一种转基因生物培育用磁性纳米基因载体的制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种基因输送磁性纳米基因载体及其制备工艺和应用，本发明专利技术还提供一种磁性纳米基因载体负载外源基因转化动、植物细胞的方法。在本发明专利技术中，所述磁性纳米基因载体为纳米Fe3O4/PEI粒子，在外源磁场的驱动下，其携带外源基因进入动、植物体细胞和/或生殖细胞，实现遗传转化与表达，获得性能优良的转基因培育新品种。本发明专利技术制备方法和转化方法操作简单，易于掌握，便于推广；本发明专利技术的转化方法不受物种种类限制，不要求有受体细胞特异性，可广泛应用于动、植物转基因技术；在本发明专利技术转化方法中，可显著提高基因的转化效率；本发明专利技术通过控制与磁性纳米基因载体结合的外源基因的量，可有效地控制转入的外源基因的拷贝数。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种转基因生物培育用磁性纳米基因载体的制备方法，包括如下步骤，步骤A，制备纳米Fe3O4溶胶：按物质的量之比为1～3:1称取铁盐和亚铁盐并加入稀酸溶液中，溶解搅拌后向其中加入弱碱溶液使得溶液pH值呈碱性，继续搅拌至反应结束，用酸中和溶液pH值至6～8；前述制备过程在氮气或氩气保护下进行；将反应体系固液分离，反复清洗固体以除去稀酸中带入的阴离子；所得固体中加入去离子水或乙醇，充分搅拌至均匀分散，然后加入H2O2并加热至70～100℃反应2～24h，得到棕色透明状溶液，即为纳米Fe3O4溶胶；步骤B，配制PEI?CH2Cl2溶液：取PEI和十二烷基硫酸钠加入到CH2Cl2溶液中，配成PEI?CH2Cl2溶液；步骤C，复合：将上述纳米Fe3O4溶胶加入PEI?CH2Cl2溶液中，进行复合反应；步骤D，清洗和干燥：步骤C得到的复合溶液固液分离后，固相中加入乙醇或去离子水洗涤以除去磁性纳米Fe3O4/PEI表面残留的CH2Cl2和PEI，回收沉淀物并冷冻干燥，得到PEI包膜的纳米Fe3O4/PEI粒子即所述磁性纳米基因载体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：崔海信，王琰，孙长娇，孟志刚，孙金海，李奎，姜建芳，赵翔，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所，
类型：发明
国别省市：