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用一种试剂的生物素药盒及快速测试技术制造技术

技术编号:2603919 阅读:186 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术属于用一种试剂的生物素药盒及简便快速的测试技术。本发明专利技术采用N-溴化琥珀酰亚胺为活化剂生产的生物素药盒它具有活泼易标记,使用方便,应用范围广,检测灵敏度高,速度快,稳定性能好。药盒容易贮存,保管,成本低,效益高,它简化了操作程序和缩短了操作时间,不受环境条件限制,特别适应广大基层防治单位的病疫普查和其它生物技术领域应用。(*该技术在2010年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物素快速反应药盒及简便测试技术。生物素药盒及相应的检测技术是八十年代问世的一种新的微量敏感,先进的测试技术,目前国内外厂家采用羧基琥珀酰亚胺为活化剂来生产药盒是通过胺基与羧基的反应来进行标记,但这种生物素试剂药盒操作程序复杂,操作时间长,它分别用四种独立试剂组成,即(1)生物素标记的抗人IgG或SPA,(2)亲和素(Avidin),(3)生物素标记的酶(B-RRP),(4)稀释剂分次按序使用。其操作程序需要十个步骤4~6小时才能完成,这由于该项技术反应层次多,操作显得非常烦锁,使用时也显得不方便,这样生产工序多,用量大,成本高,因而不少防治单位都希望尽快地研究简便快速的生物素药盒和检测技术。本专利技术目的是根据上述存在的问题和克服上述不足之处,而研制一种新型的溴化琥珀酰亚胺为活化剂,它根据生物素与亲和素反应的机制,采用正交优选法生产一种用单一试剂的生物素药盒及简便、快速测试技术,它比目前采用的羟基琥珀酰亚胺要活泼,易标记,使用范围广,具有效强反应能力,并具有灵敏度高,速度快、稳定性能好特点。本专利技术的生物素测试药盒,主要由(1)生物素标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(B~SPA),(2)亲和素(Avidin),(3)生物素标记的辣根过氧化物酶三种组合成一种快速反应试剂。它根据Biotin与Avidin结合牢固的特点。其亲和常数比抗原抗体复合物,酶和底物,受体与配体等生物活性物质的结合要小几个数量级以及Avidin参予的反应有4个活性部位,能同时与B-HRP和SPA-B发生反应,加之形成的复合物分子量为70000左右,均明显小于抗原抗体复合物等生物大分子(>20万)的机理,设计了这种药盒和一次加入的方法,通过等量混合后室温15分钟形成的复合物,具有较好的参予反应的活性,并十分稳定,置4℃冰箱内放置1年以上仍可使用,室温(20°~39°)可保存半年以上,这样就比过去的ABC一类的生物素(药盒)使用贮藏都方便得多,因为只需要一次加入,用量只有原来的三分之一,减少了包装,减轻了重量,方便运输,大大降低成本,在诊断血吸虫病方面使用这种试剂时不需要用牛血清白蛋白之类的非反应系统的蛋白质进行保护。本专利技术用一种试剂的生物素药盒的测试技术,它简化了操作程序,由原来10个程序减少为7个程序;缩短了反应时间由原需要4~6小时完成,缩短为0.5~1小时内完成,其新的溴化琥珀酰亚胺生物素为活化剂新药盒的操作程序和反应方法如下Ag包被(室温2小时→NS洗涤一次→加待测血清(室温15分钟)→NS洗涤三次→加生物素快速反应试剂(室温15分钟)→NS洗涤三次→加低物显色共7次完成。其原来的ABC测试技术程序如下Ag包被过夜→PBS缓冲液洗涤3次→加待测血清(37℃,60分钟)→洗涤3次→加B-SPA(37℃,60分钟)→洗涤3次→加ABC(37℃30分钟)→洗涤3次→加底物显色共10次完成。本专利技术以溴代琥珀酰亚胺活化剂生产的药盒及专利技术的测试技术它明显的简化了操作程序和缩短了操作时间,基本上不受环境条件的限制,它不仅用于准确的诊断还特别适合广大基层防治单位流行病普查和疫情的监测。如没有电和仪器,通过观察也可到现场直接测试,用这种试剂和简便快速的检测技术诊断血吸虫等病取得了满意诊断效果。并能广范用于人、畜疾病的诊断调查和基因探测等生物
权利要求1.用一种试剂的生物素药盒及简便,快速的测试技术,广泛用于人、畜疾病的诊断、调查和基因探测等生物
,其特征(1)生物素药盒用N-溴化琥珀酰亚胺活化生物素来标记抗人IgG,SPA,NRP凝集素(2)本专利技术的生物素快速反应试剂药盒,由(a)生物素标记的金黄色葡萄球菌蛋A(B-SPA),(b)亲和素(Avidin),(c)生物素标记的辣根过氧化物酶,三种配合而成,(3)用生物素快速反应试剂药盒的测试技术程序于下Ag包被(室温2小时)→NS洗涤1次→加待测血清(室温15分钟)→NS洗涤三次→加生物素快速反应试剂(室温15分钟),→NS洗涤三次→加底物显色,由原来10个程序减少为7个程序,测试时间由原来4~6小时减少为0.5~1小时。全文摘要本专利技术属于用一种试剂的生物素药盒及简便快速的测试技术。本专利技术采用N-溴化琥珀酰亚胺为活化剂生产的生物素药盒它具有活泼易标记,使用方便,应用范围广,检测灵敏度高,速度快,稳定性能好。药盒容易贮存,保管,成本低,效益高,它简化了操作程序和缩短了操作时间,不受环境条件限制,特别适应广大基层防治单位的病疫普查和其它生物
应用。文档编号G01N33/52GK1044340SQ9010541公开日1990年8月1日 申请日期1990年2月22日 优先权日1990年2月22日专利技术者姜光斗, 易咏梅 申请人:姜光斗, 易咏梅本文档来自技高网
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【技术保护点】
用一种试剂的生物素药盒及简便,快速的测试技术,广泛用于人、畜疾病的诊断、调查和基因探测等生物技术领域,其特征:(1)生物素药盒用N-溴化琥珀酰亚胺活化生物素来标记抗人IgG,SPA,NRP凝集素(2)本专利技术的生物素快速反应试剂药盒, 由(a)生物素标记的金黄色葡萄球菌蛋A(B-SPA),(b)亲和素(Avidin),(c)生物素标记的辣根过氧化物酶,三种配合而成,(3)用生物素快速反应试剂药盒的测试技术程序于下:Ag包被(室温2小时)→NS洗涤1次→加待测血清( 室温15分钟)→NS洗涤三次→加生物素快速反应试剂(室温15分钟),→NS洗涤三次→加底物显色,由原来10个程序减少为7个程序,测试时间由原来4~6小时减少为0.5~1小时。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:姜光斗咏梅
申请(专利权)人:姜光斗咏梅
类型:发明
国别省市:43[中国|湖南]

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