本发明专利技术为用４（３Ｈ）喹唑酮防治Ｈ１Ｎ１型流感病毒，涉及防治流感药物领域，现在比较理想的抗流感病毒的化学合成药物选择性低，不良反应大，长期使用易产生耐药性，且价格昂贵，本发明专利技术采用从大青叶中提取的单体化合物４（３Ｈ）喹唑酮，经动物试验，体外试验和临床试验表明抗流感病毒效果好，具有广泛的适应性，且药源丰富，价格低廉，毒副作用低，不易形成耐药性，制成剂型为片剂、口服液、颗粒剂，成人人体临床应用剂量为６０ｍｇ／６０Ｋｇ，每天服用２－３次，连续服用５天。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及防治H1N1流感病毒的药物领域。
技术介绍
流感是危害人类生命与健康的一种急性病毒性呼吸道传染病，每年冬春季节均有大规模 爆发与流行。目前流感的主要预防措施是疫苗免疫接种。由于流感病毒抗原变异和疫苗使用 中客观存在的问题，疫苗的预防效果只有70% 90%。另外，临床上唯一可选用的抗流感药 物一金刚垸胺、金刚乙胺，但是它们仅对甲型流感有效，对乙型无效，而且症状一旦出现后， 治疗效果不是很好；另外，由于药物的副作用较大，老年人不易耐受，易引起耐药株出现， 使其应用受限。广谱抗病毒药物病毒唑可减轻甲、乙型流感的临床症状，但因其副作用较大， 有致畸的可能， 一直未被FDA批准用于治疗流感。因此寻找安全有效的抗流感病毒新药仍是当 前重要课题。4 (3H)喹唑酮是大青叶中的抗病毒有效成分，4 (3H)喹唑酮的分子式为C8H6N20，结 构式为O我们在专利申请号为200810001174. 4的申请文件中公开了提取工艺，经药理试验表明具 有抗病毒、抗肿瘤、抗高血脂、抗炎的作用，并且在一定浓度范围内，可显著促进脾细胞增 殖及刀豆蛋白诱导的淋巴细胞增殖。我们用4 (3H)喹唑酮进行了抗H1N1流感病毒的研究，以便寻找新的抗H1N1流感病毒的新药。
技术实现思路
为了试验4 (3H)喹唑酮抗流感病毒的作用，进行了以下试验。一、动物试验 1实验材料 1. 1药物4 (3H)喹唑酮(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部新兽药重点工程实验室提 供，含量〉85%)盐酸金刚垸胺(药物对照，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部新兽药重点工程 实验室提供提供)1. 2病毒H1N1型流感病毒(2337/A/甘肃城关/1771/2006，甘肃省疾病预防控制中心提供) 1.3小鼠昆明小白鼠，体重18 22g，雌雄各半，由甘肃省疾病预防控制中心提供。 1.4器材和试剂小鼠灌胃针、高压灭菌生理盐水、 一次性lml注射器、消毒酒精棉等。 2实验方法2.1流感病毒对小鼠的半数致死量(LD5。)测定将鸡胚增毒后的病毒稀释10—'-10—5。乙醚麻醉小鼠后，将稀释的病毒0.05ml/只滴鼻， 每个浓度感染8只(10—10—5 )。分别装入标记好的鼠盒内。观察两周内各组小鼠死亡数，计 算出半数致死量LD5。。2.2 4 (3H)喹唑酮对小鼠最大无毒浓度的测定将4(3H)喹唑酮稀释10mg/ral-1.25mg/ml4个浓度组，2ml/只灌胃，3次/d，连续两天， 每个浓度给药8只小鼠，并设一个正常对照组(每d灌胃等量生理盐水)，给药后观察5d， 逐日记录每组小鼠中毒情况。2. 3 4(3H)喹唑酮对H1N1型流感病毒感染小鼠的治疗作用 2. 3. 1给药及处理各组小鼠在乙醚轻度麻醉后滴鼻感染H1N1型流感病毒(0.05ml/只，15LD5。)。攻毒前一天 给药，2次/d。 4(3H)喹唑酮组(2.5、 1.25和0.625 mg/ml)、金刚烷胺组每只灌药O. 4ml/d， 正常对照组、模型对照组给等容积的生理盐水，连续灌胃5d，观察记录小鼠状态及死亡情况，直到14d后称体重，断颈处死，观察肺部病变。取出肺脏，计算肺指数，求出肺指数抑制率。 2. 3. 2死亡保护率的测定将150只小鼠随机分成5组，每组30只。小鼠用乙醚轻度麻醉，以10LD5。H1N1型流感病毒 液滴鼻感染，每只0.05ml。第二天各组小鼠分别灌胃给药(模型组和正常对照组灌胃同等体 积的生理盐水)，2次/d， 0.2ml/只，连续5d。观察14d内小鼠死亡情况。在相同条件下自由 饮水、摄食，保持自然光照，统计死亡数，算出死亡率、死亡保护率。死亡率每组死亡动物数/每组动物数X 100%死亡保护率=(病毒对照组死亡率-实验组死亡率)X100% 2. 3. 2肺指数的测定取出全肺，去除周围组织。生理盐水清洗，用滤纸将水分吸干。称肺重量，计算肺指数 和肺指数抑制率。