＊＊＊ 公开了用于检测任何生长促进剂，特别是β－兴奋剂和β－拮抗剂（两者可能存在于动物或人的可疑尿、肉类或血液样品中）的分析方法和含有苯甲酰甘氨酸衍生物的化合物。还提供了一种填塞物用于在肉类和兴奋剂检测中实施分析方法。在结构式（Ⅰ）中，Ｒ↓［６］是ＮＨ↓［２］、ＯＨ、ＣＯＮＨ↓［２］或ＳＯ↓［２］ＮＨ↓［２］；Ｒ↓［７］和／或Ｒ↓［８］是Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、ＣＨ↓［２］ＯＨ、ＣＦ↓［３］、ＮＯ↓［２］或Ｆ；Ｒ↓［９］是Ｃ↓［２－６］烷基、Ｃ↓［７－９］烷芳基、ＣＨ↓［２］ＳＨ、（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］ＳＭｅ、（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］ＣＯＮＨ↓［２］、（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］ＣＯＯＨ、（ａ）、（ｂ）和（ｃ）；Ｙ是ＣＯ或ＳＯ↓［２］。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于检测来自动物或人的可疑尿、肉类或血液样品中可能存在的β-兴奋剂和β-拮抗剂的化合物和分析方法。本专利技术也涉及在肉类检验和反兴奋剂试验中用于实施分析方法的填塞物。许多年来，人们利用生长促进剂来使家畜增肥。最知名的促进剂是促蛋白合成类固醇，其自1988年1月1日起在所有欧共体国家被禁止使用。同样，人们还碰见用于促进生长的其它生长促进剂，特别是β-兴奋剂和β-模拟物，其中最著名的代表是氨哮素。这些化合物和类似化合物最初被用于治疗哮喘症状，例如用于在猪和家畜中治疗支气管炎的支气管痉挛缓解剂，用于避免流产的子宫松弛剂。但是，因为这些物质还会对脂肪以及肌肉代谢产生功效，同时具有改善骨骼质量的特性，因此它们立即引起家畜饲养者的兴趣及对利益的追求。因为这些物质的生化活性显得与另外两个很知名激素肾上腺素和去甲肾上腺素的机制相同，所以，人们认为β-兴奋剂是一种具有激素活性的物质。利用β-兴奋剂来改善肉类的质量在欧洲经济共同体中是非法的。由于β-兴奋剂族内相对大的多样性(功能基团、酸碱特性)，因此，人们还没有开发出一种快速的精馏方法，以便直接快速地浓缩和鉴定所有拥有类似特性的β-兴奋剂族的物质。迈向正确方向的第一步是最近在文献中描述的免疫亲和柱，但这些柱仅特异性地针对叔丁基和正丁基、异丙基和2-戊基(Le Journal of AOAC International，第75卷554-560页，VAN GINKEL等Development and validation of amultiresidue method for beta-agonists in biological samples and animal feed)。然而，对所有β-兴奋剂似乎存在一种共有的基本结构，即下述形式的苯基乙醇胺结构 其中R1＝HR2＝CH2OH、Cl、OH、HR3＝OH、NH2、HR4＝H、Cl、OH、CF3、CNR5＝C2-C6烷基、C7-C9烷芳基、CH2OH、CH2SH、(CH2)nSMe、(CH2)nCONH2、(CH2)nCOOH、 这一共有的苯基乙醇胺基团总是存在，它也构成了β-兴奋剂药理学活性片段。随着越来越多的β-兴奋剂被合成(表1)，与原先的儿茶酚胺相似性减少了。表I.1某些β-兴奋剂的结构 表I.1某些β-兴奋剂的结构 技术性问题在在于开发一种合适的用于选择性地显示构成β-兴奋剂基本成分的苯基乙醇胺以及快速地纯化它们的方法。β-兴奋剂潜在地存在于屠宰动物的尿中。本专利技术提供一种亲和色谱方法，能够快速地分离和检测苯基乙醇胺。根据本专利技术的一个特点，亲和色谱方法利用能与β-兴奋剂结合的化学配基。已提出使用4-的氨基-3，5-二氯苯甲酰甘氨酸(ADBG)作为配基来纯化β-兴奋剂。在一个优选实施例中，通过把间苯二酚作为插入剂(intercalating agent)将ADBG偶联于由环氧基活化的Sepharose柱中的常规填塞物上。改进的材料对被试验的β-兴奋剂具有非常好的亲和性，除了舒喘宁。由Gand大学植物生化实验室的Hanselaer R.等人在比利时化学学会通报上发表的题为“N-乙酰氨基酸和肽。氧敏感的N-乙酰甘氨酸的第七次合成”的文章((BSCBAG，00379646)83，92卷(11-12)；1029-37页)中，描述了一种合成多个化合物的方法，其中有一些化合物具有下述结构 其对应于被推荐的配基。