酸残基； XD为G或S或任意D-氨基酸残基； XlF 或 _或(D)L； XF为W或L或任意D-氨基酸残基；且其中所述肽分子的C-末端氨基酸残基包含去除该残基上的电荷的基团z ；并且其中所述肽序列不为Y-N-W-N-S-F-G-L-R-F ；(D)Y-(D)N-W-N-S-F-G-W-R-F ；(D)Y-(D)N-W-N-G-F-G-W-R-F ；(D)Y- (D)N-ff-N-S-F-G-(D)ff-R-F ；或(D)Y- (D)N-ff-N-G-F-G-(D)W-R-F。14.根据权利要求13所述的用途，其中选自由(D)F和(D)Y和(D)A组成的组中的D-氨基酸残基。15.根据权利要求13或14所述的用途，其中XB为选自由(D)A和(D)N组成的组中的D-氨基酸残基。16.根据权利要求13至15中任一项所述的用途，其中当乂4或#中的一个为(D)Y时， 另一个不为(D)N。17.根据权利要求13至16中任一项所述的用途，其中XB不都为D-氨基酸残基。18.根据权利要求13至17中任一项所述的用途，其中当矿为(D)W时，(D)F。19.根据权利要求13至18中任一项所述的用途，其中Xe为选自由(D)A和(D)W组成 的组中的D-氨基酸残基。20.根据权利要求13至19中任一项所述的用途，其中XD为选自由(D)A和(D)W组成 的组中的D-氨基酸残基。21.根据权利要求13至20中任一项所述的用途，其中当XD为S时，圹为(D)W和/或 XA 不为(D)Y。22.根据权利要求13至20中任一项所述的用途，其中当XD为S时，XF为(D)W和/或 为(D)A。23.根据权利要求13至22中任一项所述的用途，其中圹为选自由(D)L和(D)W组成 的组中的D-氨基酸残基。24.根据权利要求13至23中任一项所述的用途，其中当铲和圹都为(D)W时，XA不为 0>)Y。25.根据权利要求13至23中任一项所述的用途，其中当铲和圹都为①”时，乂八为 OOA。26.根据权利要求13至25中任一项所述的用途，其中所述N-末端残基包含去除该残 基上的电荷的基团y。27.根据权利要求26所述的用途，其中X1包含去除该残基上的电荷的基团y。28.根据权利要求26或27所述的用途，其中基团y选自由以下基团组成的组乙酰基； 三氟乙酰基；环化氨基酸；或在N-末端不带电荷的合成氨基酸。29.根据权利要求13至28中任一项所述的用途，其中所述肽分子的C-末端F残基包 含去除该残基上的电荷的基团z。30.根据权利要求13至29中任一项所述的用途，其中所述序列选自由以下序列组成的组a)Y-N-ff-N-G-F-G-L-R-F.z ；b)Y-N-ff-N-G-F-G-(D)L-R-F.z ；c)Y-N-ff-N-G-F-G-(D)ff-R-F.z ；d)Y-N-ff-N-G-(D)ff-G-L-R-F.z ；e)ac.Y-N-ff-N-G-F-G- (D) ff-R-F. z ；f)ac. Y-N-ff-N- (D) ff-F-G- (D) ff-R-F. z ；g)ac.(D)Y-N-ff-N-G-F-G-(D)ff-R-F. z ；h)ac.Y-N-(D)ff-N-G-F-G-(D)ff-R-F. z ；i)ac. Y-(D)N-ff-N-G-F-G-(D)ff-R-F. z ； j)ac. Y-N-ff-N- (D) A-F-G- (D) ff-R-F. z ； k)ac. (D)A-N-ff-N-G-F-G-(D)ff-R-F. z ； l)ac. Y-N- (D) A-N-G-F-G- (D) ff-R-F. z ； m)ac. Y-(D)A-ff-N-G-F-G-(D)ff-R-F. z ； n)ac. (D)ff-N-ff-N-G-F-G-(D)ff-R-F. z ； o)ac. (D) F-N-ff-N-G-F-G- (D) ff-R-F. z ； p)ac. (D) Y-N-ff-N-G- (D) ff-G- (D) ff-R-F. z ； q) ac. (D) A-N-ff-N-G- (D) ff-G- (D) ff-R-F. z ； r)ac. (D)A-N-ff-N-S-F-G-(D)ff-R-F. z ； s)ac. (D) A-N-ff-N-G-F-G-ff-R-F. z ；t) ac. (D) A-N-ff-N- (D) S-F-G- (D) ff-R-F. z ；或 u)ac. (D)A-N-ff-N-G-F-G-(D)L-R-F. z。31.根据权利要求1至30中任一项所述的用途，其中所述个体中由亲吻肽活性引起和 /或使恶化的病症选自包含下述病症的组增殖性疾病；子宫内膜异位症；子宫肌瘤；性早 熟；先兆子痫；胎儿宫内生长迟缓(IUGR)；异位妊娠；月经过多；高血压；冠心病；中枢神经系统(CNS)、胰腺和/或免疫系统疾病；阻抑或抑制排卵；生育病；化疗引起和/或放疗引起 的生殖组织损伤；阻抑或抑制创伤愈合；阻抑或抑制生长激素生成。32.根据权利要求31所述的用途，其中所述增殖性疾病选自包含下述病症的组良性 前列腺增生症；癌症；生殖组织的癌症；妇科癌症；前列腺癌；乳癌；卵巢癌；子宫癌；宫颈 癌；子宫内膜癌；黑色素瘤；胰腺癌；胃癌。33.如权利要求3至32中任一项所定义的肽分子，其中所述肽分子为亲吻肽拮抗剂或 者其片段或变体，该片段或变体为亲吻肽拮抗剂。34.权利要求1或2中所定义的拮抗剂或权利要求3至33中任一项所定义的肽分子， 其用于药物中。35.根据权利要求34所述的肽分子，其中所述肽分子为亲吻肽拮抗剂。36.包含以下序列的肽分子或者其片段或变体，所述序列为 X'-G/ff-X'-R/ (D) R-X3其中X1为F或A或任意D-氨基酸残基； X2为L或A或任意D-氨基酸残基； X3为F或W ；且其中所述肽分子的C-末端氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特彼得米勒，安东尼娅凯瑟琳罗思韦尔，
申请(专利权)人：医药研究委员会，
类型：发明
国别省市：GB[英国]