用于疫苗中的登革热病毒嵌合式构建物的组合物及方法技术

本文的实施方案报告了登革热病毒构建物和活减毒登革热病毒的组合物、用途及制造。一些实施方案涉及这样的组合物，其包括但不限于四价登革热病毒组合物。在某些实施方案中，组合物可包含登革热病毒的一种或多种血清型的构建物，诸如登革热‑1(DEN‑1)病毒、登革热‑2(DEN‑2)病毒、登革热‑3(DEN‑3)病毒或登革热‑4(DEN‑4)病毒的构建物。在其它实施方案中，本文所公开的构建物可组合于组合物中以产生对抗多于一种或多种登革热病毒构建物的疫苗，该构建物可以或可以不接续地在哺乳动物细胞内传代。

【技术实现步骤摘要】
用于疫苗中的登革热病毒嵌合式构建物的组合物及方法本申请是申请日为2014年3月12日的PCT国际专利申请PCT/US2014/024603进入中国国家阶段的中国专利申请号201480028001.5、专利技术名称为“用于疫苗中的登革热病毒嵌合式构建物的组合物及方法”的分案申请。优先权本PCT申请要求于2013年3月15日提交的第61/800,204号美国临时申请的优先权。该申请通过援引以其整体并入本文以用于全部目的。联邦资助研发本文公开的一些实施方案以资助号R43AI08429-01获得美国国家卫生研究院的部分支持。美国政府对实施本专利技术拥有某些权利。
本文的实施方案报告了登革热病毒构建物的组合物、方法、用途和制造程序及其疫苗组合物。一些实施方案涉及这样的组合物，其包括但不限于嵌合式黄病毒构建物，该构建物单独地或组合其它构建物可用于疫苗组合物。在某些实施方案中，组合物可包含多于一种登革热病毒血清型的构建物，诸如登革热-1(DEN-1)病毒、登革热-2(DEN-2)病毒、登革热-3(DEN-3)病毒和/或登革热-4(DEN-4)病毒的构建物。在其它实施方案中，制造策略可改善重组活减毒嵌合式登革热疫苗(DENVax)病毒的安全性和遗传稳定性。某些实施方案包括至少一种活减毒登革热病毒与被确定在疫苗组合物中是安全且有效的登革热病毒嵌合式构建物的组合，其中该构建物已经在细胞培养中经历额外的传代。
技术介绍
感染登革热病毒可能导致不同严重程度的疼痛发烧。迄今为止，已经鉴定四种登革热病毒血清型：登革热-1(DEN-1)、登革热-2(DEN-2)、登革热-3(DEN-3)和登革热-4(DEN-4)。登革热由登革热病毒感染而引起。未来可能找到其它血清型(例如DEN-5)。登革热病毒血清型1-4也可能引发出血性登革热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)。感染的最严重后果(DHF和DSS)可能威胁生命。登革热病毒每年引发5千万至1亿例病弱型登革热病毒、500,000例DHF/DSS，以及多于20,000例死亡。迄今为止，没有有效的疫苗来抵御登革热，且没有药物来治疗该病。蚊虫防治努力未能有效地预防登革热在病区的爆发，或防止该病的进一步地理扩散。估计有35亿人受登革热病毒感染的威胁。此外，登革热病毒乃是病区(诸如亚洲、中南美洲及加勒比海地区)的旅行者发烧的主要病因。全部四种登革热病毒血清型在全球热带地区均为地方性的，且构成全球热带地区对人类有最大威胁的蚊媒病毒。登革热病毒主要由埃及伊蚊(Aedesaegypti)蚊子传播给人类。感染一种登革热病毒血清型导致终生免于再受该血清型的重复感染，但无法免于另外减毒登革热病毒血清型之一的二次感染。实际上，先前感染一种登革热病毒血清型导致当二次感染不同血清型时重症(DHF/DSS)的风险增高。有效疫苗的开发代表了此全球性疾病的预防和控制的重要方法。多重免疫接种使得对登革热病毒地方性国家中的公共卫生努力以及旅行者两者进行完整疫苗覆盖变得困难。
技术实现思路
