标记多肽、修饰多肽、这些多肽的制造方法、含这些多肽的试剂及目标物质的测定方法技术

本发明专利技术旨在提供使对于多肽以高效率结合标记变得可能的手段。作为含分子量1100以上的聚乙二醇链的接头使用，通过经所述接头将多肽中的谷氨酰胺残基和标记结合，解决所述的课题。题。题。

【技术实现步骤摘要】
标记多肽、修饰多肽、这些多肽的制造方法、含这些多肽的试剂及目标物质的测定方法


[0001]本专利技术涉及标记多肽及其制造方法。本专利技术涉及修饰多肽及其制造方法。本专利技术涉及含标记多肽或修饰多肽的试剂。本专利技术涉及目标物质的测定方法。

技术介绍

[0002]转谷氨酰胺酶(TG)是以多肽中的谷氨酰胺残基作为底物，催化在所述谷氨酰胺残基的羧酰胺侧链和伯胺的氨基之间形成酰胺键的反应的酶。更具体而言，在TG催化的反应中，处于多肽中的谷氨酰胺残基的羧酰胺侧链的氨基和伯胺缩合而所述伯胺所具有的取代基转移到谷氨酰胺残基，生成氨。近年知晓，利用TG，使含谷氨酰胺残基的多肽结合如药物或标记一样的功能性物质的技术。
[0003]例如，在专利文献1中记载了，使向重链的C末端附加含谷氨酰胺残基的肽标签的抗体和与具有氨基的接头连接的抗癌药在TG的存在下反应而得到结合有抗癌药的抗体。在利用TG的多肽向功能性物质的结合中，一般使用两端具有官能团的二官能性接头。作为二官能性接头的官能团，选择作为TG催化的反应中的胺供体的氨基(
‑
NH2)和用于使功能性物质与接头共价键合的任意的官能团。多肽中的谷氨酰胺残基和功能性物质经这样的接头结合。
[0004]【现有技术文献】
[0005]【专利文献】
[0006]【专利文献1】美国专利申请第2018/0037921号说明书
[0007]【专利技术的概要】
[0008]【专利技术要解决的课题】
[0009]本专利技术人尝试了使用记载在先前文献1的接头，使多肽中的谷氨酰胺残基结合功能性物质，但不必然以充分的效率发生结合。从而，本专利技术旨在提供使对于多肽以高效率结合标记变得可能的手段。
[0010]【用于解决课题的手段】
[0011]本专利技术人发现，通过作为二官能性接头而使用具有巯基(
‑
SH)及氨基的聚乙二醇(PEG)链之中PEG链部分的分子量1100以上的接头，可在多肽中的谷氨酰胺残基有效结合所述接头及标记，从而完成本专利技术。
[0012]本专利技术提供含具有下式(I)所示的侧链的谷氨酰胺残基的标记多肽。
[0013]【化1】
[0014][0015](式中，(C)是谷氨酰胺残基的α碳，X是直链亚烷基，Y是PEG链，Z是标记，L是间隔物
或连接键，PEG链的分子量是1100以上。)
[0016]本专利技术提供含具有下式(II)所示的侧链的谷氨酰胺残基的修饰多肽。
[0017]【化2】
[0018][0019](式中，(C)是谷氨酰胺残基的α碳，X是直链亚烷基，Y是PEG链，PEG链的分子量是1100以上。)
[0020]本专利技术提供含上述的标记多肽或修饰多肽的试剂。本专利技术提供目标物质的测定方法，其包括形成上述的标记多肽和目标物质的免疫复合体的工序，检测由免疫复合体中所含的标记发生的信号的工序。
[0021]本专利技术提供修饰多肽的制造方法，其包括：通过在转谷氨酰胺酶的存在下，使含谷氨酰胺残基的多肽和下式(VI)所示的接头接触，在谷氨酰胺残基的羧酰胺侧链结合接头的工序，取得由羧酰胺侧链和接头的结合生成的修饰多肽的工序，在修饰多肽中上述谷氨酰胺残基的侧链由上式(II)所示。
[0022]NH2‑
X
‑
Y
‑
SH(VI)
[0023](式中，X是直链亚烷基，Y是PEG链，PEG链的分子量是1100以上。)
[0024]本专利技术提供标记多肽的制造方法，包括：通过在转谷氨酰胺酶的存在下，使含谷氨酰胺残基的多肽和上式(IV)所示的接头接触，向谷氨酰胺残基的羧酰胺侧链结合接头的工序，取得由羧酰胺侧链和接头的结合生成的修饰多肽的工序，通过使修饰多肽和具有马来酰亚胺基的标记接触，在与修饰多肽结合的接头结合标记的工序，取得由修饰多肽和标记的结合生成的标记多肽的工序，在标记多肽中谷氨酰胺残基的侧链由上式(I)所示。
[0025]【专利技术的效果】
[0026]由本专利技术，通过使用具有氨基及巯基的接头，使以高的效率向多肽结合标记变得可能。
[0027]【附图的简单的说明】
[0028]【图1A】是显示本实施方式的试剂的一例的图。
[0029]【图1B】是显示本实施方式的试剂盒的一例的图。
[0030]【图2A】是显示SH
‑
PEG
‑
NH2接头(2K)(Sigma
‑
Aldrich公司)的由Infusion法的质谱分析(Infusion MS)的结果的图。
[0031]【图2B】是显示不同批的SH
‑
PEG
‑
NH2接头(2K)(Sigma
