一种传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白及其在疫苗中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种重组VP2蛋白以及编码该蛋白的基因，本发明专利技术重组VP2蛋白与佐剂乳化后，制备的疫苗安全性高，对法氏囊经典株和变异毒株均具有很好的免疫效果，且所需免疫剂量小，能有效预防法氏囊经典株、变异株对鸡群的感染，具有推广应用价值。具有推广应用价值。具有推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白及其在疫苗中的用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白及其在疫苗中的用途。

技术介绍

[0002]由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起的雏鸡传染性法氏囊病((Infectious bursal disease，IBD)是一种急性，高度传染性的免疫抑制性疾病。主要侵害中枢免疫器官
‑
法氏囊，可造成机体发生严重的免疫抑制，从而降低对多种疫苗的反应性，增强对其他疾病的易感性，从而对养禽业造成了巨大的经济损失。
[0003]疫苗接种是控制传染性法氏囊病的重要措施，通过接种减毒活疫苗或者灭活疫苗使禽类产生主动免疫，从而预防传染性法氏囊病。VP2蛋白位于病毒粒子的外表面，与VP3共同构成核衣壳的骨架，是IBDV重要的毒力蛋白。大量研究证明，VP2蛋白决定了细胞嗜性，是IBDV毒力的主要决定因素。除此之外，VP2也是IBDV主要结构蛋白，能诱导中和抗体的产生，是主要的保护性抗原。目前研发的针对IBDV的多种基因工程疫苗都以VP2作为主要抗原基因。
[0004]然而，尽管疫苗接种策略是有效的，但IBDV自出现以来发生抗原漂移和抗原变异导致了抗原的多样性，目前IBDV有两个主要的血清型，分别为血清I型和血清II型，研究人员对I型病毒抗原性的研究发现I型病毒存在不同的亚型，具体可分为超强毒株、经典毒株及变异毒株。其中变异毒株及超强毒株从上世纪80年代末开始出现，由于其抗原性和病原毒力发生较大变异。而市面上大多数商品化的IBDV活疫苗都是基于经典毒株研制的，因而对于变异株，原有的商业疫苗难以起到良好的免疫保护作用，给该病的有效防控造成很大困难。
[0005]可见，传统的疫苗已经不能完全抵抗不断演变的IBDV病毒，迫切需要研究与流行毒株相匹配的新型疫苗。因此，研制一种生产效率较高并且免疫效果好的针对变异株的IBDV亚单位灭活疫苗对于目前临床防控IBD具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种针对IBDV变异株的传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白、重组病毒及传染性法氏囊病疫苗。
[0007]本专利技术提供了一种传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供了上述重组VP2蛋白在制备传染性法氏囊病病毒疫苗中的应用。
[0009]本专利技术提供了一种编码传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白的基因，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]本专利技术提供了一种重组载体，它包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
[0011]本专利技术提供了一种重组病毒，它包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，优选地，所
述重组病毒是杆状病毒。
[0012]本专利技术还提供了上述的基因、重组载体和/或重组病毒在制备传染性法氏囊病疫苗中的用途。
[0013]本专利技术还提供了一种传染性法氏囊病病毒疫苗，它含有传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白抗原，所述传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0014]进一步地，它还含有佐剂；优选地，所述佐剂为白油司本佐剂。
[0015]进一步地，它还含有灭活的重组病毒，所述重组病毒包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；优选地，所述重组病毒是重组杆状病毒。
[0016]本专利技术还提供了上述疫苗的制备方法，它包括如下步骤：
[0017](1)重组病毒接种HighFive细胞，于第4～5日收获上清，加二乙烯亚胺在30～37℃灭活病毒24～96小时，再加入硫代硫酸钠终止灭活，加表面活性剂混匀得到水相；所述重组病毒包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
[0018](2)佐剂灭菌，作为油相；
[0019](3)向油相中加入水相的同时用乳化仪乳化，加入完毕后继续乳化至形成乳化剂，即得；
[0020]优选地，步骤(1)所述重组病毒接种HighFive细胞MOI为0.1～1，于第5日收获上清；所述二乙烯亚胺浓度为0.2％w/w，所述硫代硫酸钠浓度为0.02％w/w；所述表面活性剂是吐温
‑
80或吐温
‑
85，所述灭活病毒是32℃灭活96小时；
[0021]和/或步骤(2)所述佐剂是白油司本佐剂，白油和司本的质量比为94:6；
[0022]和/或步骤(3)所述油相和水相的体积比为2:1；加入水相的同时用乳化仪乳化时间为1min，转速12000r/min；加入完毕后继续乳化的时间为5min；转速18000r/min。
[0023]本专利技术的有益效果：
[0024]本专利技术提供了一种重组VP2蛋白，与佐剂乳化后，制备的疫苗安全性高，对法氏囊经典株和变异毒株均具有很好的免疫效果，且所需免疫剂量小，能有效预防法氏囊经典株、变异株对鸡群的感染。
[0025]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0026]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0027]图1为IBDV遗传进化树。
[0028]图2为sf9细胞病变情况。
[0029]图3为琼脂糖扩散试验表达的VP2蛋白效价结果(A)实施例3；(B)对比例1。
[0030]图4为VP2蛋白SDS
‑
PAGE电泳结果。
[0031]图5为上清中VP2蛋白浓度测试结果。
具体实施方式
[0032]本专利技术所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
[0033]专利技术人前期由发病白羽肉鸡群的法氏囊病料组织接种SPF鸡胚分离获得一株分离株，动物攻毒实验发现，该病毒能引起鸡的法氏囊严重萎缩。完成测序获得VP2基因的序列信息，将编码VP2蛋白的氨基酸序列与基因库参考序列进行比对，构建遗传进化树，如图1所示，确定分离的病毒为变异株传染性法氏囊病毒，命名为CDSJ
‑
1株。
[0034]实施例1、本专利技术重组VP2蛋白序列的确定
[0035]根据CDSJ
‑
1株VP2基因测序翻译得到VP2蛋白序列，如下所示(SEQ ID NO.1)：
[0036]MTNLQDQTQQ IVPFIRSLLM PTTGPASIPD DTLEKHTLRS ETSTYNLTVG DTGSGLIVFF PGFPGSIVGA HYTLQSNGNY KFDQMLLTAQ NLPASYNYCR LVSRSLTVRS STLPGGVYAL NGTINAVTFQ GSLSELT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白，其特征在于，它的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述重组VP2蛋白在制备传染性法氏囊病病毒疫苗中的应用。3.一种编码传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白的基因，其特征在于，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种重组载体，其特征在于，它包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。5.一种重组病毒，其特征在于，它包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，优选地，所述重组病毒是杆状病毒。6.权利要求3所述的基因、权利要求4所述的重组载体和/或权利要求5所述的重组病毒在制备传染性法氏囊病疫苗中的用途。7.一种传染性法氏囊病病毒疫苗，其特征在于，它含有传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白抗原，所述传染性法氏囊病病毒重组VP2蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示。8.如权利要求7所述的疫苗，其特征在于，它还含有佐剂；优选地，所述佐剂为白油司本佐剂。9.如权利要求7所述的疫苗，其特征在于，它还含有灭活的重组病毒，所述重组病毒包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：张冬冬，岳丰雄，刘汉平，李三鹏，李刚，陈桂花，李光昊，沈皓月，项聪英，
申请(专利权)人：成都史纪生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：