用于产生制备疫苗的病毒的方法技术

本公开涉及产生例如用于制备疫苗的肠病毒A的方法，其包括在固定床生物反应器中培养细胞。本文还提供了一种通过本文所公开的生产方法产生的肠病毒A以及与其相关的组合物、免疫原性组合物和疫苗。疫原性组合物和疫苗。疫原性组合物和疫苗。

【技术实现步骤摘要】
用于产生制备疫苗的病毒的方法
[0001]本申请是申请日为2016年2月12日、申请号为201680015584.7、专利技术名称为“用于产生制备疫苗的病毒的方法”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2015年2月13日提交的美国临时申请号62/116,361的权益，所述临时申请以引用方式整体并入本文。
[0004]序列表以ASCII文本文件提交
[0005]关于ASCII文本文件的以下提交文件的内容以引用方式整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：606772001140SEQLIST.txt，记录的日期：2016年2月12日，大小：28KB。


[0006]本公开涉及用于产生制备疫苗的病毒(例如肠病毒A病毒)的方法。

技术介绍

[0007]手足口病(HFMD)由人类肠病毒A(HEV
‑
A)组的若干成员所引起。它通常是影响大部分儿童的自限制性感染并且其特征在于手、足和口腔上的溃疡和囊泡。然而，更多严重形式的疾病可伴随神经病状，诸如脑膜炎、脑炎、脊髓灰质炎样瘫痪以及脑干脑炎而出现，从而导致肺水肿和死亡(Huang,CC等人,(1999)N Engl J Med 341:936
–
942；Chang,LY等人,(1998)Lancet 352:367
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368；以及Ooi,MH等人,(2009)BMC Infect Dis 9:3)。自20世纪90年代中期，由人类肠病毒71(EV71)引起的HFMD感染已导致大量发病率和死亡率，尤其是在亚太地区(Solomon,T等人,(2010)Lancet Infect Dis 10(11):778
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90；以及McMinn,PC(2002)FEMS Microbiol Rev 26:91
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107)。中国、越南和新加坡在2012年一月至五月报道的活动性与2011年相同时间段相比有所增加。手足口病爆发破坏教育和经济活动，这是由于学校和育儿中心为努力控制疾病传播而关闭。
[0008]人类肠病毒A属于无包膜正义RNA病毒的小核糖核酸病毒科，其也包括脊髓灰质炎病毒和鼻病毒。引起HFMD的HEV
‑
A组的成员包括肠病毒71(EV71)和柯萨奇病毒(Coxsackievirus)，包括血清型A1、A4、A6、A10和A16(Pallansch和Roos,(2007)Knipe DM,Howley PM,Griffin DE,编者.Fields Virology.Philadelphia,PA Lippincott Williams&Wilkins.第839
–
894页；以及Kobayashi M等人,Jpn J Infect Dis 2013；66:260
‑
1)。由于EV71感染导致的HFMD爆发具有引起严重神经疾病的最大倾向。食蟹猴的实验性感染显示在几十年来分离的菌株全部为嗜神经组织的，并且显示比脊髓灰质炎病毒更广泛的组织嗜性(Nagata,N等人,(2002)J Med Virol 67:207
–
216)。
[0009]EV71具有四种衣壳蛋白(VP1
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VP4)和七种非结构蛋白。除了预防病毒RNA之外，衣壳蛋白识别宿主细胞表面上的受体并且促成病毒的抗原特征(Pallansch和Roos,(2007)Knipe DM,Howley PM,Griffin DE,编者.Fields Virology.Philadelphia,PA Lippincott Williams&Wilkins.第839
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894页)。EV71的已知人类细胞表面受体是清道夫受体B2
(SCARB2)和P
‑
选择素糖蛋白配体1(PSGL
‑
1)(Yamayoshi,S等人,(2009)Nat Med 15:798
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801；以及Nishimura,Y等人,(2009)Nat Med 15:794
–
797)。
[0010]尽管由血清中和作用分型肠病毒的经典方法将EV71定义为单一血清型(Oberste,MS等人(1999)J Clin Microbiol 37:1288
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1293)，但是目前分子分型方法指示若干种基因群至少自20世纪90年代后就已在亚太地区循环(Lee,MS等人,(2012)PLoS Negl Trop Dis 6:e1737)。EV71分离株先前基于单独的VP1核苷酸序列分类成基因群A、B和C以及亚基因群(Brown,BA等人,(1999)J Virol 73:9969
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9975)；VP1基因的核苷酸序列一致性在基因群内>92％，而基因群之间的核苷酸序列一致性为78％
‑
83％(Solomon,T等人,(2010)Lancet Infect Dis 10(11):778
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90)。然而，全基因组测序导致对B4下的亚基因群B5的重新分类和基因群D的添加；作者表明3D聚合酶序列连同VP1更好地表示全基因组(Chan,YF等人,(2009)Infect Genet Evol 10(3):404
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12)。也发生基因群之间以及与其他人类肠病毒A血清型的重组(Yoke
‑
Fun和AbuBakar(2006)BMC Microbiol 6:74)。
[0011]目前，没有针对EV71的特定抗病毒疗法或疫苗可用。静脉内免疫球蛋白已用于严重HFMD病例中，其中一些治疗益处由结果来显示但还未得到临床试验证明(Ooi,MH等人,(2009)BMC Infect Dis 9:3；以及Wang,SM等人,(1999)Clin Infect Dis 29:184
–
190)。在EV71爆发期间的预防和控制措施局限于监视、关闭教育和育儿设施以及隔离患者。
[0012]对于潜在疫苗的生产，病毒疫苗通常通过贴壁依赖型细胞系(例如VERO细胞)产生。在工业规模下，这些细胞以静态模式在生物反应器中的悬浮液中的多板系统(例如Cell Factories、Cell Cube等)上、滚瓶上或微载体(多孔或非多孔)上培养。多板系统为大体积的并且需要大量的处理操作，而微载体培养需要许多操作(载体的消毒和水合等)和从预培养到最终过程的具有复杂操作(即珠至珠转移)的的许多步骤。
[0013]像许多其他肠道病毒一样，肠病毒A(例如EV71病毒)已适于生长在细胞系上(例如Vero细胞)，这些细胞系在完全细胞裂解的情况下产生CPE，从而将病毒释放到细胞培养流体中。肠病毒A(例如EV71病毒)病毒培养物由于每个细胞的较低病毒产生量子而比其他病毒有更大挑战性，从而在每次培养运行中产生低产率。由于细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于产生肠病毒A病毒的方法，其包括：(a)在包括巨载体的固定床中培养粘附细胞，其中所述细胞在第一细胞培养基中培养；(b)在所述肠病毒A病毒感染所述细胞的条件下用所述肠病毒A病毒接种所述细胞；(c)在所述固定床中在第二细胞培养基中在所述感染细胞产生所述肠病毒A病毒的条件下培养所述感染细胞；以及(d)收获由所述细胞产生的所述肠病毒A病毒。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞为Vero细胞。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述肠病毒A病毒选自由以下各项组成的组：EV71、CA6和CA16。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中约4,000个细胞/cm2‑
约16,000个细胞/cm2在步骤(a)中培养。5.根据权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：武田疫苗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：