含有HGF基因的药物制造技术

含有ＨＧＦ基因的药物。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于基因治疗等的药物。本专利技术尤其涉及含有肝细胞生长因子(HGF)基因的药物以及含有HGF基因的脂质体。HGF是一种具有多种药理活性的生理活性肽。HGF的药理学活性如JIKKEN-IGAKU(实验医学(Experimental Medicine))，第10卷，第3号(增刊)，330-339(1992)中所述。考虑到其药理活性，HGF可望成为治疗肝硬变或肾脏疾病的药物；上皮细胞生长促进剂；抗癌剂；防止癌症治疗中副作用的药物；治疗肺损害、胃肠道疾病或颅内神经紊乱的药物；用于预防免疫抑制中副作用的药物；胶原蛋白降解促进剂；治疗软骨疾病、动脉疾病、肺纤维变性、肝病、血液凝集疾病、血浆低蛋白疾病或损伤；改善神经紊乱的药物；造血干细胞增强剂；以及头发生长促进剂(日本专利公开4-18028和4-49246，EP 492614，日本专利公开6-25010，WO 93/8821，日本专利公开6-172207、7-89869和6-409934，WO 94/2165，日本专利公开6-40935、6-56692和7-41429，WO 93/3061，日本专利公开5-213721，等)。已在全世界广泛研究和调查了腺苷脱氨酶缺陷、艾滋病、癌症、脓疱性纤维化和血友病等的基因治疗。但使用HGF基因的基因治疗尚属未知。这样的基因治疗是否能有效应用也不清楚。HGF是已知的一种在血液中具有较短半衰期的药物。因此，对HGF要求持续局部给药。考虑到HGF的多种药理活性，HGF可期望发展成为一种能够治疗多种疾病的药物。另一方面，当HGF全身给药时，可能会因为多种药理活性而引起副作用。另外，HGF本身静脉给药时，HGF有一缺点即大量HGF保留在肝中，减少到达靶器官的HGF的剂量。本专利技术能够解决上述难题。简单地说，本专利技术涉及(1)含有HGF基因的药物；(2)含有HGF基因的脂质体；(3)含有根据(2)的脂质体，即融合了副流感病毒的膜融合脂质体；(4)根据(2)或(3)的脂质体的药物；(5)按照(1)或(4)的药物，用于治疗动脉疾病；(6)按照(1)或(4)的药物，用于治疗软骨损伤。附图说明图1表明实验实施例1中由日本血细胞凝集病毒(HVJ)-脂质体-DNA致敏的鼠冠状内皮细胞中HGF的表达。图2表明实验实施例2中从HVJ-脂质体-对照致敏的内皮细胞表达的HGF存在和缺失状态下的细胞增长率。这里“DSF”指一组由HVJ-脂质体-对照致敏的内皮细胞，而“HGF”指一组在预定浓度的人类重组HGF存在下培养的细胞。图2中的条带表示实验实施例2中HVJ-脂质体-DNA致敏的内皮细胞的细胞增长率，这里“DSF”为一组由HVJ-脂质体-对照致敏的内皮细胞，“HGF载体”为一组HVJ-脂质体-DNA致敏的内皮细胞。图3表示实验实施例2中抗HGF抗体存在或缺失时HVJ-脂质体-DNA致敏的内皮细胞增长率，“对照”代表一组于IgG对照物中培养的HVJ-脂质体-对照致敏的内皮细胞；“HGF”代表一组于IgG对照物中培养的HVJ-脂质体-DNA致敏的内皮细胞；“HGFab”代表了一组于兔抗人类HGF抗体中培养的HVJ-脂质体-DNA致敏的内皮细胞。细胞增长率(％)表达为当对照组增长率为100％时的相对百分比。图4表示实验实施例3中从HVJ-脂质体-DNA致敏的大鼠血管平滑肌细胞(以下简写为VSMC)的培养物上清液对大鼠冠状内皮细胞的细胞增长作用。“对照”代表加有由HVJ-脂质体-对照致敏的鼠VSMC培养物上清液的一组；“HGF”代表加有由HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠VSMC培养物上清液的一组。图5表示实验实施例3中由HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠VSMC培养物上清液中HGF浓度通过抗人类HGF抗体测定的结果。图中，“未处理”代表一组未致敏VSMC培养物上清液，“对照”代表由HVJ-脂质体-对照致敏的鼠VSMC培养物上清液，“HGF”代表由HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠VSMC培养物上清液。