病毒样颗粒的纯化制造技术

本发明专利技术涉及病毒样颗粒的纯化，具体地涉及纯化病毒样颗粒(VLP)的方法，其基本上没有处理污染物(process contaminant)和传染剂(infectious agent)。所述方法包括，例如，收获期间的低pH处理和/或VLP捕获期间通过溶剂和/或去污剂失活。或去污剂失活。或去污剂失活。

【技术实现步骤摘要】
病毒样颗粒的纯化
[0001]本专利技术申请是基于申请日为2013年06月24日、申请号为 201380043618.X(国际申请号为PCT/US2013/047249)、名称为“病毒样颗粒的纯化”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关专利申请相互参考
[0003]本申请要求获得美国临时专利申请No.61/663,218和美国临时专利申请 No.61/794,086的优先权，No.61/663,218于2012年6月22日提出申请，No. 61/794，086于2013年3月15日提出申请，本文引用其每一个的全部内容作为参考。
专利

[0004]本专利技术属于疫苗领域，包括诺如病毒疫苗。本专利技术的各方面涉及制备和纯化疫苗组合物的方法。
[0005]专利技术背景
[0006]病毒样颗粒(VLP)的生产一般涉及VLP在宿主细胞表达系统内的表达和组装。为了从最终的生产培养物中除去传染剂(infectious agent)，普遍使用病毒过滤，虽然也可以使用其他方法，例如UV失活或化学失活(单独使用或者与基于过滤的方法联合使用)。然而，对于更大的生物组分如VLP，病毒过滤无效，因为VLP的大小经常与传染剂(例如，病毒)太接近，以致不能够仅通过过滤将之与这些传染剂分离。
[0007]在具体的实施例中，在Sf9昆虫细胞中进行VLP的杆状病毒表达之后，所得的大量生产培养物含有高水平的处理污染物，包括宿主细胞蛋白、核酸和活的传染剂，包括杆状病毒。尽管通过低速离心和过滤收获VLP生产培养物可以产生澄清的适合于下游纯化的样品，但是这些方法不适合除去宿主细胞蛋白和活病毒，包括杆状病毒。因此，在制备VLP时，在收获期间需要使用其它的方法使传染剂失活和/或清除处理污染物，以方便下游的处理。
专利技术概要
[0008]本文提供了可用于从VLP细胞裂解物和生产培养物中清除处理污染物的方法，以及由此生产的VLP组合物。在一个实施方案中，本专利技术的方法包括产生或获得含有所述VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液，和将裂解物、上清液或滤出液的pH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH 被调节的溶液。该方法进一步包括从pH被调节的溶液中除去非VLP微粒/ 聚集物，从而产生包含VLP的纯化溶液。
[0009]在一些实施方案中，本专利技术的pH处理方法可用于分离结构上多样的 (diverse)VLP群体，其中VLP至少包括VLP的第一亚群和第二亚群。分离非VLP微粒/聚集物可以包括将VLP第二亚群与pH被调节的溶液分离，从而产生纯化溶液，其中纯化溶液基本上保留VLP的第一亚群。该方法可以进一步包括，在将VLP第二亚群与纯化溶液分离之后，将VLP第一亚群与纯化溶液分离。在一些实施方案中，VLP是诺如病毒VLP，其中第一亚群包括具有全长VP1亚单位的诺如病毒VLP，并且其中第二亚群包括具有截短的VP1亚单位的诺如病毒VLP。在这种处理之后，VLP第一亚群与残余污染蛋白之间的比值被增加至少大约50％。在一些实施方案中，在这种处理之后，VLP第一亚群与残余污染蛋白之间的比值被增加至少大约80％。
[0010]在一些实施方案中，分离包括一种或多种如下的处理：离心、沉淀、絮凝、沉降和过滤。在一些实施方案中，除去VLP包括使用一种或多种色谱处理将VLP第一亚群与纯化溶液分离。
[0011]在本专利技术的一些方面中，用于纯化VLP的方法包括产生或获得含有VLP 的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液；和使用多步色谱处理纯化VLP，从而产生纯化溶液。多步色谱处理的至少一个色谱处理包括使裂解物、上清液或滤出液与色谱材料接触，其中VLP与所述色谱材料结合；用溶剂和/或去污剂处理色谱材料；和在所述处理后，将VLP从色谱材料洗脱。每一个色谱处理均独立地从下组中选出：羟基磷灰石色谱、疏水相互作用色谱、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、混合模式色谱、基于膜的色谱和亲和色谱。在一些实施方案中，多步色谱处理的第一色谱处理是离子交换色谱，其中离子交换色谱从阴离子交换色谱和阳离子交换色谱中选出。
[0012]在一些实施方案中，多步色谱处理的第一色谱处理是阳离子交换色谱，并且所述处理步骤在阳离子交换色谱处理的阳离子交换柱上执行。在一些实施方案中，多步色谱处理的第一色谱处理是羟基磷灰石色谱，并且所述处理步骤在羟基磷灰石色谱处理的羟基磷灰石柱上执行。在一些实施方案中，多步色谱处理的第一色谱处理是亲和色谱，并且所述处理步骤在亲和色谱处理的亲和柱上执行。在一些实施方案中，多步色谱处理的第一色谱处理是混合模式色谱，并且所述处理步骤在混合模式色谱处理的混合模式柱上执行。在一些实施方案中，多步色谱处理的第一色谱处理是疏水相互作用色谱，并且所述处理步骤在疏水相互作用色谱处理的疏水相互作用柱上执行。在一些实施方案中，该方法进一步包括一种或多种额外的色谱处理。
