本发明专利技术提供一种可以将试样中有核红细胞和嗜碱性细胞与其他白细胞更明确区分并计数的试样测定用试剂。这种试样测定用试剂包含：碳原子数为４～８的醇和由通式（Ⅰ）化合物和通式（Ⅱ）化合物构成的群组中的至少一种荧光色素。本发明专利技术还提供一种可以将试样中有核红细胞和嗜碱性细胞与其他白细胞更明确区分并计数的试样测定用试剂盒及试样测定方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于分析采自生物的试样中所含血细胞的分析试剂、分析试剂盒及其分析方法。
技术介绍
在临床检查领域，试样中的血细胞成份分析对于诊断受检者循环器官等的各种疾病非常有用。根据疾病的不同，有时特定的血细胞数量会增加或减少、通常不存在的血细胞会出现在末梢血液中。 近年来，应用流式细胞技术原理的各种自动血细胞计数装置面市。人们用该装置在一般检查室进行血细胞的分类和计数。使用这些自动血细胞计数装置可以自动地对试样中的血细胞进行分类和计数。 要进行白细胞的分类和计数，首先要溶解血样中的红细胞，制备测定用试样。只要将所制备的测定用试样导入检测器、检测出电阻信号即可将白细胞分成3类。白细胞一般有淋巴细胞、单核细胞、中性细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞等5类。首先要进行红细胞溶解处理，再荧光染色，然后向经荧光染色的血细胞照射励起光，检测、分析该染色血细胞发出的荧光信号和散射光信号，即可将白细胞分成5类。嗜碱性细胞通常比较少，因此与其一次将白细胞分为5类，不如采用以下方法更能准确地将白细胞分为5类。根据该方法，利用嗜碱性细胞在酸性条件下比其他白细胞更难被破损的特性，对血样进行处理使其成为嗜碱性细胞测定专用，再测定嗜碱性细胞数量(参照美国专利第5,518,928号)。将测定嗜碱性细胞数所得结果与其他方法得到的白细胞分类结果组合起来，即能更正确地将白细胞分为5类。 在白细胞测定中常常成为问题的是有核红细胞(nucleated red blood cellNRBC)的出现。由于NRBC有核，即使对红细胞进行溶解处理也会有核残留。NRBC在上述测定中会发出近似淋巴细胞的信号，从而使白细胞计数时产生加法误差。为排除此影响，而进行NRBC测定专用处理，测定NRBC数(参照美国专利第6,664,110号)，再从用其他方法获得的白细胞数中减去NRBC数，即可得到正确的白细胞数。 但是，为了得到正确的白细胞分类而增加特定的血细胞专用处理，不仅费事，装置也会复杂化或大型化。而且，多用特定的血细胞测定专用试剂，会增加血液检查成本。出于这种观点，最好尽可能减少特定的血细胞专用处理。 嗜碱性细胞和有核红细胞都可以通过在酸性条件下处理血样来测定，因此，如果在酸性条件下处理血样，嗜碱性细胞和有核红细胞就有可能一次同时测定。作为这种尝试之一，比如，据日本已公开专利申请公告第2002-148261号上记载，可以将含有能使白细胞和异常细胞易于染色的红细胞溶解剂和表面活性剂的水溶液与试样混合，加入含荧光色素的染色剂进行染色，用流式细胞仪测定荧光强度和散射光强度，测定嗜碱性细胞和红芽细胞(有核红细胞)。 然而，用上述这种老方法在白细胞数量多的标本中，有时会出现嗜碱性细胞和嗜碱性细胞以外的白细胞不易分离的问题。
技术实现思路
本专利技术的范围只由后附权利要求书所规定，在任何程度上都不受这一节
技术实现思路
的陈述所限。 本专利技术的目的是提供一种可以将试样中有核红细胞和嗜碱性细胞与其他白细胞更明确区分开进行计数的试样测定用试剂和试样测定方法。 即，本专利技术提供一种用于测定嗜碱性细胞和/或有核红细胞的试样分析用试剂，其中所述试样分析用试剂包含 (a)碳原子数为4～8的醇； (b)选自通式(I)化合物和通式(II)化合物中至少一种的荧光色素； 通式(I) 式中，R1和R2为烷基，R1和R2相同或不同； R3、R4、R5和R6为氢原子或烷基，彼此相同或不同； X-为阴离子； 通式(II) 式中，R7和R8为也可含酸基的烷基，彼此相同或不同； R9、R10、R11及R12为氢原子或酸性基，彼此相同或不同；但是R7～R12中至少一个含酸性基； R7～R12中酸性基可成盐，且R7～R12中的酸性基中至少一个基团释放质子。 其中所述醇选自丁醇、戊醇、庚醇、异丁醇、异戊醇、2-苯基乙醇、2-苯氧基乙醇。 其中所述酸性基是羧基或磺酸基。其中所述可成盐的酸性基的抗衡离子是碱性金属离子或烷基铵离子。 