‑
Aldrich公司)的Infusion MS的结果的图。
[0032]【图2C】是显示SH
‑
PEG
‑
NH2接头(2K)(Biopharma PEG Scientific Inc公司)的Infusion MS的结果的图。
[0033]【图2D】是显示SH
‑
PEG
‑
NH2接头(2K)(Creative PEGWorks公司)的Infusion MS的结果的图。
[0034]【图3】是显示csF001
‑
5Fab
‑
Q标签和SH
‑
PEG
‑
NH2接头(2K)(Sigma
‑
Aldrich公司)的由TG的反应后的生成物的尺寸排除柱层析(SEC)分析的结果的图。
[0035]【图4】是显示在不同的pH的csF001
‑
5Fab
‑
Q标签和SH
‑
PEG
‑
NH2接头(2K)(Sigma
‑
Aldrich公司)的由TG的反应后的生成物的SEC分析的结果的图。
[0036]【图5】是显示csF028
‑
22Fab
‑
Q标签和SH
‑
PEG
‑
NH2接头(2K)(Sigma
‑
Aldrich公司)的由TG的反应后的生成物的SEC分析的结果的图。
[0037]【图6】是显示csF001
‑
5Fab
‑
Q标签和SH
‑
PEG
‑
NH2接头(3.5K)(Sigma
‑
Aldrich公司)的由TG的反应后的生成物的SEC分析的结果的图。
[0038]【图7】是显示自csF001
‑
5Fab
‑
Q标签的SH
‑
PEG(2K)
‑
Fab和马来酰亚胺修饰ALP的偶联反应液的由SEC及非还原SDS
‑
PAGE的分析本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.标记多肽，其含具有下式(I)所示的侧链的谷氨酰胺残基：【化1】式中，(C)是谷氨酰胺残基的α碳，X是直链亚烷基，Y是聚乙二醇链，Z是标记，L是间隔物或连接键，所述聚乙二醇链的分子量是1100以上。2.权利要求1所述的标记多肽，其为抗体和含具有所述侧链的谷氨酰胺残基的肽标签的融合多肽。3.修饰多肽，其含具有下式(II)所示的侧链的谷氨酰胺残基：【化2】式中，(C)是所述谷氨酰胺残基的α碳，X是直链亚烷基，Y是聚乙二醇链，所述聚乙二醇链的分子量是1100以上。4.权利要求3所述的修饰多肽，其为抗体和含具有所述侧链的谷氨酰胺残基的肽标签的融合多肽。5.权利要求1～4之任一项所述的多肽，其中所述聚乙二醇链的重量平均分子量是1300以上。6.权利要求1～4之任一项所述的多肽，其中所述聚乙二醇链的重量平均分子量是1700以上。7.权利要求1～4之任一项所述的多肽，其中所述聚乙二醇链由下式(III)所示：
‑
(OCH2CH2)
n
‑
或
‑
(CH2CH2O)
n
‑
(III)式中，n是25以上的整数。8.权利要求7所述的多肽，其中所述n是39以上的整数。9.权利要求1～4之任一项所述的多肽，其中所述直链亚烷基的碳原子数是2以上10以下。10.权利要求1或2所述的标记多肽，其中所述标记是选自下列的至少1种：生物素类、
酶、荧光染料、荧光蛋白质及半抗原。11.权利要求2或4所述的多肽，其中所述抗体是：Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fd'、Fv、scFv、dAb、rIgG、轻链、重链抗体、重链抗体的可变区域、双抗体或三链抗体。12.试剂，其含权利要求1～4之任一项所述的多肽。13.修饰多肽的制造方法，其包括：通过在转谷氨酰胺酶的存在下使含谷氨酰胺残基的多肽和下式(VI)所示的接头接触，在所述谷氨酰胺残基的羧酰胺侧链结合所述接头的工序：NH2‑
X
‑
Y
‑
SH(VI)式中，X是直链亚烷基，Y是聚乙二醇链，所述聚乙二醇链的分子量是1100以上，及取得由所述羧酰胺侧链和所述接头的结合生成的修饰多肽的工序，其中在所述修饰多肽中，所述谷氨酰胺残基的侧链由下式(II)所示：【化3】式中，(C)是所述谷氨酰胺残基的α碳，X是直链亚烷基，Y是聚乙二醇链，所述聚乙二醇链的分子量是1100以上。14.标记多肽的制造方法，其包括：通过在转谷氨酰胺酶的存在下使含谷氨酰胺残基的多肽和下式(VI)所示的接头接触，在所述谷氨酰胺残基的羧酰胺侧链结合所述接头的工序：NH2‑
X
‑
Y
‑
SH(VI)式中，X是直链亚烷基，Y是聚乙二醇链，所述聚乙二醇链的分子量是1100以上，取得由所述羧酰胺侧链和所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：佐藤晴哉，内藤克纪，片冈由起子，西川洋一，冈野大毅，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：