对癌症的易感性诊断及其治疗制造技术

一种能选择性地杂交于毗邻于标志Ｄ１０Ｓ５４１和Ｄ１０Ｓ２１５定义的ＤＮＡ的人染色体１０的区域的核酸，条件是该核酸不是任一种酵母人工染色体（ＹＡＣ）７４６－Ｈ－８，８２１－Ｄ－２，８３１－Ｅ－５，９２１－Ｆ－８，７３８－Ｂ－１２，７９６－Ｄ－５，８２９－Ｅ－１，６７８－Ｆ－１，８３９－Ｂ－１，７３４－Ｂ－４，７Ｂ－Ｆ１２，７５７－Ｄ－８，７７３－Ｃ－２，７８７－Ｄ－７，８３１－Ｅ－９，８５５－Ｄ－２，８５５－Ｇ－４，８７６－Ｇ－１１，８９４－Ｈ－５，９２２－Ｅ－６，９３４－Ｄ－３，９６４－Ａ－８，９６８－Ｅ－６或２４Ｇ－Ａ１０和不是表３－２２中所述的任一种已表达的序列标志（ＥＳＴ），以及不是任一种细菌人工染色体（ＢＡＣ）或Ｐ１－衍生的人工染色体（ＰＡＣ）Ｂ２Ｆ２０，Ｐ４０Ｆ１０，Ｐ７２Ｇ８，Ｐ７４Ｎ２，Ｐ２７４Ｄ２１，Ｂ７６Ｉ１０，Ｂ７９Ａ１９，Ｂ７９０１，Ｂ９３Ｆ１２，Ｂ１２２Ｌ２２，Ｐ２０１Ｊ８，Ｐ２０１Ｐ５，Ｐ２０９Ｋ３，Ｐ３１６Ｎ１４，Ｂ４６Ｂ１２，Ｂ６０Ｃ５，Ｂ１４５Ｃ２２，Ｂ１５０Ｋ４，Ｂ１５０Ｎ３，Ｂ１８１Ｆ１５和Ｂ１８８Ｌ２２。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及检测病人是否患有癌症或是否对癌症易感的方法，还涉及治疗癌症，尤其是前列腺癌的方法。前列腺癌在许多国家已成为最重要的疾病。在过去的20年间，其死亡率翻了一倍并且现已为英格兰和威尔士的男性癌症死亡的第二个最常见的原因(死亡率统计英格兰人和威尔士人的死因。OPCS DH2 19，1993，HerMajesty’s Stationery office)。在过去的十年中，前列腺癌的流行增长了28％并且现已占英格兰和威尔士男性癌症的总数的12％(癌症统计英格兰和威尔士的记录。OPCS MBI No22，1994，Her Majesty’s Stationery Office)。这种增长以及最近许多公众死于前列腺癌使得为此种癌症做些工作的要求更加突出。已建议能更广泛地普查可以减少前列腺癌的死亡率。当前前列腺癌普查由直肠检查和前列腺特异抗原(PSA)水平检测组成。这些方法由于手指直肠检查具有相当大的检查者间的差异(Smith和Catalona(1995)“泌尿科学”(Urology)45，70-74)以及PSA水平可因良性前列腺增生(BPH)，前列腺炎症和其它疾病而升高而缺少特异性。在超过22,000名男性的前瞻性研究(内科医师健康研究)中，在366名已生前列腺癌的男性患者表现出以PSA为检测指标的诊断试验是比较失败的。PSA水平是在研究开始时贮存的血清中测定的，而仅有47％的生前列腺癌的男性在随后的四年中发现有升高的水平(Gann等人(1995)，“美国医学协会杂志”273，289-294)。目前的普查方法因而不能令人满意。细胞遗传和等位缺失研究指出一些染色体区域可与前列腺癌有关。Cannon-Albright和Eeles(1995)在“自然，遗传学分册”(Nature Genetics)9，336-338(文献1)中从杂合子缺失(LOH)研究讨论了前列腺癌易感基因座的抑癌候选区域，其存在于人染色体的3p，7q，8p，9q，10p，10q，11p，13q，16q，17p，18q和Y区域；而Brothman等人(1990)的“癌症研究”(Cancer Res.)，50 3795-3803中研究了人前列腺腺癌的细胞遗传学信息，表明了染色体1，2，5和Y丢失以及7，14，20和22的获得，并且涉及染色体臂2p，7q和10q的重排是最常见的。Gao等人(1994)，“癌基因”(Oncogene)，9，2999-3003中的研究表明在前列腺腺癌中发现了3p，5q，6p，7p，8p，10q，11p，13q，16q，17p和Xq染色体中至少一个中的阳性突变基因表型；而Massenkeil等(1994)，“抗癌研究”(Anticancer Res.)，14(6B)，2785-2790中表明在各种前列腺癌样品的8p，17p，18q都发现了LOH，但在十四种有报道的前列腺癌的10q上都没有发现缺失。Zenklusen等(1994)“癌症研究”，54，6370-6373提示在7q31.1上有一个可能的抑癌基因。此外，已有其它报道描述了其它染色体缺失或异常。