本文的实施方案涉及嵌合式登革热病毒构建物的组合物、方法及用途。在一些实施方案中，组合物可包含具有减毒登革热病毒骨架的嵌合式登革热病毒构建物，所述构建物带有来自至少另一个登革热病毒血清型的结构基因。其它实施方案涉及至少一种活减毒病毒与一种或多种嵌合式登革热病毒的组合。其它实施方案可包括嵌合式登革热病毒的组合物，其具有修饰的DEN-2骨架(例如PDK-53作为P1(1-代)的起始骨架以及传代变异性(在许可细胞系上体外传代和生长之后)如针对P2、P3、...、P8、...P10等所指示的)以及DEN-1、DEN-2、DEN-3或DEN-4的一种或多种结构组分。在其它实施方案中，生成免疫原性组合物，当引入个体时，该组合物在个体内产生针对一种或多种登革热病毒的免疫应答。因此，本文预期的构建物可在体外生成并传代，以及每一代各自提供预期用于药学上可接受的疫苗组合物的减毒登革热病毒。在某些实施方案中，活减毒病毒可为单独的活减毒登革热-2病毒或其与一种或多种嵌合式登革热病毒的组合。在某些实施方案中，登革热病毒血清型的嵌合式登革热病毒构建物可包含7-代(P7)活减毒病毒或嵌合式病毒，其具有由SEQIDNO：1、4、7及10确定的核酸序列或由SEQIDNO：2、3、5、6、8、9、11及12指示的多肽序列。本文预期了本文所述的任何活减毒病毒的任何传代可用于免疫原性组合物以诱导针对呈示的登革热病毒(例如血清型1-4)的免疫应答。依据这些实施方案，根据所选的构建物，包含P-8分离的活减毒病毒的免疫原性组合物可被给予个体以诱导对抗一种或多种登革热病毒血清型的免疫原性应答。此外，活减毒病毒可与这些嵌合式病毒中的一种或多种相组合。针对在各次接续细胞传代(例如非洲绿猴肾Vero细胞产生，后文称：Vero细胞)中分离/产生的每一活减毒病毒，预期了上述情况。本文预期了能够产生登革热病毒的任何细胞系(例如GMP产生的细胞存库、经FDA或EMA批准的)以制造规模用于使该病毒构建物中任一种传代，或视情况，本文预期了随后用于对抗登革热病毒的疫苗或免疫原性组合物。在其它实施方案中，本文预期的组合物可与对抗其它黄病毒的其它免疫原性组合物如西尼罗病毒、日本脑炎病毒或任何其它黄病毒嵌合式构建物和/或活减毒病毒相组合。在某些实施方案中，单一组合物可用以对抗多种黄病毒。在某些实施方案中，本专利技术的免疫原性组合物可包含对抗DEN-1、DEN-2、DEN-3、和/或DEN-4中的一个或多个的单独的嵌合式登革热病毒，或其与活减毒登革热病毒组合物的组合。在其它实施方案中，构建物可包括在病毒的结构区或非结构区具有适应性突变的构建物，该突变使生长或生产得到提高而不影响引入个体时病毒的减毒或安全性。在某些实施方案中，预期的嵌合式登革热病毒构建物中的任一种可包括具有特定突变的活减毒DEN-2病毒用作为骨架，其中活减毒DEN-2PDK病毒还包含其它登革热病毒血清型的prM(前膜)和E(被膜)结构蛋白质中的一种或多种的结构蛋白质。此外，DEN-2骨架可包括额外的突变，从而当给药时在个体中使对预定组合物的免疫应答的产生得到提高，或增强该免疫应答(例如嵌合式登革热病毒2/1、2/3或2/4)。在一些实施方案中，结构蛋白质基因可包括在DEN-2骨架上的DEN-1、DEN-2、DEN-3或DEN-4的prM和E基因，所述DEN-2骨架具有一个或两个作为活减毒登革热病毒的一部分的突变。举例而言，在某些实施方案中，登革热构建物可包括称为DENVax-1-A、DENVax-2-F、DENVax-3-F和DENVax-4-F(参见实施例部分)的那些构建物，其中DEN-2骨架具有来自DEN-2活减毒病毒的一个或多个突变(例如，在P1或其它先前传代的病毒或PDK-53中未找到的)，所述DEN-2活减毒病毒先前验证为安全有效地诱导免疫应答。本申请的DEN-2活减毒病毒是原先使用的DEN-2活减毒病毒的改良版本。本专利技术的嵌合式构建物可包括修饰的减毒DEN-2PDK-53骨架，其具有第二本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.编码修饰的活减毒登革热-2病毒株PDK-53多肽分子的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸包含至少一种突变，其中所述至少一种突变包括：/n在位置592处由鸟嘌呤取代腺嘌呤的突变，其编码的谷氨酸替代多肽分子的对应于prM-52处的氨基酸位置166的赖氨酸；以及/n在位置8803处由鸟嘌呤取代腺嘌呤的突变，其编码的缬氨酸替代多肽分子中对应于NS5-412处的氨基酸位置2903的异亮氨酸。/n

