半抗原修饰的肿瘤细胞膜和制备及应用半抗原修饰的肿瘤细胞膜的方法技术

本发明专利技术涉及分离的肿瘤细胞膜、其组合物、制备该膜和组合物的方法、和治疗癌症的方法。本发明专利技术的组合物包括由半抗原修饰的肿瘤细胞制备的组合物。本发明专利技术的肿瘤细胞膜和组合物具有下列性质：当向患有与所述肿瘤细胞相同类型的恶性肿瘤的哺乳动物施用时，能引发浸润哺乳动物肿瘤的Ｔ淋巴细胞，引发对哺乳动物肿瘤的炎性免疫应答，引发对哺乳动物肿瘤的迟发型过敏反应。本发明专利技术的膜和组合物也能在体外刺激Ｔ细胞。本发明专利技术的方法涉及治疗癌症，包括施用一种治疗有效量的肿瘤细胞膜。本发明专利技术也涉及一种制备半抗原修饰的肿瘤细胞膜的方法和含有该膜的剂型。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
半抗原修饰的肿瘤细胞膜和制备及应用半抗原修饰的肿瘤细胞膜的方法有关政府基金的参考文献此处描述的本专利技术是在国家卫生研究所-国家癌症研究所基金号CA-39248的许可或授权下的工作中进行的。美国政府可具有本专利技术的某些权利。Fujiwara等人，免疫学杂志，1984132，1571表示，某些半抗原化的肿瘤细胞，即与半抗原三硝基苯(TNP)结合的肿瘤细胞，能在鼠系统中诱导对未修饰的肿瘤细胞的系统性免疫，只要该小鼠首先在无半抗原特异的抑制T细胞的情况下对该半抗原致敏。被治疗小鼠的脾细胞在未治疗的受者动物中完全并特异地阻止了肿瘤的生长。Flood等人，免疫学杂志，1987，138，3573显示，用TNP结合的紫外线诱导的“退化”肿瘤加以免疫的小鼠能排斥TNP结合的“进行性”肿瘤，这是非免疫性的。而且，这些小鼠随后耐受未结合的“进行性”肿瘤的攻击。在另一个实验系统中，Fujiwara等人，免疫学杂志，1984，133，510证明，在环磷酰胺预处理后用三硝基氯苯(TNCB)致敏的小鼠通过对肿瘤细胞的原位半抗原处理能治愈较大(10mm)的肿瘤；随后，这些动物特异地耐受未结合的肿瘤细胞的攻击。Fujiwara等人的教导由于包括下列的几个原因而不同于本专利技术A．Fujiwara的组合物中使用的细胞来源于诱导的可移植鼠肿瘤，而不是来源于自发的人类肿瘤；B．Fujiwara的组合物用于免疫预防，而本专利技术使用免疫治疗；C．Fujiwara的组合物作为局部治疗施用，而本专利技术的组合物通过全身接种施用；D．Fujiwara的组合物不引起肿瘤退化，而本专利技术的组合物至少在相当一部分所治疗患者中引起退化和／或使存活时间延长；和E．Fujiwara施用肿瘤细胞，而本专利技术教导肿瘤细胞膜的施用。最近证明了存在能与未修饰的组织交叉反应的T细胞。Weltzien及同事显示，从用TNP修饰的同源淋巴细胞免疫的小鼠中产生的I类MHC限制性T细胞克隆能应答MHC相关的、TNP修饰的“自身”肽。Ortmann，B．等人，免疫学杂志，1992，148，1445。另外，已经明确，用TNP修饰的淋巴细胞免疫小鼠引起可在体外显示次级增殖反应和对TNP修饰细胞有细胞毒性反应的脾T细胞的发展。Shearer，G．M．，欧洲免疫学杂志，1974，4，527。由用DNP或TNP修饰的自体细胞免疫引起的、以应答未修饰的自体细胞的淋巴细胞的潜能是相当有意义的，因为这可能与两种临床问题有关1)药物诱导的自身免疫病，2)癌症免疫治疗。对于前者，曾经建议用口服药作为半抗原，它与正常的组织蛋白质结合形成可被T细胞识别的免疫复合物。Tsutsui，H．等人，免疫学杂志，1992，149，706。随后，能发展为自身免疫病，例如，系统性红斑狼疮，甚至在取消不喜欢的药物之后仍持续。这将意味着可与未修饰的组织交叉反应的T淋巴细胞的最终产生。这些实验的共同特征是在不诱导抑制细胞的环境下用半抗原致敏。环磷酰胺预处理的、TNCB致敏的小鼠的脾细胞显示抗辐射性“增强的辅助功能”，即，它们特异地增强抗TNP细胞毒性的体外产生。