检测外周血抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种检测外周血抗原特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的新方法，包括构建和制备ＭＨＣⅠ类分子的突变体蛋白，通过体外孵育得到ＭＨＣⅠ类分子突变体－肽复合物，将所述复合物与光交联剂化学交联，使已经交联了光交联剂的复合物与样品中所要检测的抗原特异性ＣＴＬｓ相互结合，在温和条件下进行光交联而将ＭＨＣⅠ类分子突变体－肽复合物不可逆地共价结合在ＣＴＬ表面的ＴＣＲ上，随后用免疫荧光检测抗原特异性ＣＴＬ。本发明专利技术还涉及使用所述方法的试剂盒及其应用。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子免疫学和细胞免疫学领域，更具体地，本专利技术涉及体外检测抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的新方法，利用该方法的试剂盒及其应用。细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte，CTLs)通过识别细胞表面主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex，MHC)I类分子及其结合的抗原肽而杀伤靶细胞，是机体抗肿瘤、抗移植物及有效控制各种感染的重要免疫防御反应之一。抗原特异性CTLs所能识别的抗原主要是来源于内源性蛋白抗原降解后结合于MHC I类分子上的肽段。MHC I类分子是由具有高度多态性的重链及保守的轻链即β2微球蛋白组成的异源二聚体，在所有有核的细胞中表达，在人中MHC I类分子的重链由称为人白细胞抗原(HLA)的分子组成。与MHC I类分子结合的抗原短肽在抗原递呈细胞(APC)内被加工(内源性抗原)，在细胞的内质网中结合于MHCI类分子重链的α1和α2功能区构成的肽结合槽(groove)内，β2微球蛋白与重链通过非共价结合并起稳定MHC I类分子-肽复合物的作用，然后定位于细胞表面，抗原特异性CTLs通过其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测外周血抗原特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的方法，所述方法包括如下步骤：ａ）构建和制备ＭＨＣＩ类分子的突变体蛋白，以使之能与苯甲酮类光交联剂结合而同时不改变其空间构象及与ＴＣＲ结合的功能；ｂ）将突变体蛋白与抗原特异性肽保温形成复合物；ｃ）将所述复合物与苯甲酮类光交联剂在４℃避光保温过夜；ｄ）将步骤ｃ）的复合物与可能含有抗原特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的外周血淋巴细胞样品４℃保温３０分钟；ｅ）以大于３１０ｎｍ波长的紫外光照射步骤ｄ）的混合物３０分钟；以及ｆ）免疫荧光检测步骤ｅ）的混合物以确定外周血淋巴细胞样品中抗原特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的存在。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王恒，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]