一种包括基因和运输因子的含基因的组合物，所述运输因子能把该基因从母体运输到胎儿细胞。用本发明专利技术的组合物给妊娠母体给药时，可以防止有基因缺陷的后代的出生，而且可以在妊娠期间治疗基因缺陷。在动物实验中，在胚胎发生期把未知基因导入动物中，可以研究该基因在个体发育中的作用。此外，该组合物可用于饲养象宠物、经济动物和家畜这样的动物。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
含基因的组合物本专利技术涉及含基因的组合物。更具体地说，本专利技术涉及用于把一基因导入妊娠母体所带的胎儿以表达该基因的含基因的组合物。本专利技术还涉及一种用于把一基因导入包括实验动物、家畜、经济动物在内的动物的胎儿的方法。近年来，已开发出几种直接把外源基因导入动物或人体内的方法，希望将这些方法应用于治疗基因组异常所引起的疾病用的基因治疗。象先天性基因缺陷这样的由先天性基因异常引起的疾病最好在产前阶段治疗。就把基因导入产前受治疗者而言，在动物试验中对受精卵进行微量注射是目前唯一的有效方法[Palmitter，R.D.&Brinster，R.L.：Annu.Rev.Genet.，20，465-499(1986)]。尽管用于受精卵的微量注射法为把基因导入胚胎发育早期开辟了道路，但尚未开发出把外源基因导入胎儿的手段。此外，微量注射法不能用于人体妊娠情况下胎儿的基因治疗。因此，本专利技术的一个目的是提供一种用于把外源基因导入发育期胎儿的方法；本专利技术的另一目的是提供一种用于该方法中的含基因的组合物。本专利技术人对用于把目的基因通过胎儿母体导入胎儿的方法进行了各种研究，结果发现，当把基因和特定运输因子一起导入母体时，它们能穿过作为胎儿和母体间血液屏障的胎盘基底膜；还发现，基因可以导入胎儿细胞以进行原位表达。这些发现导致本专利技术的完成。因此，本专利技术提供一种包括一种基因和一种运输因子的含基因的组合物，所述运输因子能够把该基因从妊娠母体运输到胎儿细胞。本专利技术还提供了一种通过将上述含基因的组合物导入妊娠母体而把基因导入胎儿细胞的方法。附图简述：-->图1表示用本专利技术的组合物给药后胎儿和母体肝脏的基因组DNA的Southern印迹分析结果。图2表示只用外源基因给药后胎儿和母体肝脏的基因组DNA的Southern印迹分析结果。图3表示交媾后第3、6、9、12和15天用本专利技术组合物给药时的胎儿基因组DNA的Southern印迹分析结果。图4表示交媾后第9天用本专利技术组合物给母体给药时从小鼠胎儿、新生小鼠、一月龄幼鼠收集的基因组DNA的Southern印迹分析结果。图5表示从图4中所示一月龄幼鼠的器官收集到的基因组DNA的狭线印迹分析结果。图6表示交媾后第9天用本专利技术组合物给母体给药时从小鼠胎儿和新生小鼠收集到的RNA的Northern印迹分析结果。图7表示收集自已导入了SV40-CAT基因的小鼠和新生小鼠的蛋白质的CAT活性。图8表示用X-gal染色获得的组织化学切片图，以及β-肌动蛋白-lacZ的表达。所述β-肌动蛋白-lacZ已通过在交媾后第8.5天用本专利技术的组合物给母体给药而导入胎儿中。图9表示小鼠胎儿(已导入的β-肌动蛋白-lacZ在其中得到表达)的组织切片。图10表示已导入SR-α-HST-1基因的2周龄小鼠及其母鼠的血小板数目(其中，血采自心脏)。图11表示已导入SR-α-HST-1基因的3周龄小鼠及其母鼠的血小板数目(其中，血采自眶静脉)。图12表示已导入SR-α-HST-1基因的3周龄小鼠及其母鼠血清中的HST-1蛋白浓度。本专利技术中“运输因子”这一术语用来指帮助基因运输至靶细胞的物质。本专利技术中所用的运输因子能把基因从母体导入其胎儿细胞。更具体地说，当把该运输因子导入带有胎儿的妊娠母体时，它能将基因导入胎儿细胞。运输因子的例子有阳离子脂多胺。其中，双C10-C20烷基酰胺甘氨酰基精胺是优选的，而双十八烷基酰胺甘氨酰基精胺是特别优选-->的。对本专利技术中所用的基因没有特别限制，只要该基因能用于最好在胎儿期治疗或预防的疾病即可，或者能用于为饲养象实验动物、家畜和宠物这样的经济动物而进行的基因导入即可。