一种猪圆环病毒、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种猪圆环病毒、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗及其制备方法，属于疫苗领域。该三联灭活疫苗包含猪圆环病毒2型抗原、猪肺炎支原体抗原、副猪嗜血杆菌4型抗原、副猪嗜血杆菌5型抗原，其中，猪圆环病毒2型抗原的浓度为30

【技术实现步骤摘要】
一种猪圆环病毒、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术属于疫苗领域，具体涉及一种猪圆环病毒、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒2型(简称PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭(PMWS)的主要病原。PMWS最早发于加拿大，并很快在欧美及亚洲一些国家(包括中国)发生和流行。除PMWS外，猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、增生性坏死性肺炎(PNP)、猪繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联，给养猪业造成严重的经济损失。感染PCV2的猪处于严重免疫抑制状态是PMWS发生的重要原因，其致病性主要表现为免疫系统损伤，淋巴细胞减少，淋巴结肿大等病变。
[0003]猪气喘病，又称猪支原体肺炎或猪地方性流行性肺炎，是由猪肺炎支原体(简称MHP)引起的一种接触性慢性呼吸道传染病，普遍存在于世界各地。患病猪主要表现为咳嗽和气喘，生长迟缓，饲料转化率低，体温基本正常。猪肺炎支原体常与其他病原混合感染，使其感染的严重性加强，是造成养猪业经济损失最重要的疾病之一。
[0004]副猪嗜血杆菌(简称HPS)是猪上呼吸道的一种共栖菌。在转群、断奶后失去母源抗体保护、其他疾病导致免疫力下降时，HPS感染表现出浆膜炎、脑膜炎等症状，主要在断奶后和保育期发病。
[0005]PMWS和猪支原体肺炎均属于免疫抑制病，会导致猪群免疫力下降，给HPS的致病创造条件，PCV2、MHP、HPS这三种抗原常混合感染，造成猪只的发病及死亡，严重影响我国养猪事业的发展。但是，目前市售疫苗中仅有相关单苗或者二联疫苗，存在免疫频率过大，导致猪只应激的问题。另外，由于前期抗生素滥用，导致耐药菌株的出现，使药物治疗趋于无效。因此，开发猪圆环病毒、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗具有重要意义。
[0006]申请号为CN201210221969.2的专利申请公开了一种疫苗组合物，包含灭活的猪圆环病毒2型抗原、灭活的副猪嗜血杆菌(灭活的副猪嗜血杆菌血清4型和血清5型)、灭活的猪肺炎支原体以及疫苗佐剂，所述的疫苗佐剂为氢氧化铝胶、矿物油、卡波姆(Carbomer)、Gel 01(法国SCIPPIC)、蜂胶、ISA206(法国SCIPPIC)、ISA760VG(法国SCIPPIC)的一种或任意几种的组合。该疫苗组合物打一针即可预防猪圆环病毒病、猪支原体肺炎和副猪嗜血杆菌病三种病的目的。但是，该疫苗组合物中的猪肺炎支原体抗原的免疫原性较低，免疫保护能力有待进一步提高。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种猪圆环病毒、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗及其制备方法。
[0008]本专利技术提供了一种三联灭活疫苗，它包含猪圆环病毒2型抗原、猪肺炎支原体抗
原、副猪嗜血杆菌4型抗原、副猪嗜血杆菌5型抗原，其中，猪圆环病毒2型抗原的浓度为30
‑
50ug/ml，猪肺炎支原体抗原的浓度为110
‑
130ug/ml，副猪嗜血杆菌4型抗原的浓度为(4
‑
6)
×
108cfu/ml，副猪嗜血杆菌5型抗原的浓度为(4
‑
6)
×
108cfu/ml。
[0009]进一步地，所述猪圆环病毒2型抗原的浓度为40ug/ml，猪肺炎支原体抗原的浓度为120ug/ml，副猪嗜血杆菌4型抗原的浓度为5
×
108cfu/ml，副猪嗜血杆菌5型抗原的浓度为5
×
108cfu/ml。
[0010]进一步地，所述猪圆环病毒2型抗原为PCV2 Cap蛋白。
[0011]进一步地，所述猪肺炎支原体抗原为灭活的猪肺炎支原体菌体。
[0012]进一步地，所述灭活的猪肺炎支原体菌体的制备方法包括以下步骤：将猪肺炎支原体菌株种子接种至培养基培养48～72小时，收获菌液，浓缩，离心，收集沉淀，洗涤，超声破碎，加入灭活剂灭活，即得；优选地，所述超声破碎的功率为20～50W，时间为10～30分钟；所述灭活剂为二乙烯亚胺，灭活剂的终浓度为3mmol/L。
