用于预测2型糖尿病易感性的试剂盒及引物制造技术

用于预测２型糖尿病易感性的引物，所述引物为基于图１Ｂ或图１Ａ的序列而设计的用于ＰＣＲ扩增的特异引物，所述引物针对图中所示的ＳＮＰ位点Ｒ而设计，长度为１８－４６个核苷酸。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于预测2型糖尿病易感性的试剂盒及引物，更具体地，本专利技术涉及利用新鉴别的2型糖尿病易感基因SAC(SolubleAdenylyl Cyclase)的一个单核苷酸多态性(SNP)位点设计的预测2型糖尿病易感性的试剂盒和引物。本专利技术还涉及SAC基因在制备预测2型糖尿病易感性的诊断剂中的应用。
技术介绍
大量流行病学资料表明，糖尿病是一种具有明显遗传倾向的复杂的多基因遗传病。遗传因素可明显影响机体对胰岛素的敏感性。最近几年，大多数研究者致力于通过定位克隆法寻找糖尿病相关基因，即寻找患病家系成员间共享的染色体DNA区域间的连锁。已发现2型糖尿病中的一些相对较少见的单基因形式，称为青年晚发型糖尿病(maturity-onset diabetes of the young，MODY)，是由于突变导致了β细胞功能低下。这些病人通常在青春期到成人早期发病，表现为葡萄糖反应性胰岛素分泌缺陷。这些致病基因中有6个分别编码葡萄糖激酶、转录因子HNF1α、1β、4α及胰岛素启动因子(IPF1)，神经细胞分化蛋白(NeuroD1)。这些基因突变最终导致高血糖血症。这些单基因糖尿病的发病率还不确切，估计占所有2型糖尿病的5％。但是，单纯利用定位克隆的策略来确定多基因遗传病的成功报道还不多。除了定位克隆法外，目前对多基因遗传病的相关基因进行研究还有一种方法最常用的方法，即候选基因法，即直接研究疾病候选基因的变异与疾病表型之间的关系。该法主要基于对家系或人群的病例-对照关联分析。关联分析不需要大的家系研究而是比较某个或某一套标记在患者和正常个体的分布程度。某种标记如果在患病个体中分布十分明显，那么就可以认为该标记与疾病表型相关联。但是，候选基因法中由于对致病基因所在位置没有足够了解，在选择候选基因上存在较大的盲目性，主要针对与疾病发生发展相关的一些代谢通路进行研究。将上述两种方法相结合的定位候选克隆法在一定程度上弥补了任何单一一种方法的局限性，为目前多基因遗传病研究中所普遍采用的策略。同遗传病研究策略相对应，其研究工具—多态性标记也从第一代的限制性片段长度多态性(Restrictive Fragment Length Polymorphism，RFLP)，第二代的微卫星标记(Microsatellite Marker)发展到第三代的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。尤其在对多基因遗传病进行病例-对照关联分析中，需要利用大量高密度的标记物，前两代多态性标记已不能满足这种要求。因此，近年来，SNP作为第三代遗传图谱的构建者已越来越引起人们的广泛关注。单核苷酸多态性(SNP)主要是指基因组水平上由单核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90％以上。SNP在人类基因组中广泛分布，平均每500-1000个碱基中就有1个，其总数估计可达300万个甚至更多。近年来，随着人类基因组及遗传学研究的进展，SNP在全面深入地了解个体和群体间基因组的变异或多态性及疾病研究等方面也越来越显示出其重要意义。将SNP用于疾病易感基因定位的一个最大的优点就是它的分布广泛性。其次是它有比微卫星更高的稳定性，可以最大限度地减少遗传过程中由于序列变异所导致的信息遗失。另外，SNP很容易实现高通量的分型，短时间内可以产生大量的结果，这一点是微卫星所无法比拟的。SNP的上述特点决定了它非常适合于进行象糖尿病这样的多基因疾病，尤其是多个微效基因所导致的疾病的定位研究。选择合适的病例和正常对照，采取关联分析的研究方法，对SNP而言，是非常适合的。本专利技术人近几年来一直从事中国北方汉族人群2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病，NIDDM)基因定位研究。在先前进行的全基因组扫描工作中，本专利技术人已经分别鉴定出多个易感基因位点，它们分别位于1号，12号，18号及20号染色体上。其中在1号染色体上共有5个存在易感基因的区域。在此基础上，本专利技术人尝试从定位区域选择合适的候选基因，利用SNP进行了病例-对照关联分析，最终终于鉴定了一个糖尿病易感基因(即SAC基因)，以及该基因上的一个与中国北方汉族人2型糖尿病特别相关的SNP位点。由此经过深入研究完成了本专利技术。
