一组同时检测B/C/E组腺病毒的单克隆抗体和试纸条制造技术

本发明专利技术提供一组同时检测B/C/E组腺病毒的单克隆抗体和试纸条，涉及腺病毒检测技术领域。本发明专利技术通过筛选获得了针对目前流行的呼吸道腺病毒HAdV

【技术实现步骤摘要】
一组同时检测B/C/E组腺病毒的单克隆抗体和试纸条
[0001]

[0002]本专利技术属于腺病毒检测
，具体涉及一组同时检测B/C/E组腺病毒的单克隆抗体和试纸条。

技术介绍

[0003]腺病毒（Adenovirus）是一种无包膜的二十面体双股DNA病毒，常侵犯呼吸系统、消化系统、泌尿系统、眼结膜等多器官。腺病毒在人群中常年流行，可发生于任何年龄组，全球多个国家和地区都曾发生过腺病毒感染的暴发，目前尚无特效的治疗方法。腺病毒作为一种机会性病原，大约50%的感染无症状，但仍具有传染性。
[0004]目前已发现的可感染人类的腺病毒约有69种血清型，可分为A
‑
G的7个亚群。不同血清型腺病毒造成感染的组织嗜性有差异，其中B组、C组和E组常引起呼吸道感染，E组还可感染眼结膜，A组和F组主要感染胃肠道。腺病毒感染以呼吸道症状最为常见，其中B组的3/7型、C组的1/2/5/6型多引起儿童的急性呼吸道感染，E组的4型多与军事训练营地的急性呼吸道疾病疫情有关。腺病毒的抵抗力、感染性强，常引起聚集人群如家庭、幼儿园、小学等的暴发性流行，因此快速准确的诊断和处置，对控制和预防腺病毒感染及传播十分必要。
[0005]病毒培养目前作为实验室诊断的金标准，但受细胞培养周期的限制，难以在临床中应用。荧光定量PCR与细胞培养法相比，灵敏度较高，但耗费昂贵，需专业人员操作，且大量样本操作时易出现污染导致假阳性，因此现场应用受限。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一组产1H3和2A7单克隆抗体的杂交瘤细胞组、单克隆抗体及制备方法和应用，操作简便、耗时短，能快速地检测出呼吸道样本中的腺病毒感染，检测准确率高，非常适合呼吸道腺病毒感染的快速辅助诊断。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一组同时检测B/C/E组腺病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括1H3和2A7，所述1H3的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.3所示；所述1H3的轻链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4~SEQ ID NO.6所示；所述2A7的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.11~SEQ ID NO.13所示；所述2A7的轻链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14~SEQ ID NO.16所示。
[0008]优选的，所述1H3的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述1H3的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0009]优选的，编码所述1H3的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，编码所述
1H3的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
[0010]优选的，所述2A7的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示，所述2A7的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示。
[0011]优选的，编码所述2A7的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，编码所述2A7的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示。
[0012]本专利技术还提供了上述单克隆抗体在制备同时检测B/C/E组腺病毒的工具中的应用。
[0013]优选的，所述工具包括胶体金检测试纸条。
[0014]本专利技术还提供了一种同时检测B/C/E组腺病毒的胶体金检测试纸条，所述胶体金检测试纸条以上述单克隆抗体中的1H3为捕获抗体，以上述单克隆抗体中的2A7为标记抗体。
[0015]优选的，所述胶体金检测试纸条包括依次连接在背板上的纤维素膜、金标垫、样品垫和吸水垫，所述纤维素膜上设检测线和质控线；所述检测线包被单克隆抗体1H3，质控线包括羊抗鼠IgG；所述金标垫包被单克隆抗体2A7。
[0016]有益效果：本专利技术通过筛选获得了针对目前流行的呼吸道腺病毒HAdV
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B/C/E组特异的单克隆抗体，并利用其制备了一种检测B/C/E组腺病毒的胶体金检测试纸条，该试纸条对腺病毒B组（3/7）、C组（1/2/5/6）、E组（4）具有很好的检测效果，其中对C组ADV1/2/5/6型的最低检测限可达1.0
×
103VP/ml；对ADV3/4/7的检测限可达1.0
×
104VP/ml；并验证具有良好的特异性，与常见的呼吸道A/B型流感病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒无交叉反应。本专利技术提供了一对单克隆抗体细胞株及一种同时检测B/C/E组腺病毒的快速检测方法，该检测方法对呼吸道腺病毒的检测效果好，操作简便，可以作为腺病毒感染的临床辅助诊断。
附图说明
[0017]图1为阳性克隆筛选结果图；图2为单抗纯度的SDS
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PAGE鉴定图；图3为单抗的特异性鉴定结果图；图4为胶体金检测试纸条组装示意图；图5为试纸条特异性分析结果图；图6为试纸条灵敏度分析结果图。
具体实施方式
[0018]本专利技术提供了一组同时检测B/C/E组腺病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括1H3和2A7，所述1H3的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.3所示；所述1H3的轻链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4~SEQ ID NO.6所示；所述2A7的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.11~SEQ ID NO.13所示；所述2A7的轻链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14~SEQ ID NO.16所示。
[0019]本专利技术所述1H3的重链可变区的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.7所示，编码所述重链可变区的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.9所示；所述1H3的轻链可变区的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.8所示，编码所述1H3的轻链可变区的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.10所示。
[0020]本专利技术所述2A7的重链可变区的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.17所示，编码所述2A7的重链可变区的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.19所示；所述2A7的轻链可变区的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.18所示，编码所述2A7的轻链可变区的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.20所示。
[0021]本专利技术对所述单克隆抗体的制备方法并没有特殊限定，优选利用杂交瘤细胞和腹水制备的方法，其中杂交瘤细胞组的制备方法，包括以下步骤：（1）利用C组腺病毒首次免疫若干雌鼠，利用B组腺病毒对所述雌鼠进行二次加强免疫，利用E组腺病毒进行三次加强免疫，筛选血清中效价较高的小鼠进行C组腺病毒腹腔冲击，3天后，提取脾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组同时检测B/C/E组腺病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括1H3和2A7，所述1H3的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.3所示；所述1H3的轻链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4~SEQ ID NO.6所示；所述2A7的重链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.11~SEQ ID NO.13所示；所述2A7的轻链可变区包括三个互补决定区，所述互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.14~SEQ ID NO.16所示。2.根据权利要求1所述单克隆抗体，其特征在于，所述1H3的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述1H3的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。3.根据权利要求1或2所述单克隆抗体，其特征在于，编码所述1H3的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，编码所述1H3的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：卢帅，张兴林，李月，陈曼丽，张东晖，宋文俊，
申请(专利权)人：北京溯本源和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：