肺指数；j、鼠肺重(g) /小鼠体重(g) X100%肺指数抑制率=(对照组平均肺指数一实验组平均肺指数)/对照组平均肺指数X 100% 2.4 4(3H)喹唑酮对FM1株感染小鼠肺中病毒血凝滴度的影响60只小鼠随机分为6组，每组10只，分别为模型组、金刚烷胺对照组、4(3H)喹唑酮组(2. 5、 1.25和0.625 mg/ml)及正常对照组。分别灌胃给药(模型组和正常对照组灌胃同等体积的生 理盐水)，2次/d， 0.2ml/只，连续5天。在乙醚轻度麻醉下，前5组用H1N1型流感病毒液滴鼻 感染，每鼠4滴，约0.05ml。正常对照组用等量生理盐水滴鼻。病毒感染后72h脱颈椎处死小 鼠，取鼠肺，加入生理盐水(肺重(g) /生理盐水(ml)4/9)后用研浆器研磨，制成鼠肺悬液， 经每分钟3000转离心沉淀20分钟，取上清按常规方法做微量血凝试验[11]。 2. 5数据处理成组设计的多个样本均数比较采用方差齐性检验，单因素方差分析；多个样本率比较采 用t检验。全部数据采用SPSS(13.0)处理，P〈0.05为有统计学意义。3实验结果3.1 LDs。的测定结果通过测定表明，H1N1型流感病毒对小鼠的LD5。-1(T'67。3.2 4 (3H)喹唑酮对小鼠最大无毒浓度的测定结果根据实验结果，4(3H)喹唑酮在2.5mg/ml时，对小鼠无不良影响，与正常对照组的小鼠 无明显区别，表明4(3H)喹唑酮在上述浓度下对小鼠无毒性作用。 3.3 4(3H)喹唑酮对H1N1型流感病毒感染小鼠的治疗作用结果 3.3.1 4(3H)喹唑酮对H1N1型流感病毒感染小鼠死亡率的影响(见表一)表一 4(3H)喹唑酮对病毒性肺炎小鼠存活时间的影响(n=30)组别死亡数(只)死亡率(％)存活时间(d)保护率(％)模型对照组2686. 79. 1±2.4一2. 5 mg/ml喹唑酮155011. 7±2. 550. 0* *1.25mg/ml喹唑酮186011.5±2. 640. 0*0. 63mg/ml喹唑酮217010.9±2.7*23.3金刚垸胺组31013.7±1. 190. 0* *注与模型对照组相比'P<0. 05，**P<0. 01(下同)试验结果表明，4(3H)喹唑酮高、中剂量组可使感染流感病毒小鼠的死亡率明显降低，存 活时间明显延长，与对照组相比，有显著性差异。3. 3. 2 4(3H)喹唑酮对H1N1型流感病毒感染小鼠肺指数的影响(见表二) 表二 4(3H)喹唑酮对小鼠肺指数的影响组别体重(g)肺指数(g/100 g)抑制率(％)正常对照组20.5士0.710. 95士0.05一模型对照组15. 1±1.031.65±0. 16一2. 5 mg/ml喹唑酮16.6±1.23*1.42士0.8159. 151. 25 mg/ml喹唑酮16. 3±1.621. 33±0. 18*45. 960. 625mg/ml喹唑酮16. 0±1. 741. 41±0. 21*33. 33金刚烷胺组17. 5士1.431.20±0. 1263.51试验结果表明，感染H1N1型流感病毒后小鼠体重明显降低、肺指数值明显增大，4(3H) 喹唑酮高剂量组可使小鼠体重明显增加、三个剂量组对H1N1型流感病毒感染小鼠引起的肺炎 均本文档来自技高网...
【技术保护点】
用４（３Ｈ）喹唑酮防治Ｈ１Ｎ１型流感病毒，其特征为４（３Ｈ）喹唑酮具有防治Ｈ１Ｎ１流感病毒作用，４（３Ｈ）喹唑酮应用于成人人体的临床剂量为６０ｍｇ／６０Ｋｇ，每天服用２－３次，连续服用五天为一疗程。
【技术特征摘要】
1、用4(3H)喹唑酮防治H1N1型流感病毒，其特征为4(3H)喹唑酮具有防治H1N1流感病毒作用，4(3H)喹唑酮应用于成人人体的临床剂量为60mg/60Kg，每天服用2-3次，连续服用五天为一疗程。2、 根据权利要求1所述的用4 (3H)喹唑酮防治H1N1型流感病毒，其特征为可在4 (3H) 喹唑酮中加入药学上可接受的辅料制成片剂、口服液、和颗粒剂。3、 根据权利要求1或2所述的用4 (3H)喹唑酮防治H1N1型流感病毒，其特征为制备 所述片剂，4 (3H)喹唑酮和各辅料用量的重量配比如下 (3H)喹唑酮l份微晶纤维素l份磷酸氢钙7_8份10%淀...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁剑平，王曙阳，王学红，徐涛，蒲秀英，尚若峰，郭文柱，郭志廷，刘宇，郭延生，华兰英，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]
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