[0013]溶剂和/或去污剂包括如下的一种或多种：磷酸三丁酯(TnBP)，非离子去污剂(包括Triton X
‑
100和聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯(polyoxyethylenesorbitan monooleate))，两性离子去污剂(包括CHAPS和Zwittergent 3
‑
12))和离子去污剂(包括胆酸钠和二甲基二(十八烷基)溴化铵 (Dimethyldioctadecylammonium bromide))。
[0014]在一些实施方案中，VLP是如下的一种或多种：诺如病毒基因群I VLP、诺如病毒基因群II VLP、诺如病毒基因群IV VLP、嵌合诺如病毒VLP，工程化的诺如病毒VLP变体、和沙波病毒(sapovirus)VLP。在一些实施方案中， VLP是一种或多种沙波病毒VLP。在一些实施方案中，VLP与残余污染蛋白的比值被增加至少2倍。
[0015]在一些实施方案中，与裂解物、上清液或滤出液相比，VLP与残余污染蛋白的比值被增加至少10倍。在一些实施方案中，至少大约50％的残余污染蛋白被从裂解物、上清液或滤出液中除去。在一些实施方案中，在所述纯化期间，不超过大约50％的VLP被损失。
[0016]在一些实施方案中，裂解物、上清液或滤出液使用重组方法产生，并且 VLP在细菌细胞、昆虫细胞、酵母细胞或哺乳动物细胞中产生。VLP还可以在植物细胞中产生。
[0017]在本专利技术的一些方面中，纯化VLP的方法包括产生或获得含有VLP的细胞裂解物或培养物上清液/滤出液，所述VLP至少包含VLP的第一亚群和第二亚群。该方法进一步包括将裂解物、上清液或滤出液的pH调节到低于大约5 的pH，并使用过滤处理从pH被调节的溶液中除去VLP的第二亚群，从而产生过滤溶液。过滤溶液基本上保留VLP的第一亚群。该方法额外包括使用多步色谱处理将VLP的第一亚群与过滤溶液分离，其并入至少一个柱上溶剂和/ 或去污剂处理步骤。在一些实施方案中，VLP第一群与残余污染蛋白的比值被增加至少大约
2倍。在一些实施方案中，过滤处理包括深层过滤处理。
[0018]在一些实施方案中，VLP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纯化病毒样颗粒(VLP)的方法，包括：产生或获得含有所述VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液(filtrate)；将所述裂解物、上清液或滤出液的pH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH被调节的溶液；和从pH被调节的溶液除去非VLP微粒(particulate)/聚集物(aggregate)，从而产生包含所述VLP的纯化溶液。2.一种用于纯化病毒样颗粒(VLP)的方法，包括：产生或获得含有VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液；和使用多步色谱处理纯化VLP，其中该多步色谱处理的至少一个色谱处理包括：使裂解物、上清液或滤出液与色谱材料接触，其中VLP与所述色谱材料结合；用溶剂和/或去污剂处理色谱材料；和在所述处理后，将VLP从色谱材料洗脱。3.一种纯化病毒样颗粒(VLP)的方法，包括：产生或获得含有VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液，所述VLP至少包含VLP的第一亚群和第二亚群；将裂解物、上清液或滤出液的pH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH被调节的溶液；使用过滤处理从pH被调节的溶液中除去VLP的第二亚群，从而产生过滤的纯化溶液，其中该过滤的纯化溶液基本上保留VLP的第一亚群；和使用多步色谱处理将VLP的第一亚群从过滤的纯化溶液中分离。4.一种疫苗，其包含通过根据权利要求3所述的方法制备的VLP的第一亚群。5.一种用于纯化病毒样颗粒(VLP)的方法，包括：产生或获得含有所述VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液；将裂解物、上清液或滤出液的pH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH被调节的溶液；和从pH被调节的溶液中除去非VLP微粒/聚集物，所述除去包括通过深层过滤处理使pH被调节的溶液澄清，从而产生纯化的深...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：武田疫苗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：