动静脉和静脉移植物处理的方法和组合物技术

一种用于预防血液透析患者的血液透析发病位点衰竭的方法，该方法包括： 把所说的血液透析发病位点与互补于核原癌基因ｍＲＮＡ的寡核苷酸相接触。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
动静脉和静脉移植物处理的方法和组合物相关申请的交叉参见本申请是1994年10月17日申请的指定美国的PCT申请US 94/11853(本文一并参考)的部分继续申请，US 94/11853是1993年10月年15日提交的申请08/138,637(本文一并参考)的部分继续申请。专利技术所属
本专利技术总的来说涉及寡核苷酸及其用作治疗剂的用途，更具体地说是使用寡核苷酸反义和反基因化合物来抑制胞外基质蛋白质合成，特别是从成纤维细胞和平滑肌细胞合成。引言动静脉分流器和瘘管给血液透析患者的循环系提供血液透析发病位点(access sites)。遗憾地是，动静脉分流器和瘘管衰竭很普遍，其能够产生300,000个以上的世界范围的血液透析患者的严重医学并发症(Newman，G.E.，血管病：外科和插入疗法，E.Srranciness，Ed.(1994))。研究发现，12％至45％的动静脉分流器和瘘管在第一年之内衰竭(Newman，G.E.，(1994)此处引用)。发病位点衰竭的主要原因是侵入性的静脉狭窄(Sedberg等，循环，80：1726-1736(1989))。衰竭或机能障碍的血液透析发病位点需要治疗，或通过外科取代动静脉分流器或转导管插入(例如，气囊血管成形术或斯坦特固定模)以扩大流出分流术或瘘的静脉血管(Newman，G.E.，(1994)此处引用)。因而，动静脉分流器和瘘并发症的慢性血液透析患者每年在医院花费大约30天以保持他们的发病位点的开放。这样，血液透析发病位点已知为血液透析患者的“唯一致命的弱点”，尽管动静脉分流器或瘘的形成对方便的血液透析来说是必要的。动静脉分-->流器和瘘通常作为Brescia-Cimino动静脉瘘或聚四氟乙烯(PTFE，Gor-Tex)移植物形成。在大多数例子中，经由PTFE移植物在前臂区域、肩区域或腿区域静脉直接或间接地通过手术与动脉连接。动静脉瘘仅是逐渐变得有时衰竭的动静脉移植物的一个例子。造成需要治疗的医学疾病的其它类型的移植物(即静脉移植物)包括：主动脉冠状旁路移植物、颈动脉移植物、髂股移植物和fermoropopliteal移植物。在这些移植物中，把静脉片断置于动脉系统中。影响所有类型的动静脉移植物或置于动脉系统中的静脉移植物的主要医学疾病是血管内部随时间直径减少。这通常发生于流出静脉之中，或移植体的形成部分(本文作为移植物的“静脉部分”)。人们相信：静脉和高的动脉压的接触改变了静脉的形态学；移植物的静脉部分的内部直径在直径上显著减少。移植物也受血栓形成和其它医学病症，如感染的影响。在本专利技术之前，动静脉和静脉移植物治疗效能有限，通常需要攻击性的治疗。曾把努力集中于加厚的血管壁的段中机械地增加移植物的内部直径，如在衰竭的血液透析发病位点。其它方法简单地依赖于衰竭的移植物位点的外科修正，如在动静脉分流器取代中。这些类型的现有技术治疗需要大量的医疗监督，常需要治疗，而且在某些血液透析发病位点的情况下可最终导致不能找到适合的血液透析发病位点，如本文讨论的。有几个集中于在衰竭的移植物中的静脉形态学的研究(如动静脉移植物和静脉移植物(例如，主动脉冠状旁路)提供了这些病症的疾病机理的信息。薄壁静脉和动脉血流和压力接触作出的反应很早。静脉开始产生新内膜。这种对高动脉压和流速的反应最终导致了腔的狭窄，造成静脉的开放缩小。血管平滑肌细胞主要在血管中层与新内膜中发现。成纤维细胞在外膜和血管周围组织中发现。成纤维细胞在静脉的创伤修复期间对血管周围组织的粒化有作用。