一种用于同时诊断乙型肝炎和丙型肝炎的诊断试剂盒，其包含一或多种包括丙型肝炎的核心蛋白、非结构３蛋白、非结构４蛋白和包膜蛋白的一或多个抗原表位的丙型肝炎病毒抗原蛋白；以及，一或多种包括乙型肝炎的核心蛋白和表面抗原蛋白的一或多个抗原表位的乙型肝炎病毒抗原蛋白。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于同时诊断乙型肝炎和丙型肝炎的诊断试剂盒以及采用所述的诊断试剂盒的诊断方法。更具体地，本专利技术涉及一种包括乙型肝炎和丙型肝炎病毒抗原的用于同时诊断乙型肝炎和丙型肝炎的诊断试剂盒，以及采用所述试剂盒的诊断方法。
技术介绍
一般说来，已知病毒诱发的肝炎是由各种肝炎病毒引起的，这些病毒包括甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、巨细胞病毒和Epstein-Barr病毒。在这些病毒中，乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝DNA病毒并已知可引起包括肝癌在内的各种肝病。HBV具有3.2kb双链DNA，其包括编码包膜蛋白的S基因、编码核心蛋白的C基因、编码DNA聚合酶的P基因和编码未鉴别的X蛋白的X基因组成的4个开放读框(Garnem，D.等人，Ann.Rev.Biochem.，50,651-693(1987))。包括HBV表面抗原、核心抗原和e抗原的HBV抗原已被用于诊断乙型肝炎，其是通过在HBV感染后检测血清中形成的抗体而进行。特别是核心抗原对于在初始阶段检测乙型肝炎很有用，因为抗核心抗原抗体在感染HBV后很快就会形成并且在几乎每一个被HBV感染的病人的血清中都可检测到；而且，表面抗原在确定乙型肝炎是否痊愈方面很有用，因为在乙型肝炎的恢复阶段发现有抗表面抗原抗体。另外，已知在输血引起的肝炎中的70-80％是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的(Alter，H.J.等人，Lancet 2，838-841(1975)；Dienstag，J.L.等人，Seminar Liver Dis.，6，67-81(1986))；而且这种输血后肝炎通常会发展成肝硬化或肝细胞癌。所述的病毒是一种由一条RNA正链组成的RNA病毒并且由所述链的开放读框(ORF)产生一多蛋白前体(Choo，Q.L.等人，Science，244,359-362(1989)；Choo，Q.L，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88,2451-2455(1991))。丙型肝炎病毒的基因结构与黄病毒或瘟病毒的基团结构相似(Miller，R.H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci，87,2057-2061(1990)；Muraiso，K.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.,172,511-516(1991))，并且以所述的关系为基础，推测丙型肝炎病毒的多蛋白从N末端到C末端依次由核心-包膜1(E1)-包膜2/非结构1蛋白(E2/NS1)-非结构2蛋白(NS2)-非结构3蛋白(NS3)-非结构4蛋白(NS4)-非结构5蛋白(NS5)(Choo，Q.L.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88,2451-2455(1991)；Takamizawa.A.等，J.Virol.65,1105-1113(1991)；Kato，N.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87,6524-6528(1990))。丙型肝炎病毒的感染可以通过用聚合酶链反应(PCR)直接从血样中检测丙型肝炎病毒RNA而进行诊断(Hosoda，K.等，Hepatology，15,777-781(1992)；Abe，K.，等，Hepatology，15，690-695(1992)；Alter，H.J.