当前位置: 首页 > 专利查询>胡敬群专利>正文

中国汉族人血管内皮生长因子基因重组、表达、纯化及其医学应用制造技术

技术编号:2590555 阅读:171 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种表达纯化人VEGF基因和重组VEGF的方法,其特征在于:包括以下步骤:    (1)克隆人VEGF的基因,用反转录PCR法扩增VEGF的基因;    (2)将上述扩增的VEGF基因与克隆载体连接,构建人VEGF克隆质粒;    (3)将上述人VEGF克隆质粒亚克隆进表达载体,再将连接后的质粒DNA转染大肠杆菌;    (4)表达人VEGF    a、将上述带有人VEGF基因的表达载体的大肠杆菌铺含有抗生素的LB培养基板,将板放置37℃温箱过夜培养;    b、从板上选一个菌落,接种LB培养基培养瓶内,在37℃摇箱内培养,测菌液A↓[650]OD值为0.6-0.8时停止培养;    c、向菌液内加IPTG,使其终浓度为0.5mM,继续培养6-8小时;    d、收获细菌;    (5)纯化人VEGF蛋白。    a、将上述细菌沉淀用pH8.0的磷酸盐缓冲液洗一次,离心后,再用pH8.0的磷酸盐缓冲液悬浮沉淀;    b、超声裂解细菌,离心,将沉淀加8M尿素悬浮,离心,取上清液;    c、纯化人用离子交换和Ni-NTG-His柱亲和层析进行纯化。(*该技术在2023年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:胡敬群杨建国
申请(专利权)人:胡敬群蔡建强赵平
类型:发明
国别省市:

相关技术
    暂无相关专利
网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1
相关领域技术
  • 暂无相关专利