图6表示实验实施例3中由HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠VSMC培养物上清液中HGF浓度通过抗鼠HGF抗体测定的结果。图中，“未处理”代表一组未致敏VSMC培养物上清液，“对照”代表由HVJ-脂质体-对照致敏的鼠VSMC培养物上清液，“HGF”代表由HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠VSMC培养物上清液。图7表示实验实施例4中HVJ-脂质体-DNA致敏的大鼠冠状内皮细胞培养物上清液对大鼠冠状内皮细胞的细胞增长作用。其中，A、B、C分别代表加HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠冠状内皮细胞培养物上清液的一组、加HVJ-脂质体-对照致敏的鼠冠状内皮细胞培养物上清液的一组及未处理的动物。图8表示实验实施例4中HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠冠状内皮细胞在抗HGF抗体存在时对大鼠冠状内皮细胞的细胞增长作用。图中，A代表加有HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠冠状内皮细胞培养物上清液的一组，B代表加有HVJ-脂质体-对照致敏的鼠冠状内皮细胞培养物上清液的一组，C代表加入抗HGF抗体至由HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠冠状内皮细胞培养物上清液的一组，D则代表加入对照抗体至由HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠冠状内皮细胞培养物上清液的一组。图9表明实验实施例5中当HVJ-脂质体-DNA致敏的人类VSMC和非致敏的人类内皮细胞共同培养时内皮细胞的增长率。图中，“对照”代表与HVJ-脂质体-对照致敏的VSMC共同培养的一组，“HGF”代表加HVJ-脂质体-DNA致敏的VSMC培养物上清液的一组。图10表示实验实施例6中当HVJ-脂质体-DNA致敏的鼠VSMC和非致敏的鼠冠状内皮细胞共同培养时内皮细胞的增长率。图中，“对照”代表与HVJ-脂质体-对照致敏的VSMC共同培养的组，“HGF”代表了HVJ-脂质体-DNA致敏的VSMC培养物上清液的组。图11表明实验实施例8中在鼠心肌直接注射HVJ-脂质体-DNA时小血管数量的增加。“HGF”代表鼠心肌直接注射HVJ-脂质体-DNA时小血管的数量，“对照”代表鼠心肌直接注射HVJ-脂质体-对照时小血管的数量。图12表明实验实施例9中注射HVJ-脂质体-DNA至关节三周后软骨样细胞的发育，可观察到甲苯胺蓝染色的蛋白聚糖的合成。图13表明实验实施例9中注射HVJ-脂质体-DNA至关节四周后软骨样细胞的发育，可观察到甲苯胺蓝染色的蛋白聚糖的合成。图14表明实验实施例9中注射比较实施例2中制备的HVJ-脂质体-DNA(TGF-β)至关节四周后，在观察甲苯胺蓝染色的蛋白聚糖的合成时未发现软骨样细胞的发育。图15表明实验实施例9中注射比较实施例1中制备的HVJ-脂质体-对照至关节四周后，在观察甲苯胺蓝染色的蛋白聚糖的合成叶未发现软骨样细胞的发育。用于本专利技术的“HGF基因”是一种能表达HGF的基因。因此，只要表达的多肽具有与HGF基本同样的作用，HGF基因可以有核酸序列的部分缺失、替代或插入，或者会有其他的核酸序列连接在其5’末端和/或3’末端上。这样的HGF基因的典型实施例包括HGF基因如自然(Nature)，342，440(1989)、日本专利公开5-111383，生物化学和生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)，163，967(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：森下龙一，荻原俊男，中村敏一，富田哲也，越智隆弘，
申请(专利权)人：安增生摩祺株式会社，
类型：发明
国别省市：