所述的试样分析用试剂，还包含用于红细胞溶血及破坏白细胞细胞膜以透射荧光色素的表面活性剂。其中所述表面活性剂为阳离子型表面活性剂。所述阳离子型表面活性剂为季铵盐型或吡啶鎓盐型。 所述试剂的pH值为2.0～4.5。 其中所述试剂中还含有芳香族有机酸。所述芳香族有机酸选自水杨酸、水杨酸盐、酞酸和酞酸盐。 本专利技术进一步提供一种测定嗜碱性细胞和/或有核红细胞的试样分析用试剂盒，包含 含有溶解红细胞并破坏白细胞细胞膜以透射荧光色素的表面活性剂和碳原子数为4～8的醇的第一溶液； 含有选自权利要求1所述通式(I)化合物和通式(II)化合物中至少一种的荧光色素的第二溶液。 本专利技术同时提供一种试样分析方法，其包括以下步骤 用碳原子数为4～8的醇和选自权利要求1所述通式(I)化合物和通式(II)化合物中至少一种的荧光色素对试样中的血细胞染色； 激光照射上述经染色的血细胞、获取散射光信息和荧光信息；以及 根据上述散射光信息和上述荧光信息对上述试样中嗜碱性细胞和/或有核红细胞计数。 附图说明 图1为用本专利技术一个实施例的试样分析用试剂分析试样所得散点图的模式图。 图2为用实施例1的试样分析用试剂分析试样所得散点图。 图3为用实施例1的试样分析用试剂分析试样所得散点图。 图4为用实施例2的试样分析用试剂分析试样所得散点图。 图5为用实施例2的试样分析用试剂分析试样所得散点图。 具体实施例方式 本申请的专利技术者们经过反复锐意研究发现，使用不仅含特定的荧光色素、同时还含全碳原子数4～8的醇的试样分析用试剂，可以将嗜碱性细胞明确从嗜碱性细胞之外的白细胞区分出来。 本专利技术一个实施例的试样分析用试剂提供含以下成份的试样分析用试剂(a)全碳原子数为4～8的醇；(b)由以下通式(I)化合物和通式(II)化合物构成的群组中的至少一种荧光色素。 通式(I) (式中，R1和R2为烷基，R1和R2相同或不同； R3、R4、R5和R6为氢原子或烷基，彼此相同或不同； X-为阴离子) 通式(II) (式中，R7和R8为也可含酸基的烷基，彼此相同或不同； R9、R10、R11及びR12为氢原子或酸性基，彼此相同或不同；但是R7～R12中的至少一个含酸性基； 存在于R7～R12的酸性基也可形成盐，但是R7～R12中的酸性基中至少一个是放出了质子的基。 通过使用此试样分析用试剂，可以明确地从其他血细胞中区分有核红细胞和嗜碱性细胞，并对其计数。这样就可以更准确地检查和诊断疾病。用此试样分析用试剂测定可以一次即对有核红细胞和嗜碱性细胞计数，但是根据检查目的不同，有时仅测定有核红细胞和嗜碱性细胞之一即可。在这种情况下，也可以通过使用试样分析用试剂只对有核红细胞和嗜碱性细胞之一进行测定。 用试样分析用试剂可以测定的嗜碱性细胞是白细胞的一种，含有被碱性色素染色的大型酸性颗粒。有核红细胞也俗称为成红细胞(erythroblast)，含前成红细胞(proerythroblast)、嗜碱性成红细胞(basophilic erythrob本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于测定嗜碱性细胞和／或有核红细胞的试样分析用试剂，其中所述试样分析用试剂包含： （ａ）碳原子数为４～８的醇； （ｂ）选自通式（Ⅰ）化合物和通式（Ⅱ）化合物中至少一种的荧光色素； 通式（Ⅰ） ＊＊＊ （Ⅰ） 式中，Ｒ↑［１］和Ｒ↑［２］为烷基，Ｒ↑［１］和Ｒ↑［２］相同或不同； ＊＊＊ Ｒ↑［３］、Ｒ↑［４］、Ｒ↑［５］和Ｒ↑［６］为氢原子或烷基，彼此相同或不同； Ｘ↑［－］为阴离子； 通式（Ⅱ） ＊＊＊ （Ⅱ） 式中，Ｒ↑［７］和Ｒ↑［８］为也可含酸基的烷基，彼此相同或不同； ＊＊＊ Ｒ↑［９］、Ｒ↑［１０］、Ｒ↑［１１］及Ｒ↑［１２］为氢原子或酸性基，彼此相同或不同；但是Ｒ↑［７］～Ｒ↑［１２］中至少一个含酸性基； Ｒ↑［７］～Ｒ↑［１２］中酸性基可成盐，且Ｒ↑［７］～Ｒ↑［１２］中的酸性基中至少一个基团释放质子。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：水上利洋，竹下浩生，成川隆也，
申请(专利权)人：希森美康株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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