试样分析用试剂、试样分析用试剂盒及试样分析方法技术

本发明专利技术涉及一种测定试样中的嗜碱性细胞和／或有核红细胞的试剂，至少含通式（Ⅰ）或（Ⅱ）所示荧光色素的一种荧光色素。还涉及一种测定嗜碱性细胞和／或有核红细胞的试剂盒及其方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于分析从生物体采集的试样中的血细胞的。
技术介绍
在临床检查领域，试样中的血细胞成份分析对于诊断受检者循环器官等的各种疾病非常有用。根据疾病的不同，有时特定的血细胞数量会增加或减少、通常不存在的血细胞会出现在末梢血液中。近年来，应用流式细胞技术的各种自动血细胞计数装置面市。人们用该装置在一般检查室进行血细胞的分类和计数。使用这些自动血细胞计数装置可以自动地对试样中的血细胞进行分类和计数。要进行白细胞的分类和计数，首先要溶解血液试样中的红细胞。只要将所得试样导入检测器，检测出电阻信号即可将白细胞分成3类。或者可以用以下方法将白细胞分成淋巴细胞、单核细胞、中性细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞5类。首先溶解血样中的红细胞，用荧光色素对所得试样中的血细胞染色。然后向血细胞照射励起光，检测血细胞发出的荧光信号和散射光信号。分析这些信号即可将白细胞分成5类。嗜碱性细胞通常比较少，因此也可以在一次测定中不将白细胞分为5类，而只测定嗜碱性细胞。根据嗜碱性细胞在酸性条件下比其他白细胞更难被破损的特性，可以对血样进行处理使其成为嗜碱性细胞测定专用，再对嗜碱性细胞进行测定(参照专利公开平成6-8817号公报)。将此结果与其他方法得到的白细胞分类结果组合起来，即能更正确地将白细胞分为5类。在白细胞测定中常常成为问题的是有核红细胞的出现。由于存在有核红细胞，即使对红细胞进行溶解处理也会有核残留。残留的核在上述测定方法中会发出近似淋巴细胞的信号，从而使白细胞计数时产生加法误差。为排除此影响，比如可以进行有核红细胞测定专用处理，测定有核红细胞数(专利公开平成10-339729号公报)，再从用其他方法获得的白细胞数中减去有核红细胞数。用此方法可以得到正确的白细胞数。但是，为了得到正确的白细胞分类而增加特定的血细胞专用处理，会很费事，装置也会复杂化或大型化。而且，多用特定的血细胞测定专用试剂，会增加血液检查成本。出于这种观点，最好尽可能减少特定的血细胞专用处理。嗜碱性细胞和有核红细胞都可以通过在酸性条件下处理血样来测定，因此，如果在酸性条件下处理血样，则有可能嗜碱性细胞和有核红细胞二者一次即能测定。比如，专利2002-148261号公报上记载有嗜碱性细胞和红芽球(有核红细胞)测定方法，即将含有能使白细胞和异常细胞易于染色的红细胞溶解剂和表面活性剂的水溶液与试样混合，加入含荧光色素的染色剂进行染色，用流式细胞仪测定荧光强度和散射光强度等。然而，用上述这种老方法在白细胞数量多的标本中，有时会出现嗜碱性细胞和嗜碱性细胞以外的白细胞不易分离的问题。
技术实现思路
本专利技术的范围只由后附权利要求书所规定，在任何程度上都不受这一节
技术实现思路
的陈述所限。本专利技术的第一部分为测定嗜碱性细胞和/或有核红细胞的试样分析用试剂，至少含选自以下通式所示荧光色素的一种荧光色素的试样分析用试剂。通式(I)的荧光色素化1(式中，R1和R2为相同或不同的烷基；化2为 或 但是当化3 为 时则化4为 当化5为 时则化6为 或 R3、R4、R5和R6相同或不同，为氢原子或烷基；X-为阴离子) 通式(II)的荧光色素化7(式中，R7和R8为相同或不同、也可含酸基的烷基；化8为 或化9为 或 R9、R10、R11及び R12为相同或不同的氢原子或酸性基，但是R7～R12中的某一个含酸性基；可能存在于R7～R12的酸性基也可形成盐，但是R7～R12可能存在的酸性基中总有一个是放出了质子的游离基。)本专利技术第二部分涉及测定嗜碱性细胞和/或有核红细胞的试剂盒，它包含含有溶解红细胞并给白细胞细胞膜以荧光色素能透射的破损的表面活性剂的溶液和含有选自上述通式(I)和通式(II)荧光色素中至少一种荧光色素的溶液。本专利技术第三部分涉及一种试样分析方法，其包括，用上述通式(I)和通式(II)荧光色素中的至少一种对试样中的血细胞染色的步骤；激光照射上述经染色的血细胞、获取散射光信息和荧光信息的步骤；以及根据上述散射光信息和荧光信息区分和/或计数上述试样中嗜碱性细胞和/或有核红细胞的步骤。