作为对伤害的反应，平滑肌细胞和成纤维细胞增加了在血管壁和血管周围组织中基质蛋白质的合成。因而，由于血管壁厚度的增加和在血管周围组织中瘢痕形成的增加，静脉变得狭窄和僵硬，这导致移植物不可逆转的衰竭，如在动静脉瘘或静脉移植物的情况下。胞外基质蛋白质的不适当合成和/或这样的蛋白质的异常形式的合成和较宽范围的有害条件相关，这些条件包括许多很少可遗传的疾病以及更常-->见的获得性病症，如失去动静脉和静脉移植物的开放(Sedberg等，循环，80：1726-1736(1989))、纤维变性的皮肤疾病、肺部纤维变性、骨关节炎、血管再狭窄等，例如，Weiss和Jayson，编者，健康和疾病中的胶原(Churchill Livingstone，爱丁堡，1982)；Gardner，编者，结缔组织疾病的病理基础(Lea Febiger，费城，1992)。胞外基质主要由胶原、蛋白多糖、弹性蛋白和纤连蛋白组成。许多这样的疾病和对物理、化学和/或生物损伤的十分复合物的生物反应有关。这样的反应包括各种类型细胞的增殖和对反应起作用或修饰反应的生长因子的合成。例如，血管病症(如动脉粥样硬化和血管再狭窄)与局部细胞增殖和迁移以及几种结构蛋白和许多生长因子(包括血小板衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子、肿瘤坏死因子α、白介素-1、前列腺素和各种各样的原癌基因)的产生有关，例如，Ross，自然，362：801-809(1993)；Morishita等，美国科学院学报，90：8474-8478(1993)。很遗憾，在各种疾病过程中的这些因素的精确作用还没有充分了解。与胞外基质蛋白质的不适当产生相关的病症(具体来说是血管病症)的巨大经济影响对开发药物或其它治疗以医治或改善其衰弱影响的方法具有强大的推动力。在这种以及其它疾病中，疾病状况和内源基因的明显的异常表达相关，所谓的反义化合物的使用有许多优点，例如，Milligan等，医疗化学期刊，36：1923-1937(1993)；Uhlmann和Peyman，化学回顾，90：543-584(1990)；Goodchild，生物缀合物化学，1：165-187(1990)；Crooke，药物毒理学年评，32：329-376(1992)；Stein等，科学，261：1004-1012(1993)等。反义方法的特别令人注目的优点是：不必实施一种或多种初始的筛选步骤以鉴别能和治疗靶结合的候选化合物。如果已知基因的异常表达可引起药物治疗的疾病，然后候选反义药物的结构可从异常表达的基因的核苷酸序列自动测定。该方法仅需要提供寡核苷酸或其能以这样的基因形成稳定的双螺旋或三螺旋的类似物，或相关的靶多核苷酸，它们分别基于WatsonCrick或Hoogsteen结合。将会认识到：本专利技术不限于特定的作用机制。这样的化合物可以具有另外的非反义链，该序列特异性地作用于依赖于其它-->机制的病症，如但不限于aptameric作用。然后，特异性结合的反义化合物或使其各自的靶对酶促降解更敏感，或封闭翻译或加工，或以其它方式封闭或抑制靶多核苷酸的功能。如果特定的基因被鉴别为其表达与结构蛋白质(如胶原)的合成(其对疾病状况有作用)因果相关将是十分有利的。这样的鉴别将立即导致期望通过反义方法治疗一些和这样的蛋白质过量合成有关的疾病。专利技术概述本专利技术提供了一种治疗和胞外基质蛋白质(具体来说是胶原)的不适当合成有关的疾病的方法。该方法包括给需要这种治疗的个人施用有效量的对核原癌基因特异性的一种或多种反义寡核苷酸的步骤。如下面更完全的定义，“对核原癌基因特异性的反义寡核苷酸”是具有下列序列的寡核苷酸：(i)能和核原癌基因或细胞周期基因的m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于预防血液透析患者的血液透析发病位点衰竭的方法，该方法包括：把所说的血液透析发病位点与互补于核原癌基因mRNA的寡核苷酸相接触。