技术实现思路
根据本专利技术的一个方面，提供了一种预测2型糖尿病易感性的试剂盒，所述试剂盒包含基于图1B或图1A的序列设计的用于PCR扩增的特异引物以及通过核酸扩增进行检测的试剂盒所含的常规组件。所述引物针对图中所示的SNP位点而设计，长度为18bp-21bp。优选地，所述引物选自SEQ ID NO1-24组成的一组，更优选地，所述引物为具有SEQ ID NO25，SEQ ID NO26所示序列的单碱基延伸(SBE)引物。根据本专利技术的另一方面，提供了用于预测2型糖尿病易感性的引物，所述引物为基于图1B或图1A的序列设计的用于PCR扩增的特异引物，所述引物针对图中所示的SNP位点而设计，长度为18bp-21bp。优选地，所述引物选自SEQ ID NO1-24组成的一组。根据本专利技术的一个更优选的实施方案，本专利技术的引物为SEQ ID NO25，SEQID NO26所示的单碱基延伸(SBE)引物。根据本专利技术的再一方面，提供了SAC基因(可溶性腺苷酸环化酶)作为糖尿病易感基因在制备用于糖尿病诊断的诊断剂中的应用，SAC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO27所示。附图说明图1A示出本专利技术的SNP位点(R)所在的SAC基因区域的核苷酸序列。图1B为图1A序列的互补序列图2A为SACN端部分包含的两个预测的催化结构域。图2B为本专利保护的SNP所位于的外显子。具体实施例方式定义单核苷酸多态性(SNP)主要是指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90％以上。微卫星位点把长度为2-6个核苷酸的串联重复序列(VNTR)称为微卫星(Microsatellite)，微卫星位点有两个最突出的优点一是它出现频率很高，遍布于整个基因组，而且，由于短序列在进化上不受选择，因而在同一位点上可变重复单位数目变化很大，一个位点可能有多达几十种的等位基因，信息含量高；二是STR两侧的特异性单拷贝序列稳定性高，可作为检测其多态性的PCR引物。以PCR技术操作，可以实现自动化大规模操作基因分型及等位基因频率分布同一种群生物中，相同等位基因核苷酸序列顺序分析，在此表示相同SNP位点在不同个体中的组成成分的确定，为基因分型。等位基因频率是指所研究的同一种类等位基因里，所期望出现的等位基因占的比例，也就是出现变化的等位基因的所占比例。疾病易感性(糖尿病易感性)人群对疾病容易感受程度。病例-对照关联分析是一种由因及果的回顾性研究。它是先按疾病状态确定调查对象，分为病例和对照组，通过比较病例组与对照组间所研究的遗传标志出现频率的差异而获得该标志与疾病间关联的信息。单碱基延伸(SBE)反应它是指在缺乏四种dNTP、仅存在四种ddNTP的情况下，测序酶可以在引物的3’端加上一个ddNTP，但因为不能形成磷酸二酯键，故不会继续延伸，碱基延伸一个后即告终止。只需检测这一个碱基即可。又称微测序法(Mini本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴国栋，李云峰，左瑾，方福德，强伯勤，沈岩，姚志建，陈竺，黄薇，王姮，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，北京诺赛基因组研究中心有限公司，国家人类基因组南方研究中心，中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：