合成的多不饱和脂肪酸类似物制造技术

本发明专利技术提供了具有抗疟和／或刺激嗜中性白细胞活性或者抗炎活性的多不饱和脂肪酸化合物。所述的多不饱和脂肪酸含有一１６－２６个碳原子链，３－６个双键并在羧酸基团与一氨基酸共价偶联。优选的是脂肪酸含有１８－２２个碳原子，氨基酸是甘氨酸或天冬氨酸。优选的化合物是γ－亚麻酸－甘氨酸，α－亚麻酸－甘氨酸，花生四烯酸－甘氨酸，甘二碳六烯酸－甘氨酸，二十碳五烯酸甘氨酸，γ－亚麻酸－天冬氨酸，α－亚麻酸－天冬氨酸，花生四烯酸－天冬氨酸，二十碳五烯酸－天冬氨酸和甘二碳六烯酸－天冬氨酸。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及具有抗疟活性和/或刺激嗜中性白细胞活性的新的多不饱和脂肪酸，另外，某些这类新的多不饱和脂肪酸抑制细胞因子活性。世界上超过半数的人口处于疟疾的危险之中，每年记载约有5亿人患急性感染，约有一百万人死亡(热带病进展国际研究，1987-1988，第九计划报告，UNDP/世界银行/WHO，日内瓦，43-49；Stevenson MM编辑的《疟疾宿主对感染的反应》前言，CRC出版公司)。使用抗疟药物伴有许多严重问题，因为对抗疟药物的抗性不断增加，并且抗疟药物有毒副作用。许多目前使用的抗疟药物不适用于儿童(大多数处于潜伏的致命脑疟疾的危险之中)、孕妇和老年人。嗜中性白细胞/巨噬细胞刺激剂可以用于治疗其它感染，包括假丝酵母感染、锥虫感染、病毒如肝炎病毒和新培斯病毒感染、军团菌感染、李斯特氏菌病感染、肺囊虫感染、假单胞菌感染。它们也可用于遭受免疫损害的个体包括癌症化疗病人、移植受体和烧伤病人的辅助治疗。另外，也可治疗其它所谓正常的个体，例如老年人、2周岁以下儿童、饮酒过度的人，已知这些人的吞噬细胞活性较差。炎症可能由细菌、病毒和/或其它感染原、机会性感染(其可能由免疫力降低状态引起，例如由癌症或治疗特别是胞毒性药物治疗或放疗所致)、自身免疫性或其它原因引起。脓毒休克是是与系统性炎症相关的疾病的一个例子，通过将LPS给予动物可以在动物中重现革兰氏阴性脓毒休克的许多临床特征，其可以促发严重的代谢和生理变化，从而导致死亡。与LPS感染相关的是促炎细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNFα)的过度产生。将TNF长期给予小鼠、大鼠和/或人会导致厌食、体重下降并在7-10天内耗竭体内脂类和蛋白质(Cerami等人，1985，免疫学通信11，173；Fong等人，1989，实验医学杂志170，1627；Moldawer等人，美国生理学杂志254 G450-G456，1988；Fong等人，美国生理学杂志256，R659-R665(1989)；McCarthy等人，美国临床自然杂志，42，1179-1182)。在伴有极度瘦弱的癌症病人和慢性病人中的TNF水平已经被测量。TNFα已被牵涉在除毒性休克和癌症相关的极度瘦弱以外的其它伴有慢性炎症的疾病的病理中。已在患有类风湿病和反应性关节炎的病人的滑液以及患有类风湿性关节炎的病人的血清中检测到TNF(Saxne等人，1988，关节炎和类风湿病，31，1041)。在肾移植病人的急性排斥期检测到升高水平的TNF(Maury and Teppo，1987，实验医学杂志，166，1132)。在动物中，已证明TNF牵涉在异源骨髓移植后在皮肤和肠道的移植物对宿主疾病的病理中。给予兔抗小鼠TNF抗体已证明能防止与移植物对宿主疾病相关的组织学变化并降低死亡率(Piquet等人，1987，实验医学杂志，166，1220)。也已证明TNF与疟疾病理也显著相关(Clark等人，1987，美国病理学杂志，129，192-199)。另外，在疟疾病人中报道了升高的TNF血清水平(Scuderi等人，1986，柳叶刀，2，1364-1365)。已进一步发现升高的促炎细胞因子水平在类风湿性关节炎、多发性硬化症(MS)和Crohns氏症中引起病理和组织遭受破坏。实验发现中和细胞因子产生细胞活性的抗体(例如抗CD4+T细胞的抗体或抗CD3的抗体)或者中和细胞因子本身活性的抗体(例如抗TNF抗体)是有益的。已知高水平的干扰素γ与MS的病势加重有关。PUFA’s具有一系列的有用生物学活性(例见国际专利申请WO93/00084和WO95/00607及其引述的参考文献)。