本发明专利技术公开了一种检测高脂血症易感性的试剂盒。该试剂盒包括同时检测ＣＥＴＰ基因ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中第１４６位ＳＮＰ位点、ＡＰＯＢ基因ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２中第１５６位ＳＮＰ位点和ＬＰＬ基因ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３中第１１８位ＳＮＰ位点的特异性引物对及特异性荧光探针、用于荧光定量ＰＣＲ检测的常规组件等。本发明专利技术的试剂盒通过同时检测分析个体的ＣＥＴＰ基因、ＡＰＯＢ基因和ＬＰＬ基因上ＳＮＰｓ位点基因携带型来预测个体对高脂血症的易感性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种疾病易感性检测用的试剂盒，尤其是一种检测高脂血症易感性的试剂盒，通过同时检 测血浆胆固醇酯转移蛋白基因(cholesteryl ester transfer protein, plasraa， CETP)、载脂蛋白B基 因(apolipoprotein B， APOB)和脂蛋白脂酶基因(lipoprotein lipase, LPL)的单核苷酸多态性位点 (SNP)来预测个体对髙脂血症的易感性。
技术介绍
由于脂肪代谢或运转异常使血浆中一种或几种脂质高于正常称为高脂血症(hyperlipidemia),可表现 为髙胆固醇血症(hyperchoesterolemia)、高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia)或两者兼有(混合型 高脂血症)。脂质不溶或微溶于水，必须与蛋白质结合以脂蛋白形式存在，才能在血液循环中运转，因此， 高脂血症常为高脂蛋白血症(hyper 1 ipoproteinemia)的反映。由于逐渐认识到血浆中高密度脂蛋白降低也 是一种血脂代谢紊乱，因而称之为血脂异常(dyslipidemia)更为全面、准确地反映血脂代谢紊乱状态。目 前冊0将高脂蛋白血症分为五大类，主要为根据血浆脂蛋白升高的程度不同进行的表型分类:家族性高乳糜微粒血症(家族性高甘油三酯血症)、家族性高胆固醇血症(家族性高e脂蛋白血症)、家族性异常e脂 蛋白血症、高前e脂蛋白血症、混和型高甘油三酯血症(混和性高脂血症)。脂蛋白的蛋白部分是一种特殊蛋白，因与脂质结合担负在血浆运转脂类的功能，故称为载脂蛋白(即叩rotein)。载脂蛋白除了与脂质结合形成水溶性物质,成为转运脂类的载体以外，还有其他特殊功能， 尤其是参与酶活动的调节，以及参与脂蛋白与细胞膜受体的识别和结合反应。血浆中的脂蛋白呈微粒状， 核心主要为甘油三酯和胆固醇酯，外层由磷脂、胆固醇、载脂蛋白构成。水溶性酶可透过表层进入内层起 作用。脂蛋白的代谢有两条途径①外源性代谢途径是指饮食摄入的胆固醇和甘油三酯在小肠中合成CM 及其代谢过程；②内源性代谢途径是指由肝合成的VLDL转变为IDL和、LDL，以及LDL被肝或其他器官 代谢的过程。其中乳糜微粒CM不能进入动脉壁内， 一般不致动脉粥样硬化，但易诱发胰腺炎。血浆极低密度脂蛋 白VLDL水平升高是冠心病的危险因素。低密度脂蛋白LDL容易进入动脉壁并被氧化修饰，是主要的致动 脉粥样硬化的因素。髙密度脂蛋白HDL水平升高有利于外周组织移除胆固醇，防止动脉粥样硬化发生。髙脂血症(高脂蛋白血症)临床上可分为两类①原发性，属遗传性脂代谢紊乱疾病；②继发性，常 见于控制不良的糖尿病、饮酒、甲状腺功能减退症、肾病综合征、透析、肾移植、胆道阻塞、口服避孕药 等。血脂异常与心血管病，尤其与冠心病的发生和发展密切相关，是代谢综合症的组成成分之一。已知部分原发性高脂血症是由先天性基因缺陷所致,如LDL受体基因缺陷可引起家族性离胆固醇血症。而常见继发性高脂血症病因有下列几种1、 高胆固醇血症糖尿病、肾病综合症、甲状腺功能减退、Cushing综合症；2、 高甘油三酯血症糖尿病(未控制)、肾病综合症、尿毒症(透析时)、肥胖症、雌激素治疗、糖原贮 积症(I型)、饮酒、系统性红斑狼疮、异常Y-球蛋白血症、痛风；3、 高异常脂蛋白血症各种原因引起的肝内外胆道梗阻、胆汁淤积性肝胆病、包括肝内胆小管性肝炎、 胆汁性肝硬化。我国人群血脂平均水平低于发达国家，但其升高幅度却很惊人。我国对不同地区9组人群，从20世 纪80年代初至90年代末的20年间进行了 3次可比性调査，结果表明血清总胆固醇(TC)〉5.20咖o1/ L(200mg/dl),男性患病率由17%连续上升至33%,女性患病率由9%连续上升至32%。因此，积极检出、 预防和控制血脂异常成为经济发达地区心血管病预防工作的主要内容之一。