2.权利要求1的方法，其中所说的血液透析发病位点选自由Brescia-Cimino瘘、鼻烟盒瘘、头臂瘘、PTFE血液透析移植物以及牛颈动脉移植物和自体移植物组成的组。3.权利要求1的方法，其中所说的接触包括注射、导管插入或输入。4.权利要求1的方法，其中所说的接触包括从植入物扩散或从位于血管周围组织的贮器扩散。5.权利要求1的方法，其中所说的接触包括在手术位点闭合之前通过血管周围注射或在手术位点闭合之后经皮注射而注射进血管周围组织。6.权利要求5的方法，其中所说的接触在所说的血液透析发病位点形成之后重复。7.一种用于处理血管移植物的方法，该方法包括：把所说的血管移植物与互补于核原癌基因mRNA的寡核苷酸相接触。8.权利要求7的方法，其中所说的接触包括从植入物扩散或从位于血管周围组织的贮器扩散。9.权利要求7的方法，其中所说的接触包括在手术位点闭合之前通过血管周围注射或在手术位点闭合之后经皮注射而注射进血管周围组织。10.一种用于体外预防以静脉制作的血管移植物衰竭的方法，该方法包括：体外把所说的静脉与互补于核原癌基因mRNA的寡核苷酸相接触。11.权利要求10的方法，其中所说的接触包括把所说的静脉和所说的寡核苷酸在无菌的和生理上可接受的缓冲液中温育至少10分钟。12.权利要求11的方法，其中所说的生理上可接受的缓冲液在20至37℃下。13.权利要求12的方法，其中所说的寡核苷酸的浓度为10至200μM。14.权利要求13的方法，其中所说的静脉选自由隐静脉、头静脉、贵要静脉、臂脉和股静脉组成的组。15.一种组合物，该组合物包含：血液透析发病位点和位于所说血液透析发病位点至少一层中的互补于核原癌基因mRNA的寡核苷酸。16.权利要求15的组合物，其中所说的血液透析发病位点选自由Brescia-Cimino瘘、鼻烟盒瘘、头臂瘘、PTFE血液透析移植物以及牛颈动脉移植物和自体移植物组成的组。17.权利要求15的组合物，其中所说的层选自由内皮层、血管中层、外膜和血管周围组织组成的组。18.权利要求17的组合物，其中所说的部分选自由PTFE移植物、可再充填贮器、斯坦特固定模、凝胶和可移植器件组成的组。19.权利要求15的组合物，其中所说的寡核苷酸位于贮器中。20.权利要求19的组合物，其中所说的贮器包含5至10mg之间的所说寡核苷酸。21.权利要求20的组合物，其中所说的贮器在所说的血液透析发病位点的静脉侧面。22.一种组合物，该组合物包含：一种血管移植物和位于所说的血液透析发病位点至少一层中的互补于核原癌基因mRNA的寡核苷酸。23.权利要求22的组合物，其中所说的移植物是修复瘘、动静脉分流器、天然静脉痿、静脉移植物、免疫抑制的异源移植物、免疫抑制的异种移植物和静脉自体组织移植物。24.权利要求22的组合物，其中所说的层选自由内皮层、血管中层、外膜和血管周围组织组成的组。25.权利要求24的组合物，其中所说的寡核苷酸在至少一个所说的层中的浓度至少为10μM。26.权利要求25的组合物，其中所说的寡核苷酸在所说层的细胞内部的浓度至少为1μM。27.权利要求26的组合物，其中所说的细胞是平滑肌细胞、肌纤维细胞或成纤维细胞。28.一种组合物，该组合物包含：一条切除的与人相容的静脉和位于所说的与人相容的静脉的血管壁中的互补于核原癌基因mRNA的寡核苷酸。29.权利要求28的组合物，其中所说的切除的与人相容的静脉选自由隐静脉、头静脉、贵要静脉、臂脉和股静脉组成的组。30.权利要求28的组合...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·扎柳斯基，史毅，
申请(专利权)人：托马斯杰斐逊大学，
类型：发明
国别省市：