因此，大多数人类染色体的缺失或异常已由一个或另一个研究小组发现与前列腺癌相关。一些肿瘤表现出精确的10q23-q25(2，3)区域缺失，提示在此区域有抑癌基因。已建议将编码Mgc癌蛋白质的负调节蛋白并在10q25上的Mxil视为该抑癌基因的候选基因(4)，近来已描述了Mxil在一些前列腺癌中潜在的功能失效突变。Mxil在一些前列腺癌病例中表现出等位缺失和突变，并且已断定其可能促使该常见恶性肿瘤的病理性或致瘤性演变(5)。本专利技术的目的是提供更好的诊断癌症和检测对癌症特别是前列腺癌的易感性的方法；提供可用于该方法的核酸；以及提供与前列腺癌相关的抑癌基因。使用基于带有已充分报道的微卫星CA重复标记的等位型的荧光，本专利技术人已作出了跨越10q23-q25的详细的缺失图，使得可以严格地定义可能与肿瘤发展相关的10q缺失区域。此外，本专利技术人已检测了前列腺癌中Mxil缺失和突变的频率以弄清该基因在前列腺癌进展中的意义。本专利技术人的资料显示前列腺癌抑癌基因存在于10q23-q24边界附近，其在绝大多数(22/23)显示缺失的肿癌中被删除。相反，与10q23-q25的其它区域或全部区域的缺失相对应的Mxil特异性缺失仅在1/23肿瘤中有发现，并伴有10q23-q24边界的标记缺失。此外，本专利技术人通过单链构象多态性(SSCP)分析或直接DNA测序都没有在表现出Mxil相关性标记缺失的肿瘤中检测出任何Mxil突变，并且本申请人的资料显示Mxil离已鉴定的染色体10区域20厘摩。本专利技术人发现缺失10q的全部肿瘤已缺失了下文详述区域。本专利技术的第一个方面是提供一种能选择性地杂交于人类染色体10区域的核酸，而该区域与由标记D10S541和D10S215所定义的DNA相邻接，条件是该核酸不是任何一种酵母人工染色体(YACs)746-H-8，821-D-2，831-E-5，921-F-8，738-B-12，796-D-5，829-E-1，678-F-1，839-B-1，734-B-4，7B-F12，757-D-8，773-C-2，787-D-7，831-E-9，855-D-2，855-G-4，876-G-11，894-H-5，922-E-6，934-D-3，964-A-8，968-E-6或24G-A10，也不是任何如表3-22所述的已表达序列标志(ESTs)，并且也不是任何一种细菌人工染色体(BACs)或P1衍生的人工染色体(PACs)B2F20，P40F10，P72G8，P74N2，P274D21，B76I10，B79A19，B7901，B93F12，B122L22，P201J8，P201P5，P209K3，P316N14，B46B12，B60C5，B145C22，B150K4，B150N3，B181F15，and 188L22。人类染色体10上的各种标记物(包括D10S541和D10S215)位点如图5所示。当提到这些ESTs时，本专利技术人是指那些公开于所参照的表中的序列，并且更具体是衍生出该序列的特异性cDNA克隆。“选择性杂交”是指该核酸带有足够的类似于其能在中等或高度严格的条件下杂交的染色体10DNA的核苷酸序列。如本领域所周知，核酸杂交的严格性依赖于诸如发生杂交的核酸长度，杂交序列的同一程度的因素以及诸如温度，离子强度和该序列中CG或AT含量的因素。能选择性地杂交于该染色体10 DNA的核酸包括那些至少有一部分核酸与该染色体10DNA有＞95％的序列相同，优选地有＞98％的，更优选地有-99％的序列相同的核酸。众所周知，人类基因通常含有内含子使得诸如衍生于该染色体10DNA中的基因的mRNA或cDNA不能在其全长上与该染色体10DNA完全配对但仍然是能选择性地杂交于染色体10的该区域的核酸。常见的导致选择性杂交的中等或高度严格的杂交条件是本领域内周知的，比如，那些描述于“分子克隆，实验手册”，第二版(Sambrook等(编)，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，美国)中的方法。当核酸固定在尼龙膜上并且探针核酸≥500个碱基(对)时，一个常用的杂交溶液的实例是6×SSC(柠檬酸钠盐)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：奈杰尔·K·斯珀尔，伊恩·C·格雷，
申请(专利权)人：帝国癌症研究技术有限公司，
类型：发明
国别省市：