而且，一旦这些增强的辅助功能被体外接触TNP结合的自体淋巴细胞所激活，则它们也能增强对非相关抗原包括肿瘤抗原的细胞毒性(Fujiwara等人，1984)。Flood等人(1987)，同上文，显示这种增强的辅助活性由具有Lyt-1+、Lyt-2-、L3T4+、I-J+表型的T细胞所介导，并提出这些细胞是反抑制细胞，一种新类型的免疫调节T细胞。对黑素瘤患者的免疫治疗显示，在用初级抗原匙孔戚血蓝蛋白致敏三天前施用高剂量(1000mg／M2)或低剂量(300mg／M2)的环磷酰胺，显著增强了对该抗原的迟发型过敏反应的获得(Berd等人，癌症研究(Cancer Res．)，1982，42，4862；癌症研究，1984，44，1275)。低剂量环磷酰胺预处理使转移性黑素瘤患者应答自体黑素瘤疫苗注射，产生对自体黑素瘤细胞的迟发型过敏反应(Berd等人，癌症研究，1986，46，2572；癌症研究，1988，6，335)。环磷酰胺施用导致外周血淋巴细胞非特异性T抑制功能的降低(Berd等人，癌症研究，1984，44，5439；癌症研究，1987，47，3317)，这可能是由于耗贫了CD4+、CD45R+抑制诱导T细胞(Berd等人，癌症研究，1988，48，1671)。该免疫治疗方案的抗肿瘤作用似乎受开始施用疫苗与形成对肿瘤细胞的迟发型过敏反应之间的过长间隔所限制(Berd等人，美国癌症研究学会学报(Amer．Assoc．Cancer Res．)，1988，29，408(#1626))。因此，仍需要提高这种疫苗的治疗效率以使其更具免疫原性。大多数肿瘤免疫学家现在赞同，T淋巴细胞-负责肿瘤免疫的白细胞-向肿瘤块中的浸润是免疫系统破坏肿瘤的先决条件。因此，许多注意力已经集中于已知如NCI的Stephen Rosenberg博士所开创的“TIL”治疗。Rosenberg博士和其他人从人类转移癌中提取出少量T淋巴细胞，这些T淋巴细胞天然存在，通过与白细胞介素2(IL2)-T淋巴细胞的一种生长因子-一起体外培养能大大增加其数量。Topalian等人，临床肿瘤学杂志(J．Clin．Oncol．)，1988，6，839。然而，这种治疗还不是十分有效的，因为注射的T细胞的能力仅限于向肿瘤部位的“回归”。在大量研究中在治疗上利用了高浓度IL2诱导淋巴细胞成为非特异性细胞毒性杀伤细胞的能力(Lotze等人，生物学反应杂志(J．Biol．Response)，1982，3，475；West等人，新英格兰医学杂志(New Engl．J．Med．)，1987，316，898)。然而，由于高剂量静脉内IL2的强毒性，使该方法具有局限性。已将少量注意力投向以下现象，相当低浓度的IL2能通过诱导抗原活化T细胞的扩充而作为免疫佐剂(Talmadge等人，癌症研究，1987，47，5725；Meuer等人，柳叶刀(Lancet)，1989，1，15)。因此，仍然需要理解并努力开发IL2作为免疫佐剂的用途。据认为，人类黑素瘤表达可被T淋巴细胞识别的独特表面抗原。Old，L．J．，癌症研究，1981，41，361；Van der Bruggen，P．等人，科学，1991，254，1643；Mukherji，B．等人，免疫学杂志，1986，136，1888；和Anichini，A．等人，免疫学杂志，1989，142，3692。然而，在体内诱导对这些抗原的有效T细胞介导反应的困难限制了在本专利技术人进行工作之前的免疫疗法。提出了几种模型来解释似乎什么是对人类肿瘤相关抗原的耐受性。包括1)下调初期抗肿瘤反应的肿瘤抗原特异性抑制细胞。Mukherji等人，同上文；Berendt，M．J．和R．J．North．，实验医学杂志(J．Exp．Med．)，1980，151，69。2)人类肿瘤细胞不能引发T辅助细胞或为这些T细胞提供共刺激信号。Fearon，E．R．等人，细胞(Cell)，1990，60，397；Townsend，S．E．和J．P．Allison，科学，1993，259，368；和3)主要组织相容性产物在肿瘤细胞上降低的表面表达，这本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有半抗原修饰的人肿瘤细胞膜的组合物。