例如，当已经证实胎儿缺少某一基因时或当很清楚胎儿因其家族史而缺少某一基因时，这类基因就可用于本专利技术。此外，也可使用用于治疗胎儿患有的先天性疾病的基因。下表显示了先天性遗传病和缺陷基因产物之间的关系。表1先天性遗传病 缺陷基因产物家族性高胆固醇血症 低密度脂蛋白受体脂质中的代谢错误 载脂蛋白苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶 血友病甲 因子VIII血友病乙 凝固因子IX鸟氨酸转氨甲酰酶缺乏 鸟氨酸转氨甲酰酶基因高酪氨酸血症 富马酰乙酰乙酸羟化酶囊性肺纤维化 通过囊性肺纤维化的 跨膜传导调节因子假肥大性肌营养不良 小肌营养不良蛋白基因产物Li-Fraumeni综合症 p53蛋白成视网膜细胞瘤 RB蛋白Lesch-Nyhan综合症 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸 核糖转移酶腺苷脱氨酶缺陷 腺苷脱氨酶Nieman-Pick病 鞘磷脂磷酸二酯酶ITay-Sacks病 氨基己糖苷酶Aα1-抗胰蛋白酶缺陷 α1-抗胰蛋白酶抗凝血酶III缺陷 抗凝血酶III氨甲酰磷酸合成酶缺陷 氨甲酰磷酸合成酶-->生长激素缺陷(IA型) 生长激素甲状腺球蛋白缺陷 甲状腺球蛋白21-羟化酶缺陷 21-羟化酶(先天性肾上腺增生)丙酮酸脱氢酶缺陷 丙酮酸脱氢酶另外，通过把本专利技术的组合物和方法用于患自发遗传病的动物或敲除的动物(用人工方法使其具有基因功能障碍的动物)，它们就可用于基因导入模型。而且，在病毒性肝炎或婴儿恶性肿瘤的治疗中，一些反义寡核苷酸在病毒性肝炎(甲、乙或丙肝)存在下抑制病毒性基因产物，其它一些反义寡核苷酸抑制癌基因(癌基因导致象维尔姆斯瘤和成神经细胞瘤这样的婴儿恶性肿瘤)和造成其它疾病的基因的表达。被导入动物体内的基因的例子有(1)用于在动物体内产生药物的基因，(2)用于改善动物肉、物理成分、毛、乳质量的基因，(3)通过将基因从胎生动物中剔除或将基因导入胎生动物而对基因功能进行研究的基因材料，(4)用于恢复基因在基因缺陷(造成子宫中死胎)动物中的表达的基因材料。胎儿包括除人之外的哺乳动物如狗、牛、马、山羊、绵羊、猴、猫、猪、小鼠和大鼠的胎儿，也包括人的胎儿。对所采用的基因形式没有特别限制。然而，就导入和表达的容易程度而言，为表达基因而构建的质粒是特别优选的。一个强有力的启动子和/或增强子和一个基因的组合更为优选，因为促进了表达。如果使用高度器官特异性的启动子，所谓的器官击靶(organtargeting)也是可能的，其中基因在特定器官中表达。在本专利技术的含基因的组合物中，基因和运输因子可以混合物的形式存在。也可以这样的形式存在，即把混溶状态的运输因子与基因相混合。此外，也可以把已形成脂质体的运输因子与基因相混合。如果运输因子已形成一种脂质体，那么基因最好存在于脂质体内部、其膜中或膜的表面中。用来形成脂质体的方法例如有：涡动处理、超声处理、反相蒸发、冷冻干燥、增湿、采用多元醇的方法、-->机械化学法、脂溶法以及喷雾干燥法。制备脂质体时，下列成分可以作为成膜成分添加：磷脂如双十四酰基磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包括基因和运输因子的含基因的组合物，所述运输因子能把该基因从母体运输到胎儿细胞。
【技术特征摘要】
JP 1994-10-14 249469/941.一种包括基因和运输因子的含基因的组合物，所述运输因子能把该基因从母体运输到胎儿细胞。2.根据权利要求1的组合物，通过用该组合物给母体给药而将该基因导入胎儿。3.根据权利要求1或2的组合物，其中运输因子是双C10-C20烷基酰胺甘氨酰基精胺。4.根据权利要求1或2的组合物，其中运输因子是双十八烷基酰...
【专利技术属性】
技术研发人员：本真，落谷孝广，吉田尚，杉村隆，寺田雅昭，
申请(专利权)人：第一制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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