本专利技术也涉及一种新的合成4-氨基-3，5-二氯苯甲酰甘氨酸的方法以及与插入分子连接以有效地与亲和基质偶联的方法。下列化合物被建议作为可能的配基，用于分子亲和色谱 其中R6＝NH2、OH、CONH2、SO2NH2R7和/或R8＝Cl、Br、OH、CH2OH、CF3、NO2、FR9＝C2-C6烷基、C7-C9烷芳基、CH2OH、CH2SH、(CH2)nSMe、(CH)nCONH2、(CH2)nCOOH、 随后对于该配基在已知或未知β-兴奋剂的残余分析方法中的应用而言，对污染尿样的亲和色谱检测获得了非常好的结果。起动的亲和色谱试验显示，由CNBr激活的Sepharose 4B、环氧基活化的二氧化硅或戊二醛Sepharose 4B和二氧化硅P构成的柱填塞物没有一个与被试验的β-兴奋剂有亲和力，然而它们可与ADBG直接偶联。原因可能是载体对配基保护作用。通过引入额外的具有功能团(NH2或OH)的间质分子可促进亲和，因其能轻易地与柱基质偶联。使用芳香族插入剂获得了好的结果。将苯酚、间苯二酚或苯胺预先偶联于合适的柱基质上。然后，将重氮化的ADBG分子连接到偶联的芳香族化合物上。根据本专利技术，这种方法的一个额外优点在于，因为形成了偶氮-苯之间的偶氮键，所以会显示红颜色，从而可以立即观察到配基是否与柱中分散相填塞物相偶联。平均地，在插入剂苯酚或间苯二酚和4-氨基-3，5-二氯苯甲酰甘氨酸的协助下，可获得的胶占有度为10-15μmol/ml。A.合成配基1.合成4-氨基-3，5-二氯苯甲酸和相应的乙酯1.1.制备4-氨基苯甲酸乙酯在1.5升配备磁性搅拌器的圆底烧瓶中，将100g(0.73mol)氨基苯甲酸(1)溶于500ml乙醇中。在冷水浴中冷却该溶液，其间滴加86g(0.73mol)亚硫酰二氯。接着，在油浴中回流该混合物10小时。 冷却后，产生一种沉淀物，加入500毫升水使其重新溶解。然后，分批添加81g碳酸钠。将分级结晶分离出的沉淀滤出，并用滤液重复该过程。分子量＝165g 产率＝118.0g＝98％1.2.制备4-氨基-3，5-二氯苯甲酸乙酯在3升的圆底烧瓶中，将115.5g(10.7mol)4-氨基苯甲酸乙酯(2)溶于900ml四氯化碳中。在添加198g(1.4mol)磺酰氯后，混合物在油浴中回流加热15小时。 2.合成4-氨基-3，5-二氧苯甲酰甘氨酸和相应的甲基酯2.1.制备4-氨基-二氯苯甲酰氯在装备具有球状凸起(shoulders)和CaCl2防护管的冷凝器的一升圆底烧瓶中，加入20.6g(0.1mol)4-氨基-3，5-二氯苯甲酸(4)，在300毫升二氯甲烷中温和回流10分钟，以便溶解所有物质。接着，加入36g(3.3mol)亚硫酰二氯，回流加热5小时，直至获得清澈的溶液。 需要无水介质以避免将酰基氯(5)水解成羧酸(4)。使用亚硫酰二氯时，会通过一个副反应而形成4-亚硫酰亚氨基-3，5-苯甲酰氯。约50％的氨基功能团被转变成亚硫酰亚胺。该百分率随回流时间的增加而上升。在水介质中，游离胺(5)重又释放。反应混合物通过旋转蒸发器完全蒸发干燥。随后便可使用。2.2.制备4-氨基-3，5-二氯苯甲酰甘氨酸将来自前面步骤的粗酰基氯(5)(0.1mol)溶于300ml二氯甲烷中。滴加含有33.75g(0.45mo1)甘氨酸和18g(0.45mol)氢氧化钠的150ml水溶液。甘氨酸的游离氨基与酰基氯起亲核加成反应并且形成4-氨基-3，5-二氯苯甲酰甘氨酸(6)。在配备空气冷凝器的圆底烧瓶中，室温搅拌反应混合物过夜。反应后，用浓盐酸调节水相至pH＝3。过滤去沉淀后，获得20.72g粗产品。通过添加水的副反应，形成约10％的起始酸(4)通过在45ml热乙酸中的分级结晶，纯化4-氨基-3，5-二氯苯甲酰本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种苯甲酰甘氨酸衍生物，其特征在于，在其环上具有多个取代基，结构式如下：其中：、、、２．如权利要求１所述的苯甲酰甘氨酸衍生物的用途，其特征在于，用于检测特定尿、肉类和血液样品中是否存在β－兴奋剂和β－拮挤剂类型物质的分析方法。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：RG维尔赫，G德布罗克，A洛门，H科犹肯斯，
申请(专利权)人：其他，
类型：发明
国别省市：BE[比利时]
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