生物学产品制造技术

本发明专利技术公开了抗体分子，它包含至少一个ＣＤＲ，该ＣＤＲ来源于对人类ＫＤＲ具有特异性的小鼠单克隆抗体。本发明专利技术还公开了ＣＤＲ移植的抗体，其中至少一个ＣＤＲ是杂交ＣＤＲ。进一步公开的是编码抗体分子各链的ＤＮＡ序列、载体、转化的宿主细胞以及抗体分子在治疗与ＶＥＧＦ和／或ＫＤＲ有关的疾病中的应用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种抗体分子，它对包含人类激酶插入结构域的受体(KDR)的抗原决定簇具有特异性。该抗体分子结合KDR的亲和力比人类血管内皮生长因子(VEGF)对KDR的亲和力高，可防止VEGF和KDR之间的相互作用。本专利技术还涉及该抗体分子的治疗用途以及该抗体分子的生产方法。本专利技术涉及抗体分子。一种抗体分子中有两条重链和两条轻链。每条重链和每条轻链在其N末端都具有一个可变结构域。每个可变结构域包含四个骨架区(FRs)，它们以三个决定簇互补区(complementarity determining region，CDR)相间隔。决定簇互补区决定了抗体的抗原结合特异性，它们是相对较短的多肽序列，由可变结构域的骨架区携带。可变结构域中的氨基酸残基通常按照Kabat等人专利技术的系统来编号。该系统由Kabat等人于1987年提出，参见美国国立卫生研究院、美国卫生及公共服务部“免疫重要性蛋白质的序列”(下文均以“Kabat等(见前)”表示)。除非特别指出，本说明书均采用该编号系统。Kabat残基表示法并不总是直接对应于氨基酸残基的线性编号。实际的线性氨基酸序列可能包含比严格的Kabat编号或者少一些或者额外多一些的氨基酸，对应于在基本可变结构域减少或者插入一个结构成分，该结构成分可以是骨架区或是CDR。对于一个给定的抗体，其残基的正确的Kabat编号可以通过对照具有“标准”的Kabat编号序列的另一抗体序列中同源残基来决定。按Kabat编号法，重链可变结构域的决定簇互补区位于31-35位残基(CDRH1)，50-65位残基(CDRH2)以及95-102位残基(CDRH3)。按照Kabat编号法，轻链可变结构域的决定簇互补区位于24-34位残基(CDRL1)，50-56位残基(CDRL2)以及89-97位残基(CDRL3)。CDR移植的(CDR-grafted)抗体的构建如欧洲专利申请EP-A-0239400中所述，其中公开了一种方法，包括通过定点诱变，采用长链寡核苷酸将小鼠单克隆抗体(Mab)的CDR移植到人类免疫球蛋白可变结构域的骨架区。通过CDR移植来人源化单克隆抗体的最早的工作是在识别合成抗原(如NP)的单克隆抗体上进行的。然而，Verhoeyen等人(科学，239，1534-1536，1988)和Riechmann等人(自然，332，323-324，1988)已经分别描述了通过CDR移植来人源化可以识别溶菌酶的小鼠单克隆抗体和可以识别人类T细胞上一种抗原的大鼠单克隆抗体的例子。Riechmann等人发现，单独转移CDR(如Kabat定义(Kabat等(见前)和Wu等，J.Exp.Med.，132，211-250，1970)不足以使CDR移植产物具备令人满意的抗原结合活性。人们发现许多骨架区的残基必须被改变后，才可以与供体骨架区的残基相对应。选择哪个骨架区的残基需要改变的推荐标准见国际专利申请WO90/07861中的论述。许多讨论CDR移植的抗体的综述已经发表，包括Vaughan等人(Nature Biotechnology，16，535-539，1998)。VEGF是一种同二聚体的糖蛋白，由两个结构类似于PDGF的分子量为23KD的亚基组成。它在血管发生(vasculogenesis)，即新的血管系统的建立过程中起着重要的发育学上的作用，它还参与血管生成(angiogenesis)，即在预先存在的血管的基础上形成新的血管的过程。血管生成包括毛细管内皮细胞由预先存在的血管中的增殖、迁移以及组织渗透的过程。除了在正常的生理学过程，诸如胚胎发育、滤泡生长(包括黄体形成)和创伤愈合中具有重要作用以外，血管生成还在许多病理条件下发生，包括炎症反应、牛皮癣、类风湿性关节炎以及肿瘤生长和转移(Folkman，J和Klagsbrun，M.，科学，235442-447，1987)。