一种鼠诺如病毒重组抗原、单克隆抗体和病毒检测试纸条制造技术

本发明专利技术提供了一种鼠诺如病毒重组抗原、单克隆抗体和病毒检测试纸条，涉及病毒检测技术领域。本发明专利技术所述重组抗原具有较强的免疫原性和抗原性，单克隆抗体特异性好、快速检测试纸灵敏准确。本发明专利技术所述乳胶微球检测试纸可检测MNV 1/3/4型，并具有与荧光RT

【技术实现步骤摘要】
一种鼠诺如病毒重组抗原、单克隆抗体和病毒检测试纸条


[0001]本专利技术属于病毒检测
，具体涉及一种鼠诺如病毒重组抗原、单克隆抗体和病毒检测试纸条。

技术介绍

[0002]诺如病毒（Norovirus）原名诺瓦克病毒，属杯状病毒科诺如病毒属，为无包膜的单股正链RNA病毒。诺如病毒具有多个基因型，根据基因结构特征，诺如病毒又被划分为7个基因群（Genogroup，GI
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GVII），其中GI、GII和GIV可感染人，GI和GII是引起人类感染性腹泻的两个主要基因型，GIII、GV和GVI则分别主要感染牛、小鼠和狗。诺如病毒各基因群之间的核苷酸差异很大，每个基因群又有许多不同的变异株。
[0003]小鼠诺如病毒（murine norovirus，MNV）是2002年首次在RAG2/STAT1
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免疫缺陷小鼠分离到，主要攻击小鼠免疫系统，引起小鼠神经系统、消化系统等症状甚至死亡。MNV发现时间短，但感染率是细小病毒的10倍。MNV感染实验小鼠后，不仅造成相关系统的症状，其对免疫系统的影响，也会对动物实验结果的准确性和稳定性造成干扰，因此包括美国查尔斯河实验室（Charles River）、国际实验动物科学学会（ICLAS）等许多国家和组织将其列为实验小鼠的必检项目。
[0004]目前，对小鼠诺如病毒的检测，包括病毒的分离培养鉴定、间接免疫荧光实验（IFA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、逆转录PCR和实时荧光定量PCR（q
‑r/>PCR）等。IFA和ELISA是检测MNV抗体的主要方法，而某些免疫系统改变的基因编辑小鼠会出现免疫反应的缺失或抑制，导致抗体检测难以适用。分子生物学方法如实时荧光定量PCR则成为主要的监测技术，但其耗时较长，且需专业的技术人员和仪器设备，使其难以在非实验室环境下开展，非常不利于小鼠诺如病毒的控制。以上检测技术中抗体检测存在一定的缺陷，病毒培养和荧光PCR虽然准确灵敏，但操作复杂耗时长。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种鼠诺如病毒重组抗原、单克隆抗体和病毒检测试纸条，所述重组抗原具有较强的免疫原性和抗原性，单克隆抗体特异性好，病毒检测试纸条灵敏准确。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种鼠诺如病毒重组抗原，所述重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]本专利技术还提供了一种编码上述重组抗原的重组核酸，所述重组核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]本专利技术还提供了一种与上述重组抗原对应的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括6D3和10H6；所述6D3的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示，所述6D3的轻链可变区
的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示；所述10H6的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.12~SEQ ID NO.14所示；所述10H6的轻链可变区包括三个互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15~SEQ ID NO.17所示。
[0009]优选的，编码所述6D3的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，编码所述6D3的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示。
[0010]优选的，编码所述10H6的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.22所示；编码所述10H6的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.24所示。
[0011]本专利技术还提供了上述单克隆抗体在制备检测鼠诺如病毒的工具中的应用。
[0012]优选的，所述鼠诺如病毒包括诺如病毒GV群。
[0013]优选的，所述工具包括试纸条。
[0014]本专利技术还提供了一种快速检测鼠诺如病毒的试纸条，所述试纸条包括检测线和质控线；所述检测线的制备方法包括在硝酸纤维膜上喷涂上述单克隆抗体；所述质控线的制备方法包括在硝酸纤维膜上喷涂羊抗鼠IgG抗体。
[0015]本专利技术还提供了一种快速检测鼠诺如病毒的乳胶微球检测试纸，所述乳胶微球检测试纸包括自左到右，依次粘贴在背板上的：样品垫、乳胶微球垫、硝酸纤维膜和吸水纸；在所述硝酸纤维膜上喷涂上述单克隆抗体作为检测线，喷涂羊抗鼠IgG抗体作为质控线。
[0016]有益效果：本专利技术提供了一种鼠诺如病毒重组抗原、表达单克隆抗体的杂交瘤细胞和病毒检测试纸条，重组抗原具有较强的免疫原性和抗原性，单克隆抗体特异性好、快速检测试纸灵敏准确。本专利技术所述乳胶微球试纸，对小鼠诺如病毒不仅具有较高的灵敏度，且快速准确，节约成本，对小鼠诺如病毒感染的流行病学调查、日常监测和预警都有重要意义。
附图说明
[0017]图1为乳胶微球检测试纸组装示意图；图2为IPTG诱导并纯化后蛋白的SDS
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PAGE分析；图3为重组蛋白与阳性血清的反应活性；图4为单克隆抗体的特异性鉴定。
具体实施方式
[0018]本专利技术提供了一种鼠诺如病毒重组抗原，所述重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0019]本专利技术所述所述重组抗原优选来源于小鼠诺如病毒，本专利技术称所述重组抗原为MNV
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VP1，根据MNV基因序列（Genbank: EF014462），利用Bepipred Linear Epitope Prediction软件进行抗原表位预测，设计出1段VP1截短的序列，并进行基因重组，其具体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0020]本专利技术还提供了一种编码上述重组抗原的重组核酸，所述重组核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0021]本专利技术还提供了一种与上述重组抗原对应的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括6D3和10H6；所述6D3的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示，所述6D3的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示；所述10H6的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.12~SEQ ID NO.14所示；所述10H6的轻链可变区包括三个互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15~SEQ ID NO.17所示。
[0022]本专利技术所述单克隆抗体的重链可变区优选包括以下三个互补决定区：CDR1、CDR2和 CDR3；所述单克隆抗体的轻链可变区优选包括以下三个互补决定区：CDR1
’
、CDR2
’
和CDR3
’
。在本专利技术中，所述6D3的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6~SEQ ID NO.8所示；所述6D3的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠诺如病毒重组抗原，其特征在于，所述重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种编码权利要求1所述重组抗原的重组核酸，其特征在于，所述重组核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种与权利要求1所述重组抗原对应的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括6D3和10H6；所述6D3的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示，所述6D3的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示；所述10H6的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.12~SEQ ID NO.14所示；所述10H6的轻链可变区包括三个互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15~SEQ ID NO.17所示。4.根据权利要求3所述单克隆抗体，其特征在于，编码所述6D3的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，编码所述6D3的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示。5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢帅，张兴林，李月，陈曼丽，张东晖，宋文俊，
申请(专利权)人：北京溯本源和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：