SNP(single nucleotide polymorphism),即单核苷酸多态性标记，是一类基于单碱基变异引起的DNA 多态性，被遗传学界称为第三代遗传标记。主要是指由基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列多态性，3 包括单碱基转换、颠换，以及单碱基的插入/缺失等。它是基因组中最为广泛存在的一类多态性标记，占 大约90%。这些基因组序列变异可以导致个体间表型的差异以及不同个体对疾病，特别是复杂疾病的易感 性、和对环境因素、药物反应的差异。CETP(cholesteryl ester transfer protein, plasma )是血浆胆固醇酯转移蛋白编码基因，由该基 因编码的蛋白是脂代谢中重要的转运蛋白之一，它主要介导胆固醇的逆向转运过程，即在高密度脂蛋白 (HDL)颗粒与其他脂蛋白或细胞膜之间不断地进行脂质成分交换的同时增加胆固醇从组织细胞中流出转 运至肝脏的过程。近年来研究认为CETP基因上的多态现象与多种异常脂蛋白血症(异常e脂蛋白血症， 家庭性高胆固醇血症和混合型高脂蛋白血症)，肥胖、糖尿病、肾病综合征以及AS型心脑血管疾病等因素 相关。CETP基因的缺陷可以引起HDL中CE蓄积、TG降低；VLDL、 LDL中的CE减少，TG增加。而CETP活 性增加，脂肪摄取过多易沉积于肝，更多富含CE和LDL颗粒和VLDL残粒集聚于血浆中，过多的LDL就聚 集在动脉壁细胞内，导致CE沉积于动脉壁内，从而引发多种症状。国内外大样本研究均表明CETP基因上 的rsl7237904号SNP位点(SEQ ID NO: 1所示序列中146位)基因型与血浆高密度脂蛋白胆固醇水平的 升高有显著关系，rsl7237904号位点是位于第16染色体上CETP基因第1内含子的酶切位点Taq IB处的 一个的G/A多态SNP位点，低频等位基因A即为国内外文献中常见的TaqlB的B2位点，可以降低血浆内 胆固醇脂转运蛋白的浓度，抑制高密度脂蛋白向低密度脂蛋白的转化，因此对于心脑血管疾病的发生有一 定的保护作用。APOB为apolipoprotein B (载脂蛋白B)的编码基因，血浆中的apoB蛋白有两中亚型， 一种为肠道 分泌的apoB48蛋白，另一种为肝脏细胞分泌的apoB100蛋白，其中即oB100是血浆中乳糜微粒和低密度 脂蛋白(LDL)主要的构成蛋白。APOB基因上的多态性被认为与血浆中的脂蛋白水平和血脂水平都有很重要 的关系。APOB基因的突变可能导致低密度脂蛋白与肝脏细胞上的LDLR受体结合能力下降，血浆内的甘油 三脂和胆固醇清除速度减慢。低密度脂蛋白的堆积进一步可以引起动脉粥样硬化和冠心病的发生。国内外 的大量的关联分析(中国人群共大于1000名)均表明APOB基因上rsl7247263号SNP位点(SEQ ID NO: 2 所示序列中156位)的该基因型对载脂蛋白和血脂都具有影响，rsl7247263位点是APOB基因上的一个C/T 多态，低频率等位基因型T导致编码的蛋白与LDLR的受体结合能力下降，对血浆内的脂质清除能力受到 阻碍，低密度脂蛋白的堆积进一步可以引起动脉粥样硬化和冠心病的发生。LPL基因编码脂蛋白脂酶，该酶在心脏、肌肉和脂肪组织中进行表达。LPL以同型二聚体蛋白的形式 行使功能，其分子生物学的作用包括两部本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测高脂血症易感性的试剂盒，包括：同时检测ＣＥＴＰ基因ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中第１４６位ＳＮＰ位点、ＡＰＯＢ基因ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２中第１５６位ＳＮＰ位点和ＬＰＬ基因ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３中第１１８位ＳＮＰ位点的特异性引物对及特异性荧光探针、Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ混合液、ＭｇＣｌ↓［２］溶液、荧光定量ＰＣＲ反应缓冲液、去离子水。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：冯哲民，邹祖烨，
申请(专利权)人：上海主健生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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