附图说明图1为用本专利技术试样分析用试剂分析试样时使用的散点图的模式图。图2为用本专利技术试样分析用试剂分析试样时使用的散点图(实施例1)。图3为用本专利技术试样分析用试剂分析试样时使用的散点图(实施例1)。图4为用本专利技术试样分析用试剂分析试样时使用的散点图(实施例2)。具体实施例方式下面参照附图，详细说明本专利技术的优选实施例本专利技术可以测定的嗜碱性细胞是被碱性色素染色的含大型酸性颗粒的白细胞的一种。有核红细胞也俗称为红芽球，含前红芽球、嗜碱性红芽球、多染性红芽球和正染性红芽球。在本说明书中，所谓“试样”指，采自哺乳动物优选人的血液、骨髓液、尿液和用单采血液成份技术采集的试样等体液试样。本专利技术试剂所含荧光色素为上述通式(I)和/或(II)所示物质。本说明书中，通式(I)和(II)中的“烷基”可以是直链或分链。烷基的碳原子数一般为1～20，最好为1～10，但从荧光色素的水溶性考虑，碳原子数1～6更好。作为理想的该烷基可以举例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和已基等。作为通式(I)中的阴离子X-，有诸如F-、Cl-、Br-及I-等卤负离子、CF3SO3-、BF4-、ClO4-等。在本说明书中，通式(II)可能存在的“酸性基”包括能释放质子的基和能释放质子的基释放了质子的游离酸基两种基。能释放质子的基有羧基、磺酸基和磷酸基，其中以羧基或磺酸基为佳。上述酸性基也可形成盐。这种盐包括钠盐、钾盐等碱性金属盐和铵盐、三乙铵盐等烷基铵盐等。其中比较理想的盐是碱性金属盐或烷基铵盐，更好的是钠盐或三乙铵盐。上述通式(I)、(II)的荧光色素可以使用一种或二种以上。上述荧光色素比如可以购买株式会社林原生物化学研究所的产品。本专利技术的试剂中的色素浓度可以根据色素种类适当选择，一般为0.01～100mg/L、比较适宜的为0.1～10mg/L、更理想的是0.3～6.0mg/L。本专利技术的试样分析用试剂所含上述通式(I)和通式(II)的荧光色素对嗜酸性细胞和中性细胞的亲和性比对嗜碱性细胞的亲和性更强，因此，对嗜酸性细胞和中性细胞的染色比嗜碱性细胞强。根据经这些荧光色素染色的细胞发出的荧光差异，可以明确区分粒细胞中的嗜碱性细胞。嗜碱性细胞也可根据细胞的大小和细胞内小器官的构造等不同明确与淋巴细胞和单核细胞区分开。用本专利技术的试样分析用试剂对血细胞染色时，最好使妨碍有核红细胞和白细胞(淋巴细胞、单核细胞、中性细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞)测定的红细胞溶血，破损有核红细胞和白细胞的细胞膜。通过这种破损处理，荧光色素对有核红细胞和白细胞的透射性更高，可以更有效地对血细胞染色。一般来说，以大约150mOsm/kg以下的渗透压即可使红细胞的细胞膜产生微孔。红细胞内部的血红蛋白通过该微孔溶出，则红细胞在光学上变为透明(溶血)。在光学上透明的红细胞实际上不会成为使用流式细胞技术进行测定的障碍。红细胞的溶血比较适用低渗透压条件和低pH条件。这两个条件都满足的渗透压是20mOsm/kg～150mOsm/kg。本专利技术的试剂的pH值以2.0～4.5为宜，2.0～3.5更好。pH值只要在此范围内，嗜碱性细胞的颗粒就会稳定，而且，能够在不对白细胞和有核红细胞等产生过度影响本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定试样中的嗜碱性细胞和／或有核红细胞的试剂，至少含选自以下通式所示荧光色素的一种荧光色素的试剂；通式（Ⅰ）：＊＊＊（Ⅰ）式中，Ｒ↑［１］和Ｒ↑［２］为相同或不同的烷基；＊＊＊但是当＊＊＊则＊＊＊当＊＊＊则＊＊＊Ｒ↑［３］、Ｒ↑［４］、Ｒ↑［５］和Ｒ↑［６］为相同或不同的氢原子或烷基；Ｘ↑［－］为阴离子；和通式（Ⅱ）：＊＊＊（Ⅱ）式中，Ｒ↑［７］和Ｒ↑［８］为相同或不同、也可含酸基的烷基；＊＊＊Ｒ↑［９］、Ｒ↑［１０］、Ｒ↑［１１］及びＲ↑［１２］为相同或不同的氢原子或酸性基，但是Ｒ↑［７］～Ｒ↑［１２］中的某一个含酸性基；可能存在于Ｒ↑［７］～Ｒ↑［１２］的酸性基也可形成盐，但是Ｒ↑［７］～Ｒ↑［１２］可能存在的酸性基中总有一个是放出了质子的游离基。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：水上利洋，竹下浩生，成川隆也，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]