抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体及应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学或生物制药技术领域，具体涉及一种抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体及应用。首先，本发明专利技术提供了一种抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，所述单域抗体能够与天然抗原很好的反应，且能够显著抑制非洲猪瘟病毒P72蛋白的表达，进而实现对非洲猪瘟病毒的复制的抑制，具有显著的抗非洲猪瘟病毒的功效；其次，本发明专利技术提供了一种表达所述抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体的重组载体，所述重组载体经诱导纯化后能够获得抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体。够获得抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体。够获得抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体。

【技术实现步骤摘要】
抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体及应用


[0001]本专利技术属于生物医学或生物制药
，具体涉及一种抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体及应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African Swine Fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种以猪发热和猪全身脏器出血为特征的急性烈性传染病，对于家猪的病死率高达100％。该病首先于1921在肯尼亚爆发，随后在整个非洲的家猪和野猪中广泛流行。当前没有商品化的有效疫苗，非洲猪瘟疫情一旦发生，只能通过扑杀手段进行控制，但是这种方式不仅导致经济损失，无法满足我国规模化养猪的需要。因此，疫苗作为预防和控制病毒传染病最有效、最经济的手段，对于我国规模养猪模式下的非洲猪瘟的防治至关重要。但非洲猪瘟病毒(ASFV)结构复杂、基因组庞大，大部分功能未知，感染与致病机制不清，疫苗创制的理论认知有限，其流行已逾百年，但仍未有商品化的疫苗问世。
[0003]抗体是机体免疫系统中重要的免疫分子，抗体的研发对非洲猪瘟的治疗起着至关重要的推动作用。但ASFV的基因组复杂，目前我们对其各功能蛋白的作用机制知之甚少，故传统抗体的研发也显得尤为困难。其中，中国专利(公布号CN110078819A)一种抗非洲猪瘟的抗体及其制备方法，通过用非洲猪瘟病毒免疫健康雌性禽类动物，当被免疫的所述禽类动物卵黄内非洲猪瘟抗体含量超过40ng/mL时收集卵黄，提取所述卵黄中的水溶性组分，纯化后得到。所述的抗体为禽源非洲猪瘟抗体，存在异源性反应，且没有克服常规抗体分子量较大的问题。
[0004]其中，单域抗体(single domain antibody，sdAb)仅有一个重链可变区结构域(VHH)，该结构域最初发现于骆驼科动物和鲨鱼的血清中分离出的一种抗体HCAb，通过基因手段，扩增出其中的VHH片段。单独克隆并表达出来的VHH区和完整的抗体一样，具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及同等的抗原结合活性。但是与完整抗体相比，单域抗体具有以下优点：
①
单域抗体的分子质量更低，这使其更容易渗透到组织中；
②
由于单域抗体更容易通过肾脏清除，因此其药代动力学半衰期也更短；
③
由于单域抗体没有可结晶区，因此无法通过补体系统引发细胞毒性；
④
单域抗体在极端温度和pH环境中具有良好的稳定性，其水溶性和构象稳定性是常规抗体无法比拟的，且这种单体结构域能高特异性、高亲和力地与抗原结合，从而中和或封闭相对隐蔽的抗原表位。综上，单域抗体是目前可以得到的具有完整功能、稳定、可结合抗原的最小单元，由于相对分子质量小、稳定性强、可溶性好、抗原结合性能好、易于表达及免疫原性低等特点，其具有广阔的应用前景，尤其在疾病的治疗和诊断中具有很大的价值。
[0005]p72蛋白是ASFV中的关键结构蛋白，是一种衣壳蛋白，能保护病毒核酸免受环境中核酸酶或其他理化因素破坏，同时参与病毒的感染过程且具有良好的免疫原性，该蛋白产生于病毒感染晚期，p72作为ASFV的重要抗原蛋白，是病毒二十面体的主要成分，对于病毒衣壳的形成至关重要，参与病毒结合细胞。因此，开发一种新型抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗
体，使其具有较好的特异性、阻断活性，更佳的临床药效，并且生产简便，能够降低生产成本，减轻患者用药负担，已经成为亟待解决的问题。

技术实现思路

[0006]针对上述问题，本专利技术提供了一种新型抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体及其应用。具体地，本专利技术的目的在于提供一种对非洲猪瘟具有抑制效果的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体。具体方案包括以下内容：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，所述抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1
‑
7任一所示。
[0008]优选地，所述抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0009]第二方面，本专利技术提供了一种抗体，所述抗体包括一条或多条上述第一方面所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体。
[0010]优选地，所述抗体包括单体、二价抗体、多价抗体。
[0011]第三方面，本专利技术提供了一种编码上述第一方面所述抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体的基因片段。
[0012]优选地，所述基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.8
‑
14任一所示。
[0013]优选地，所述基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。
[0014]第四方面，本专利技术提供了一种表达载体，所述表达载体含有上述第三方面所述的基因片段。
[0015]第五方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有上述第四方面的表达载体，或其基因组中整合有上述第三方面所述的基因片段。
[0016]第六方面，本专利技术提供了一种免疫偶联物，所述免疫偶联物包括：
[0017](i)上述第一方面所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，或上述第二方面所述的抗体；
[0018](ii)和选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或VLP、或其组合。
[0019]第七方面，本专利技术提供了一种上述第一方面所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，或上述第二方面所述的抗体，或上述第六方面所述的免疫偶联物在制备抑制非洲猪瘟病毒感染药物中的应用。
[0020]第八方面，本专利技术提供了一种上述第一方面所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，或上述第二方面所述的抗体，或上述第六方面所述的免疫偶联物在制备非洲猪瘟P72蛋白检测试剂或试剂盒中的应用。
[0021]第九方面，本专利技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：
[0022](i)上述第一方面所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，或上述第二方面所述的抗体，或上述第六方面所述的免疫偶联物；以及
[0023](ii)药学上可接受的载体。
[0024]第十方面，本专利技术提供了一种上述第九方面所述的药物组合物在制备抑制非洲猪瘟病毒感染药物中的应用。
[0025]第十一方面，本专利技术提供了一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：
[0026](i)上述第一方面所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，或上述第二方面所述的抗体；以及
[0027](ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。
[0028]第十二方面，本专利技术提供了一种非洲猪瘟P72蛋白检测试剂，所述的检测试剂包含：
[0029](i)上述第一方面所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，或上述第二方面所述的抗体，或上述第六方面所述的免疫偶联物；以及
[0030](ii)检测学上可接受的载体。
[0031]第十三方面，本专利技术提供了一种检测非洲猪瘟P72蛋白的试剂盒，所述试剂盒含有上述第六方面所述的免疫偶联物或上述第十二方面所述的检测试剂，以及说明书。
[0032]第十四方面，本专利技术提供了一种产生上述第一方面所述抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，其特征在于，所述抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1
‑
7任一所示。2.一种抗体，其特征在于，所述抗体包括一条或多条如权利要求1所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体。3.一种编码权利要求1所述抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体的基因片段，所述基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.8
‑
14任一所示。4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求3所述的基因片段。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求4所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求3所述的基因片段。6.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：(i)如权利要求1所述的抗非洲猪瘟P72蛋白单域抗体，或如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志杰，杨吉飞，牛庆丽，敬梦瑶，赵亚茹，关贵全，殷宏，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：