不幸的是由于其在体内的稳定性有限，因此PUFA’s还不能广泛用作治疗剂。本专利技术人开发了一种将氨基酸偶联到PUFAs的方法，使得PUFAs在保持生物学活性的同时具有增加的稳定性和溶解性。这些新的聚不饱和脂肪酸(PUFA)化合物具有直接的抗疟疾活性，除了其直接的抗疟疾活性外，某些新的PUFA能活化人嗜中性白细胞释放颗粒成分，并在生产超氧化物中与TNF显示有协同效应。PUFA对人嗜中性白细胞的活化导致这些细胞具有增强的杀死血红细胞中的疟疾寄生虫(恶性疟原虫，P.falciparum)以及细菌金黄色葡萄球菌的活性。另外，本专利技术人还发现某些氨基酸偶联的PUFA是抗炎的，它们在不能活化嗜中性白细胞的同时降低了促炎细胞因子的产生。因此，本专利技术涉及具有抗疟疾和/或嗜中性白细胞刺激活性或者抗炎活性的不饱和脂肪酸化合物，所述的不饱和脂肪酸含有一16-26个碳原子链，3-6个双键，其中该不饱和脂肪酸在羧基端与一氨基酸共价偶联。在本专利技术的一个优选实施方案中，脂肪酸含有18-22个碳原子。在本专利技术的另一个优选实施方案中，氨基酸是甘氨酸或天冬氨酸。在本专利技术的又一个优选实施方案中，脂肪酸是一种n-3至n-6化合物。在本专利技术的再一个优选实施方案中，该化合物是γ-亚麻酸-甘氨酸，α-亚麻酸-甘氨酸，花生四烯酸-甘氨酸，廿二碳六烯酸-甘氨酸，二十碳五烯酸甘氨酸，γ-亚麻酸-天冬氨酸，α-亚麻酸-天冬氨酸，花生四烯酸-天冬氨酸，二十碳五烯酸-天冬氨酸，廿二碳六烯酸-天冬氨酸。为更清楚地了解本专利技术的实质，参照下列实施例和附图描述本专利技术的优选形式附图说明图1和2示出PUFAs对释放嗜苯胺蓝颗粒的作用；图3示出用PUFAs处理后嗜中性白细胞特异性颗粒成分的释放；以及图4示出PUFA对嗜中性白细胞介导的金黄色葡萄球菌的杀灭的作用。在这些附图中使用了如下缩写204花生四烯酸205二十碳五烯酸226廿二碳六烯酸gly 甘氨酸asp 天冬氨酸表1示出氨基酸偶联的PUFAs的直接抗疟疾活性。表2示出氨基酸偶联的PUFAs抑制PHA刺激的外周血单核细胞产生TNFα和干扰素γ的活性。表3示出氨基酸偶联的PUFAs抑制外周血单核细胞的经PHA刺激增殖(主要是T细胞增殖)的活性。方法嗜中性白细胞的制备来自正常健康个体的肝素化血在Ficoll-Hypaque培养基上培养至密度为1.114，然后于室温在600g离心30-40分钟，细胞在Hanks平衡盐溶液(HBSS)中洗三次。所得制剂对于白血细胞为96-99％纯，根据其排除台盼蓝的能力鉴定其＞99％存活。血红细胞的污染总是低于1％嗜中性白细胞，血小板的污染通常不存在。脂肪酸微胶粒的制备及嗜中性白细胞的预处理为解决脂肪酸在水溶液中的不溶性，通过超声波处理在HBSS中制备混合的二棕榈酰磷酯酰胆碱(DPC，400μg)脂肪酸(100μg)微胶粒。嗜中性白细胞在37℃预处理30分钟。在一些实验中，将PUFA溶于乙醇。嗜中性白细胞化学发光的测量向100μl在HBSS中的嗜中性白细胞(1×106)中加入100μl脂肪酸微胶粒或者DPC以及另外300μlHBSS，随后立即加入500μl光泽精(0.25mg/ml于PBS中)，在发光计中测量一段时间的光输出(mV)。用来自不同个体的细胞进行三份重复实验，所得值代表反应的峰值。脱粒的测量通过测量维生素B12结合蛋白(如Gottleib等人，1965，血液，25875-883所述)和β-葡糖醛酸酶释放(如Kloldeney and Mumford，1976，临床化学年鉴，70247-257)测定脱粒。杀菌检测根据Ferra本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有抗疟和／或刺激嗜中性白细胞活性或者抗炎活性的多不饱和脂肪酸化合物，所述的多不饱和脂肪酸含有一１６－２６个碳原子链，３－６个双键，其中所述的多不饱和脂肪酸在羧酸基团与一氨基酸共价偶联。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：弗雷德威德默，保罗亚当肖伯，玛丽琳乔伊斯莱，安东尼奥费兰特，阿尔弗雷德普洛斯，德博拉安拉特延，
申请(专利权)人：其他，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]