【技术特征摘要】
20130315 US 61/800,2041.编码修饰的活减毒登革热-2病毒株PDK-53多肽分子的多核苷酸分子，其中所述多核苷酸包含至少一种突变，其中所述至少一种突变包括：
在位置592处由鸟嘌呤取代腺嘌呤的突变，其编码的谷氨酸替代多肽分子的对应于prM-52处的氨基酸位置166的赖氨酸；以及
在位置8803处由鸟嘌呤取代腺嘌呤的突变，其编码的缬氨酸替代多肽分子中对应于NS5-412处的氨基酸位置2903的异亮氨酸。


2.如权利要求1所述的多核苷酸分子，其还包含以下的至少一个额外突变：
在核酸位置6481处由胞嘧啶取代鸟嘌呤的突变，其编码的脯氨酸替代多肽分子中对应于NS4A-36处的氨基酸位置2129的丙氨酸；和
在位置7156处由胸腺嘧啶取代胞嘧啶的突变，其编码的苯丙氨酸替代多肽分子中对应于NS4B-111处的氨基酸位置2354的亮氨酸。


3.根据权利要求1所述的多核苷酸分子，其包括SEQIDNO:14所示的多核苷酸。


4.根据权利要求1或3所述的多核苷酸分子，其编码修饰的活减毒登革热-2病毒株PDK-53，其中所述多肽由SEQIDNO:6所示。


5.由根据权利要求1-4任一项所述的多核苷酸分子编码的多肽分子。


6.修饰的活减毒登革热-2病毒株PDK-53，其包含一种或多种根据权利要求5所述的多肽分子。


7.药物组合物，其包含根据权利要求1-4任一项所述的多核苷酸分子、根据权利要求5所述的多肽分子或根据权利要求6所述的登革热-2病毒以及药学上可接受的赋形剂。


8.药学上可接受量的权利要求7所述的组合物在制备用于在个体中诱导免疫应答的药物中的用途，其中所述组合物在个体中针对登革热病毒诱导免疫应答。


9.载体，其编码权利要求1-4任一项所述的多核苷酸分子。


10.根据权利要求9所述的载体，其中所述载体是质粒载体。


11.根据权利要求9所述的载体，其中所述载体是cDNA传染性克隆。


12.细胞，其包含根据权利要求1-4任一项所述的多核苷酸分子或者根据权利要求9所述的载体。


13.免疫原性组合物，其包含至少一种根据权利要求1-4中任一项所述的多核苷酸分子以及药学上可接受的载剂。


14.权利要求13所述的免疫原性组合物，其进一步包含编码登革热-1/登革热-2多肽嵌合体的多核苷酸分子，所述多核苷酸包含编码来自修饰的活减毒登革热-2病毒株PDK-53的非结构蛋白质的第一核苷酸序列以及编码至少一种来自登革热-1的结构蛋白质的第二核苷酸序列，其中所述多核苷酸包含至少一个突变，其中所述至少一个突变包括以下的一个或多个：
在位置3823处由胞嘧啶取代腺嘌呤的突变，其编码的亮氨酸替代所述嵌合体中对应于NS2A116处的氨基酸位置1243的异亮氨酸；
在位置4407处由胸腺嘧啶取代腺嘌呤的突变，其编码的天冬氨酸替代所述嵌合体中对应于NS2B-92处的氨基酸位置1437的谷氨酸；和
在位置7311处由鸟嘌呤取代腺嘌呤的突变。


15.权利要求14所述的免疫原性组合物，其中编码登革热-1/登革热-2多肽嵌合体的所述多核苷酸分子进一步包含以下的至少一个额外的突变：
在位置7148处由胸腺嘧啶取代胞嘧啶的突变，其编码的异亮氨酸替代所述嵌合体中对应于NS4B-108处的氨基酸位置2351的苏氨酸；和
在位置2384处由胞嘧啶取代鸟嘌呤的突变，其编码的丙氨酸替代所述嵌合体中对应于E-483处的氨基酸位置763的甘氨酸。


16.权利要求14所述的免疫原性组合物，其中编码登革热-1/登革热-2多肽嵌合体的所述多核苷酸分子包含由SEQIDNO:13所示的多核苷酸。


17.权利要求14或16所述的免疫原性组合物，其中所述多核苷酸分子编码由SEQIDNO:3所示的登革热-1/登革热-2多...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹·T·斯廷奇科姆，克莱尔·凯尼，理查德·M·凯尼，吉尔·A·利文格德，
申请(专利权)人：武田疫苗股份有限公司，美国政府健康及人类服务部，
类型：发明
国别省市：美国;US