本发明专利技术公开了一种多肽固相合成比法卢定（Ｂｉｖａｌｉｒｕｄｉｎ）粗品的制备方法，所述的方法包括步骤：（１）将Ｆｍｏｃ－氨基酸树脂或Ｆｍｏｃ－多肽树脂和去保护剂混合，除去Ｆｍｏｃ保护基；（２）在缩合剂的存在下，使带有Ｆｍｏｃ或Ｂｏｃ的氨基酸和树脂上的氨基酸或多肽进行缩合；（３）重复步骤（１）－（２），得到如式Ⅱ所示的多肽树脂；和（４）在切割剂的存在下，使多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式Ⅰ所示的比法卢定；所述去保护剂以其总体积计，其中含有３－２０％哌啶和０．５－１０％二环脒（ＤＢＵ）。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽固相合成领域，尤其涉及比法卢定(Bivalirudin)粗 品的固相合成方法。
技术介绍
在肽合成的技术方面取得了突破性进展的是R.Bruce Merrifield， 他设计了一种肽的合成途径并定名为固相合成途径。首先将一个氨基被封 闭基团保护的氨基酸共价连接在固相载体上；在去保护剂的作用下，脱掉 氨基的保护基，这样第一个氨基酸就接到了固相载体上了。然后氨基被封 闭的第二个氨基酸的羧基通过试剂活化，羧基被DCC活化的第二个氨基酸 再与已接在固相载体的第一个氨基酸的氨基反应形成肽键，这样在固相载 体上就生成了一个带有保护基的二肽。重复上述肽键形成反应，使肽链从 C端向N端生长，直至达到所需要的肽链长度。最后脱去保护基，用HF 水解肽链和固相载体之间的酯键，就得到了合成好的肽。多肽合成是一个 重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端(羧基端)向N端(氨 基端)合成。凝血酶抑制剂被认为是很有前途的抗血栓药通过凝血酶进行的蛋白 水解过程是血液凝结控制的关键所在。抗凝血肽比伐卢定(bivalirudin)，即 所谓的"二价水蛭素(himlog)"。水蛭素是一种获自吸血水蛭一医用水蛭 ///n^o me^"'"fl/"的有效治疗性凝血酶肽抑制剂，其包含20个氨基酸。US20070093423A公开了一种多肽固相合成比法卢定的方法，其采用 固液相合成方法，其操作繁琐，使用的切割剂中含有酸性物质、乙二硫醇 等物质。该方法的成本较高，产生的杂质多，产品纯度有限。因此，本领域迫切需要提供一种多肽固相合成比法卢定的新方法，其 成本低廉、得到的比法卢定纯度高，尤其可以去除HPLC主峰前杂质。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种多肽固相合成比法卢定(Bivalirudin)的制备 方法。本专利技术的另一个目的是提供一种多肽固相合成中的去保护剂。本专利技术的再一个目的是提供一种去保护剂在多肽固相合成中的应用。本专利技术的第四个目的是提供一种五氟苯酚的用途。在本专利技术的第一方面，提供了一种多肽固相合成比法卢定 (Bivalirudin)的制备方法，所述的方法包括步骤(1) 将Fmoc-氨基酸树脂或Fmoc-多肽树脂和去保护剂混合，除去Fmoc 保护基；(2) 在縮合剂的存在下，使带有Fmoc或Boc的氨基酸和树脂上的氨基 酸或多肽进行縮合；(3) 重复步骤(i) — (2)，得到如式n所示的多肽树脂；和(4) 在切割剂的存在下，使多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式 I所示的比法卢定；所述去保护剂以其总体积计，其中含有3 — 20%哌啶和0.5—10%二环 脒(DBU);优选，所述的去保护剂中还含有选自下述的一种或多种物质0 一20%1 —羟基苯并三唑(H0Bt) 、 0—8% 3-羟基-1,2, 3-苯并三嗪-4(3H)-酮 (H00BT)D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-GIu-Tyr-Leu式IBoc陽D-Phe'-Pro2陽Arg(Pbf)3-Pro4-Gly5-Gly6-Gly7-Gly8-Asn(Trt)9-Gly"-Asp(OtBu)11. Phel2-Glu(OtBu)13-Glu(OtBu)"-Ile15-Pro16- GIu(OtBu)'7-Glu(OtBu)18-Tyr(tBu) 19丄6112°曙树脂式II在另一优选例中，所述的方法包括步骤(1) 将树脂或连接有氨基酸或多肽的树脂和保护氨基酸混合，形成Fraoc-氨基酸树脂或Fmoc-多肽树脂；优选，所述的树脂是Wang树脂；(2) Fmoc-氨基酸树脂或Fmoc-多肽树脂和去保护剂混合，除去Fmoc保护基；(3) 在縮合剂的存在下，使带有Fmoc或Boc的氨基酸和树脂上的氨基酸或多肽进行縮合；(4) 重复步骤(2) — (3)，得到如式II所示的多肽树脂；和(5) 