一种表达纯化人VEGF基因和重组VEGF的方法,其特征在于:包括以下步骤: (1)克隆人VEGF的基因,用反转录PCR法扩增VEGF的基因; (2)将上述扩增的VEGF基因与克隆载体连接,构建人VEGF克隆质粒; (3)将上述人VEGF克隆质粒亚克隆进表达载体,再将连接后的质粒DNA转染大肠杆菌; (4)表达人VEGF a、将上述带有人VEGF基因的表达载体的大肠杆菌铺含有抗生素的LB培养基板,将板放置37℃温箱过夜培养; b、从板上选一个菌落,接种LB培养基培养瓶内,在37℃摇箱内培养,测菌液A↓[650]OD值为0.6-0.8时停止培养; c、向菌液内加IPTG,使其终浓度为0.5mM,继续培养6-8小时; d、收获细菌; (5)纯化人VEGF蛋白。 a、将上述细菌沉淀用pH8.0的磷酸盐缓冲液洗一次,离心后,再用pH8.0的磷酸盐缓冲液悬浮沉淀; b、超声裂解细菌,离心,将沉淀加8M尿素悬浮,离心,取上清液; c、纯化人用离子交换和Ni-NTG-His柱亲和层析进行纯化。(*该技术在2023年保护过期,可自由使用*)
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:胡敬群,杨建国,
申请(专利权)人:胡敬群,蔡建强,赵平,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。