[0013]进一步地，所述副猪嗜血杆菌4型抗原为灭活的副猪嗜血杆菌4型菌体。
[0014]进一步地，所述副猪嗜血杆菌5型抗原为灭活的副猪嗜血杆菌5型菌体。
[0015]进一步地，所述三联灭活疫苗还包含佐剂，佐剂与4种抗原总量的质量比为1：(8
‑
10)，优选为1：9。
[0016]进一步地，所述佐剂选自15A、ISA201、Gel02中的一种或两种以上的混合物，优选为Gel02。
[0017]本专利技术还提供了上述三联灭活疫苗的制备方法，它包括以下步骤：将猪圆环病毒2型抗原、猪肺炎支原体抗原、副猪嗜血杆菌4型抗原、副猪嗜血杆菌5型抗原和佐剂混合均匀，即得。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0019]1.与市售猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体二联灭活疫苗(重组杆状病毒CP08株+JM株)，猪圆环病毒2型、副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗(SH株+4型JS株+5型ZJ株)相比，本专利技术提供的猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌(4型、5型)三联灭活疫苗免疫后产生的抗体没有降低。但是，于此同时，本专利技术提供的三联灭活疫苗可做到一针四防，减少免疫次数及应激，切实解决养猪业的难题。
[0020]2.与参考申请号为CN201210221969.2的专利申请记载的制备方法获得的对照三联灭活疫苗相比，本专利技术提供的三联灭活疫苗中的猪肺炎支原体抗原的免疫原性明显提高，免疫保护能力明显提高。
[0021]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0022]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0023]图1：三联灭活疫苗制备流程示意图。
[0024]图2：表达Cap蛋白SDS
‑
PAGE结果。
[0025]图3：表达Cap蛋白电镜检测结果。
具体实施方式
[0026]以下实施例和实验例中所用的试剂和原料，未特别说明的均为市售品。
[0027]实施例1：制备猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌(4型、5型)三联四价灭活疫苗
[0028]制备流程示意图如图1所示。
[0029]1.抗原制备
[0030]1.1PCV2抗原制备
[0031]根据GeneBank猪圆环2型病毒Cap蛋白序列合成相应的密码子优化的基因序列(基因序列为(SEQ ID NO.1)：ATGACGTATCCAAGGAGGCGTTTCCGC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三联灭活疫苗，其特征在于：它包含猪圆环病毒2型抗原、猪肺炎支原体抗原、副猪嗜血杆菌4型抗原、副猪嗜血杆菌5型抗原，其中，猪圆环病毒2型抗原的浓度为30
‑
50ug/ml，猪肺炎支原体抗原的浓度为110
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130ug/ml，副猪嗜血杆菌4型抗原的浓度为(4
‑
6)
×
108cfu/ml，副猪嗜血杆菌5型抗原的浓度为(4
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6)
×
108cfu/ml。2.根据权利要求1所述的三联灭活疫苗，其特征在于：所述猪圆环病毒2型抗原的浓度为40ug/ml，猪肺炎支原体抗原的浓度为120ug/ml，副猪嗜血杆菌4型抗原的浓度为5
×
108cfu/ml，副猪嗜血杆菌5型抗原的浓度为5
×
108cfu/ml。3.根据权利要求1或2所述的三联灭活疫苗，其特征在于：所述猪圆环病毒2型抗原为PCV2 Cap蛋白。4.根据权利要求1或2所述的三联灭活疫苗，其特征在于：所述猪肺炎支原体抗原为灭活的猪肺炎支原体菌体。5.根据权利要求4所述的三联灭活疫苗，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：林艳，刘汉平，夏嘉鑫，岳丰雄，张冬冬，徐阳，项聪英，郑琴勤，陈莉群，
申请(专利权)人：成都史纪生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：