举例来说，普遍认为肿瘤的生长不会超过某一大小，除非它们通过血管生成而获得了充分的血液供应。VEGF与其它作为体内血管生成可能调控子的因子显著不同，它是内皮细胞特异性的血管生成的诱导因子。VEGF有5个不同的单体形式的同种异型体(isoform)存在，它们来自mRNA不同的剪接作用。这些同种异型体包含两个膜结合的形式(VEGF206和VEGF189)以及三个可溶的形式(VEGF165，VEGF121和VEGF145)。除了人类的胎盘以外，在所有的组织中VEGF165是丰度最高的同种异型体。VEGF的作用通过其与两个高亲和力的酪氨酸激酶受体的相互作用来介导，类fms(fms-like)的酪氨酸激酶受体(FLT-1或VEGFR-1，Shibuya M.等，Oncogene，5，519-524，1990)和KDR(或VEGFR-2，Terman等，Oncogene，6，1677-1683，1991)。KDR和FLT-1都是跨膜的受体，每个跨膜受体在细胞外配基结合区包含7个类免疫球蛋白的结构域，一个细胞内的酪氨酸激酶结构域和一个跨膜结构域。跨膜结构域起到的作用是，将受体锚定在表达该受体的细胞的细胞膜上。有几篇关于在肿瘤中VEGF及其受体在RNA和蛋白质两个水平上同时过表达的报道(Dvorak等，Curr.Top.Microbiol.Imunol.，237，97，1999)。当组织缺氧时(这在肿瘤中会经常发生)，VEGF表达水平上调，而且升高配基的浓度会诱导其受体的表达。这类研究的一些例子显示在人类肿瘤中升高的KDR表达，所述肿瘤包括乳腺癌(Brown等，Hum.Pathol.，26，86，1995)；结肠癌(Takahashi等，Cancer Res.，55，3964，1995)；肾癌(Takahashi等，BBRC257，855，1999)以及胃肠道腺癌(Brown等，Cancer Res.，53，4727，1993)。在最近的研究中，采用特异性识别结合于KDR的VEGF的抗体，在非小细胞肺癌中观察到VEGF/KDR血管生成途径的上调(Koukourakis等，Cancer Res.，60，3088，2000)。许多实验证据显示体内VEGF的活性和肿瘤血管生成的因果联系。Kim等人将抗VEGF中和的单克隆抗体注射到带有肿瘤的裸鼠中，显示肿瘤生长受到抑制(自然362，841，1993)。显性负效应的小鼠KDR的反转录病毒表达(FLK-1)也可抑制小鼠的肿瘤生长(Millauer等，Nature，367，576，1993)。相似地，反义VEGF(Cheng等，PNAS，93，8502，1996)，抗FLK-1的抗体(Witte等，CancerMetast.Rev.，17，155，1998)和可溶的FLT-1的表达(Goldman等，PNAS，95，8795，1998)均可以抑制模型小鼠中肿瘤的生长。几个实验证据提示VEGF涉及血管生成的生物学效果主要是通过KDR受体来介导的(综述见Larrivee和Karsan，Int.J.Mol.Med.，5，447，2000)。由VEGF介导的单独KDR的激活(仅在表达一种VEGFR类型的细胞株中)显示足以导致细胞的增殖和迁移(Waltenburger等，J.Biol.Chem.，269，26988，199本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对人类ＫＤＲ具有特异性的抗体分子，它包含一条重链，其中可变结构域包含一个ＣＤＲ，其具有如图１中Ｈ１（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１）所示的ＣＤＲＨ１，如图１中Ｈ２（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２）所示的ＣＤＲＨ２或如图１中Ｈ３（ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３）所示的ＣＤＲＨ３的序列。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：AG波普莱维尔，SP蒂克勒，K津克维克佩奥蒂，RK莫里森，
申请(专利权)人：细胞技术研究及开发有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]