一种埃博拉病毒包膜糖蛋白的优势表位肽、其编码基因及应用制造技术

本发明专利技术属于微生物免疫技术领域，具体涉及一种埃博拉病毒包膜糖蛋白的优势表位肽、其编码基因及应用。所述表位肽由SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种埃博拉病毒包膜糖蛋白的优势表位肽、其编码基因及应用


[0001]本专利技术属于微生物免疫
，具体涉及一种埃博拉病毒包膜糖蛋白的优势表位肽、其编码基因及应用。

技术介绍

[0002]由埃博拉病毒导致的埃博拉病毒病最早出现在扎伊尔和苏丹邻近地区。埃博拉病毒属可进一步细分为5个物种，分别命名为：扎伊尔埃博拉病毒(Zaire ebolavirus，ZEBOV/EBOV)、苏丹埃博拉病毒(Sudan ebolavirus，SUDV)，塔伊森林埃博拉病毒(Forest ebolavirus，TAFV)，本迪布焦埃博拉病毒(Bundibugyo ebolavirus，BDBV)和雷斯顿埃博拉病毒(Reston ebolavirus，RESTV)。人与人之间的传播可通过接触被感染物品以及粘膜或皮肤破损处暴露于传染性体液以及组织中造成。已在多种体液中发现有埃博拉病毒的存在，包括唾液、血液、母乳、粪便和精液等。此外，还存在多种潜在的传播途径，包括直接接触、污染物、飞沫传播以及气溶胶等。埃博拉病毒属于丝状病毒科家族，为非分节段负链RNA病毒，基因组大小约为19kb。基因组有7个基因，包括编码核蛋白(NP)、病毒蛋白(VP)35、VP40、VP24、VP30、聚合酶(L基因)和糖蛋白(GP)。糖蛋白GP被广泛认为是该病毒表面的唯一蛋白，介导与细胞表面的附着和结合。因此，GP被视为免疫活性最强的病毒靶点。
[0003]抗病毒CD8+效应T细胞应答的激活，需要抗原呈递细胞(APC)通过主要组织相容性复合体(MHC)I类分子呈递病毒抗原。CD8+T细胞对病毒肽的识别在抵抗病毒感染中发挥重要作用。但是，只有与MHC I类分子高亲和力、紧密结合的多肽才能表达在APC细胞表面，提呈给CD8+T细胞识别，从而引发免疫反应。因此，免疫原性表位对阐明抗病毒免疫至关重要。同时，抗原的保守性也对病原体与宿主相互作用以及建立群体免疫至关重要。进化的保守表位的存在对于病毒生存至关重要，因此无论其毒株如何，表位保守性对这些病毒的长期免疫可能提供广泛的防护。
[0004]最近，基于表位的策略已用于替代疫苗设计和免疫治疗。基于表位疫苗的合理设计是非常有前景的，因为它通过减少引起不良反应的病毒成分来提高安全性，同时可通过多表位联合覆盖广泛的人群，从而达到最终提高疫苗效率的目的。因此，筛选鉴定EBOV GP的优势表位肽，对埃博拉病毒的表位疫苗设计非常重要。

技术实现思路

[0005]针对上述技术问题，本专利技术的目的之一是提供一种埃博拉病毒包膜糖蛋白的优势表位肽，所述表位肽由SEQ ID NO.1
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25所示序列组成。
[0006]本专利技术的目的之二是提供编码所述优势表位肽的基因。
[0007]本专利技术的目的之三是提供所述的优势表位肽在制备埃博拉病毒表位疫苗中的应用。
[0008]本专利技术的目的之四是提供所述的基因在制备埃博拉病毒表位疫苗中的应用。
[0009]本专利技术的目的之五是提供利用所述优势表位肽制备的埃博拉病毒表位疫苗，其活性成分来自于所述的优势表位肽。
[0010]本专利技术的目的之六是提供利用所述基因制备的埃博拉病毒表位疫苗，其活性成分来自于所述的基因。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0012]本专利技术通过ELISpot试验预测并验证了来源于EBOV GP(基因号：AY354458.1)的潜在表位。并对其在世界各地不同分离株中的保护性质进行了多种深入分析，以验证筛选出的优势分离株。我们进一步预测了这些表位与各自MHC I类分子合适位点的结合亲和力及其免疫原性，这将最终有助于理解EBOV GP的免疫生物学，并在未来完善针对该病毒的表位疫苗设计。
[0013]本专利技术的优势表位肽可视为能有效刺激机体细胞免疫应答的病毒亚单位，即病毒体功能所需的高度保守区。可由此来设计多肽疫苗，这个策略的目的是接种“由明确抗原组成的最小结构”来激发有效的特异性细胞免疫应答，具备传统疫苗不可比拟的优点，而且使用安全方便，在抗病毒过程中有着广泛的应用前景。
附图说明
[0014]图1为五种预测工具预测小鼠和人MHC I类亚型对EBOV GP的高亲和力优势表位数目。
[0015]图2为EBOV GP所有预测9肽的层次聚类分析，箭头所指方向表示亲和力由强到弱。
[0016]图3为不同MHC I类亚型与9肽的预测结合亲和力，图中，纵坐标为668条9肽，数字为9肽第一个氨基酸在GP序列中的位置；横坐标为小鼠和人MHC I类亚型，箭头所指方向表示亲和力由强到弱。
[0017]图4为EBOV GP的MHC I类限制性优势表位保守性分析。
[0018]图5为种间保守的优势表位与相应MHC I类分子对接模型。
[0019]图6为ELISpot试验验证有免疫原性的9肽优势表位筛选结果。
具体实施方式
[0020]下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0021]实施例1
[0022]埃博拉病毒包膜糖蛋白的优势表位肽的获得
[0023]Step1：氨基酸序列检索：
[0024]从NCBI GenBank数据库获得扎伊尔埃博拉病毒的糖蛋白(GP，登录号：AY354458.1)，作为各种生物信息学工具的输入，用于表位预测、保守性分析、分子对接和实验。
[0025]Step2：表位预测：
[0026]对于H2
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Db、H2
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Dd、H2
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Kb、H2
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Kd、H2
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Kk和H2
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Ld表位预测，推荐基于网络的工具，如IEDB方法(http://tools.iedb.org/mhci/)、来自免疫表位数据库的SMMPMBEC(http://
tools.immuneepitope.org/mhci/)，NetMHCpan 4.1(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCpan/)，SYFPEITHI(http://www.syfpeit hi.de/bin/MHCServer.dll/EpitopePrediction.htm)和Rankpep(http://imed.med.ucm.es/Tools/rankpep.html)用于预测。选择占总预测表位前2％的预测表位。最后，选择至少通过三种预测工具预测的表位进行后续深入分析。
[0027]人类主要白细胞抗原(HLA)
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I类亚型等位基因表位，如HLA
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A1(HLA
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A*2601、
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A*3001、
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A*3002)、HLA
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种埃博拉病毒包膜糖蛋白的优势表位肽，其特征在于，所述表位肽由SEQ ID NO.1
‑
25所示序列组成。2.编码权利要求1所述优势表位肽的基因。3.权利要求1所述的优势表位肽在制备埃博拉病毒表位疫苗中的应用。4.权利要求2所述的基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨琨，姜东伯，刘洋，孙报增，孙昊，孙元杰，杨舒雅，张溪洋，潘婧宇，胡尘辰，刘天玥，王静，韩晨颖，黄依南，丁家琦，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：