，Annals ofInternal Medicine 115，644-649(1991))，通过这种方法可以很容易地检测病毒RNA，即在感染后1到2星期内即可检测；然而由于需分析大量的样品，因此这种方法费用高，时间长。另一种诊断方法是例如通过使用C100-3蛋白的酶联免疫测定检测存在于血清样品中的抗丙型肝炎病毒抗体(Choo，Q.L.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88，2451-2455(1991)；Kuo，G.等，Science，244，362-384(1989))。然而，Contreras等人指出所述的使用ELISA的诊断方法对于患有除丙型肝炎以外的肝病，例如胆汁型肝硬化、自身免疫病、原因不明的肝硬化等的病人的血清经常会出现假阳性结果(Contreras，M.等，Lancet，2，505(1989)；Cash J.D.等，Lancet，2，505(1989))。Theilmann等人报道当用Ortho Diagnostic SystemsInc.的第一代诊断试剂和诊断方法诊断时，超过60％的患有类风湿关节炎的病人显示出HCV阳性信号(Lancet，335，1346(1990))。上述结果意味着使用ELISA的诊断方法可能会显示假阳性结果，因此也需要进行确证试验。另外，美国的Chiron Co.和OrthoDiagnostic Inc.开发出一种采用重组免疫印迹测定法。(RIBA)确证用ELISA获得的诊断结果的改进的诊断方法，其中所述的改进的诊断方法包括将两个HCV特异性抗原SOD-5-1-1和SOD-C100-3印到硝酸纤维素膜上，使所述的抗原与取自丙型肝炎患者的血清反应，使抗原-抗体复合物与用过氧化物酶标记的抗人类IgG抗体反应，然后以每一抗原带的颜色强度为基础确定在血清中抗HCV抗体的存在与否。Baudart等人报道在取自副蛋白血症(paraproteinemia)病人的184个血清试样中用ELISA方法诊断出有28个试样呈HCV阳性，然而当用上述RIBA方法确证阳性血清试样时，只有1个试样诊断为阳性，3个试样留待确定(Lancet，336，63(1990))。美国的Ortho Diagnostic Systems Inc.也报道了对抗HCV抗体具有改善的灵敏性的第二代RI BA诊断试剂(RI BA II)，其是通过向预先存在的第一代诊断试剂中加入核心抗原C22-3和非结构3抗原C33C而制备的。Vallari等人报道使用包括所述的C22-3、C33C和C100-3蛋白的诊断试剂的斑点免疫印迹测定法比仅使用C100-3蛋白的方法检测抗HCV抗体更早并且灵敏性更高(J.Clin.Microbiol.30(3)，552(1992))。在大多数情况下，乙型肝炎和丙型肝炎是通过不同的诊断试剂盒和试样分别诊断的，其费用高并需大量试样，但现有方法的特异性和精确性却不令人满意。本专利技术人致力于开发一种比现有的ELISA方法或RI BA方法具有更高的灵敏度和特异性的用于同时诊断乙型肝炎和丙型肝炎的诊断试剂盒和/或诊断方法。本专利技术概述因此，本专利技术的主要目的在于提供一种用于同时诊断乙型肝炎和丙型肝炎的诊断试剂盒。本专利技术的另一目的在于提供一种使用所述的诊断试剂盒同时诊断乙型肝炎和丙型肝炎的诊断方法。根据本专利技术的一个方面，提供了一种诊断试剂盒，.其包括包含丙型肝炎病毒的核心蛋白、非结构3蛋白、非结构4蛋白、非结构5蛋白和包膜蛋白一或多种抗原表位的一或多种HCV抗原蛋白，以及包含乙型肝炎病毒的核心蛋白和表面抗原蛋白的一或多种抗原表位的一或多种HBV抗原蛋白。根据本专利技术的另一方面，提供了一种使用本专利技术的诊断试剂盒的用于同时诊断乙型肝炎和丙型肝炎的诊断方法。附图的简要说明本专利技术的上述和其它目的和特点将通过下述结合附图的优选实施方案的描述而更加清楚，其中附图说明图1显示了编码KHCV CORE1本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：曹重明，崔德永，金天炯，苏弘燮，梁宰荣，金仁寿，崔东燮，
申请(专利权)人：株式会社乐喜，
类型：发明
国别省市：
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