一种双肽受体激动剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种双肽受体激动剂及其制备方法与应用，属于基因工程领域，特别是蛋白或多肽类药物的制备，具体涉及一种双靶点受体（

【技术实现步骤摘要】
一种双肽受体激动剂及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域，特别是蛋白或多肽类药物的制备，具体涉及一种双肽受体激动剂及其制备方法与应用
。

技术介绍

[0002]2型糖尿病（
type 2 diabetes mellitus
，
T2DM
）已成为一种世界流行性疾病
。
胰高血糖素样肽
‑1（
glucagon
‑
like peptide
‑
1 receptor
，
GLP
‑1）能够促进合成与分泌胰岛素，抑制胰高血糖素的分泌，因其良好的降糖效果和体重减轻作用，成为
T2DM
治疗的重要选择
(Baggio
等
, Gastroenterology, 2007, 132(6): 2131
‑
57)。
随着各类胰高血糖素样肽
‑1类似物（
glucagon
‑
like peptide
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种双肽受体激动剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（
a
）构建融合
icSAT
标签与
SpyTag
肽或
SpyCatcher
肽的目标多肽的融合蛋白表达载体并表达融合蛋白；（
b
）混合两种融合蛋白，自连接形成双融合蛋白；（
c
）用
icSAT
蛋白纯化方法
、
两步标准柱纯化方法纯化获得双肽受体激动剂
。2.
根据权利要求1所述的一种双肽受体激动剂的制备方法，其特征在于，步骤（
a
）中，所述目标多肽为胰高血糖素样肽
‑1和
/
或葡萄糖依赖性促胰岛素多肽；所述胰高血糖素样肽
‑1和
/
或葡萄糖依赖性促胰岛素多肽与
SpyTag
肽或
SpyCatcher
肽通过
ELP
肽连接；
SpyCatcher
肽与
SpyTag
肽可形成异肽链，所述
SpyCatcher
肽包括选自
SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6
任一所示氨基酸序列的多肽，所述
SpyTag
肽包括选自
SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9
任一所示氨基酸序列的多肽；所述
ELP
肽的特征满足如下条件之一：（
a
）
Val
‑
Pro
‑
Gly
‑
Xaa
‑
Gly
的重复序列；（
b
）
Val
‑
Pro
‑
Gly
‑
Xaa
‑
Gly
的重复序列，
Val
‑
Pro
‑
Gly
‑
Xaa
‑
Gly
重复序列的重复数为
10~30
次；（
c
）
Val
‑
Pro
‑
Gly
‑
Xaa
‑
Gly
的重复序列，其中
Xaa
为
Val
和
Glu
；（
d
）
Val
‑
Pro
‑
Gly
‑
Xaa
‑
Gly
的重复序列，其中
Xaa
为
Val
和
Glu
，
Xaa
氨基酸
Val
和
Glu
的比例
3:1~5:1
；（
e
）
ELP
肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示
。3.
根据权利要求1所述的一种双肽受体激动剂的制备方法，其特征在于，步骤（
a
）中，所述融合蛋白的制备方法，具体包括如下步骤：将纯化标签
、
目标多肽和
ELP
肽与
SpyTag
肽或
SpyCatcher
肽的基因序列依次连接，形成融合蛋白的基因，将所述融合蛋白的基因构建表达载体并导入宿主细胞，得到工程菌；培养所述工程菌表达所述融合蛋白，然后裂解工程菌，捕获得到融合蛋白；所述捕获得到融合蛋白，包括将工程菌裂解后离心取上清，得到融合蛋白；所述纯化标签由自组装肽和切割标签组成；所述自组装肽的基因序列与切割标签的基因序列之间通过接头连接；所述接头为
PT
型接头；所述
PT
型接头氨基酸序列如
SEQ ID NO: 10
所示氨基酸序列；所述自组装肽为盐度诱导自组装肽，所述盐度诱导自组装肽为
β
折叠短肽；所述
β
折叠短肽氨基酸序列如
SEQ ID NO: 11
所示；所述切割标签为化学切割位点
、
酶法切割位点或自切割位点，所述自切割位点为内含肽，所述内含肽为
Mtu Δ
I
‑
CM (WT)
内含肽或
Mtu Δ
I
...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓锋，林章凛，郑蕴纯，劳子莎，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：