【技术特征摘要】
US 1998-2-17 09/025,0121．一种含有半抗原修饰的人肿瘤细胞膜的组合物。2．权利要求1的组合物，其中所述肿瘤细胞膜分离自选自癌细胞和非实体瘤细胞的肿瘤细胞。3．权利要求1的组合物，其中所述肿瘤细胞膜来源于选自白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、黑素瘤、乳癌、肺癌、肾癌和前列腺癌的肿瘤。4．权利要求3的组合物，其中所述白血病是急性骨髓性白血病。5．权利要求1的组合物，其中所述肿瘤细胞膜是选自同源肿瘤细胞膜和同种异体肿瘤细胞膜的肿瘤细胞膜。6．权利要求5的组合物，其中所述同源肿瘤细胞膜是自体的。7．权利要求1的组合物，其中所述半抗原选自二硝基苯、三硝基苯、N-碘乙酰基-N’-(5-磺基-1-萘基)乙二胺、三硝基苯磺酸、异硫氰酸荧光素、砷酸苯异硫氰酸酯、三硝基苯磺酸、磺胺酸、阿散酸、二硝基苯-S-芥及其组合。8．权利要求1的组合物，其还含有佐剂。9．权利要求8的组合物，其中所述佐剂选自卡介苗、QS-21、脱毒的内毒素和细胞因子。10．权利要求1的组合物，其具有当对患有与所述肿瘤细胞膜相同类型的恶性肿瘤的人施用时，能引发浸润该病人肿瘤的T淋巴细胞的性质。11．权利要求1的组合物，其具有当对患有与所述肿瘤细胞膜相同类型的恶性肿瘤的人施用时，能引发对该病人肿瘤的炎性免疫应答的性质。12．权利要求1的组合物，其具有当对患有与所述肿瘤细胞膜相同类型的恶性肿瘤的人施用时，能引发对该病人肿瘤的迟发型过敏反应的性质。13．权利要求1的组合物，其中所述肿瘤细胞膜是同种异体的，该组合物进一步包含一种抗原呈递细胞。14．权利要求1的组合物，其中所述肿瘤细胞膜是同种异体的，所述抗原呈递细胞是同源的。15．权利要求1的组合物，其中所述肿瘤细胞膜是同种异体的，所述抗原呈递细胞是自体的。16．一种治疗癌症的方法，包括对人施用一种含有治疗有效量的半抗原修饰的人肿瘤细胞膜的组合物，其中该病人患有与该肿瘤细胞膜相同类型的恶性肿瘤。17．权利要求16的方法，包括引发浸润该病人肿瘤的T淋巴细胞和测定浸润该病人肿瘤的T淋巴细胞。18．权利要求16的方法，包括引发对该病人肿瘤的炎性免疫应答和测定该炎性免疫应答。19．权利要求16的方法，包括引发对该病人肿瘤的迟发型过敏反应和测定该迟发型过敏反应。20．权利要求16的方法，其中所述恶性肿瘤选自癌和非实体瘤。21．权利要求16的方法，其中所述恶性肿瘤选自白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、黑素瘤、乳癌、肺癌、肾癌和前列腺癌。22．权利要求21的方法，其中所述白血病是急性骨髓性白血病。23．权利要求16的方法，其中所述肿瘤细胞膜是选自同源肿瘤细胞膜和同种异体肿瘤细胞膜的肿瘤细胞膜。24．权利要求23的方法，其中所述同源肿瘤细胞膜是自体的。25．权利要求16的方法，其中所述半抗原选自二硝基苯、三硝基苯、N-碘乙酰基-N’-(5-磺基-1-萘基)乙二胺、三硝基苯磺酸、异硫氰酸荧光素、砷酸苯异硫氰酸酯、三硝基苯磺酸、磺胺酸、阿散酸、二硝基苯-S-芥及其组合。26．权利要求16的方法，其中所述组合物还含有一种佐剂。27．权利要求26的方法，其中所述佐剂选自卡介苗、QS-...

【专利技术属性】
技术研发人员：D伯德，佐藤隆美，
申请(专利权)人：托马斯杰斐逊大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]