在切割剂的存在下，使多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式 I所示的比法卢定；所述去保护剂以其总体积计，其中含有3—20%哌啶和0.5 — 10%二环 脒(DBU);优选，所述的去保护剂中还含有选自下述的一种或多种物质0 一20%1 —羟基苯并三唑(H0Bt) 、 0 — 8% 3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)_ 酮(H00BT)D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu式IBoc-D-Phe'-ProZ隱Arg(Pbf)3-Pro4-GlyS-Gly6-Gly7-Gly8-Asn(Trt)9-Gly'0-Asp(O迅u)11. Phe'2-GIu(OtBu)"-Glu(OtBu)'4-Ile'5-Pro'6-Glu(OtBu)'乙Glu(OtBu)"-Tyr(tBu)'9-Leu2。-树脂式II在另一优选例中，所述的去保护剂含有5 — 15%哌啶和1一7%二环脒 (DBU);更佳地，所述去保护剂还含有选自下述的一种或多种物质0.5 — 10%1 —羟基苯并三唑(H0Bt) 、 2 — 5% 3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮 3-羟基-1,2, 3-苯并三嗪-4(3H)-酮(H00BT)。在另一优选例中，步骤(1)和步骤(2)中所述的树脂上的氨基酸是亮 氨酸；步骤(2)中所述带有Boc的氨基酸是Boc-D-Phe-0H。在另一优选例中，步骤(2)中将Fmoc-Arg (Pbf) -OH和五氟苯酚以及 縮合剂混合，使Fmoc-Arg (Pbf) -0H和树脂上的多肽进行縮合。在另一优选例中，步骤(2)中所述的縮合剂选自下述的一种或多种 N，N， -二异丙基碳二亚胺(DIC) 、 0- (7-氮杂苯并三唑-;i-基)-N，N，N' ，N '-四甲基脲六氟磷酸(HATU) 、 0-(苯并三唑-1-基)-N,N,N，N-四甲基脲四 氟硼酸(TBTU) /N-甲基吗啉(丽M)、(苯并三唑-l-基-氧)三吡咯垸辚六 氟磷酸(PyB0P) 、 l一羟基苯并三唑(H0Bt)。在另一优选例中，步骤(4)中所述的切割剂中的各物质配比为95—60 三氟乙酸(TFA) :5 — 10三异丙基硅烷(TIS) : 5 — 30水。在另一优选例中，所述切割液用冰水浴或其它致冷剂冷却至0±2°C。在另一优选例中，所述的步骤(2)重复1一3次。在本专利技术的第二方面，提供了一种多肽固相合成中的去保护剂，所述去保护剂以其总体积计，其中含有3 — 20%哌啶和0. 5 — 10%二环脒(DBU); 更佳地，所述的去保护剂中还含有选自下述的一种或多种物质0_20%1 — 羟基苯并三唑(H0Bt) 、 0 — 10% 3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮3-羟基 -1,2, 3-苯并三嗪-4(3H)-酮(HOOBT)。在另一优选例中，所述的去保护剂中含有5 — 15%哌啶和1一7%二环脒 (DBU);更佳地，所述去保护剂还含有选自下述的一种或多种物质0.5 — 10%1 —羟基苯并三唑(HOBt) 、 0. 2 — 5% 3-羟基-1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮3-羟本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多肽固相合成比法卢定（Ｂｉｖａｌｉｒｕｄｉｎ）的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤： （１）将Ｆｍｏｃ－氨基酸树脂或Ｆｍｏｃ－多肽树脂和去保护剂混合，除去Ｆｍｏｃ保护基； （２）在缩合剂的存在下，使带有Ｆｍｏｃ或Ｂｏｃ 的氨基酸和树脂上的氨基酸或多肽进行缩合； （３）重复步骤（１）－（２），得到如式Ⅱ所示的多肽树脂；和 （４）在切割剂的存在下，使多肽树脂上的多肽和树脂分离，得到如式Ⅰ所示的比法卢定； 所述去保护剂以其总体积计，其中含有３－ ２０％哌啶和０．５－１０％二环脒（ＤＢＵ）；优选，所述的去保护剂中还含有选自下述的一种或多种物质：０－２０％１－羟基苯并三唑（ＨＯＢｔ）、０－８％３－羟基－１，２，３－苯并三嗪－４（３Ｈ）－酮（ＨＯＯＢＴ） ＊＊＊。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：白俊才，张若平，刘亚东，张国庆，
申请(专利权)人：上海昂博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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