一种利用限制性内切酶双酶切检测SNP的方法技术

技术编号:2575836 阅读:597 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供一种联合特殊限制性内切酶和质谱法方法来检测单核苷酸多态性的新方法。本发明专利技术要点在于参与PCR反应的正反引物含两种特殊限制性内切酶位点的识别位点,并且该识别位点与酶切位点位置是不同的。通过对PCR产物进行两次限制性内切酶消化,产生含SNP位点的单链核苷酸片段,并通过纯化、点靶等步骤,制备可直接用于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测的样本。与现有方法相比,本发明专利技术具有存在耗时短长、成本低、分辨率高、操作简便的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到基因组学和分子生物学中有机生物分子特别是核酸分子的质 谱分析,具体是提供一种联合限制性酶切法和质谱法以检测单核苷酸多态性的 方法,更具体地说,提供一种在基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS)中对基因组单核苷酸多态性进行检测的方法。技术背景人类的遗传信息储存在基因组中,2002年国际合作项目人类基因组计划的 最终完成,绘制出了人类基因组结构的精细图,为相关研究提供了参考序列。 人类基因组序列共由30亿个位点组成,研究表明,任意两个人之间的基因组差 异在0.1%左右,即大约300万个位点的差异。这些差异极有可能是造成两个人 之间个体差异的遗传因素。发现这些位点,可广泛地应用于遗传标记的研究、 评估个体遗传关系、评估物种进化等研究领域。在人类基因组中,约90%的差异是以单个核苷酸的形式体现出来的,这样 的差异位点被称作单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)。 SNP 具有两个显著的特点: 一是数目众多,据估计人类基因组中的SNP数目约在1100 万左右,目前国际数据库dbSNP中已收录来源于人类本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种联合限制性酶切法和质谱法以检测单核苷酸多态性的方法,包括以下步骤:    (1)确定SNP位置:针对待检核酸序列可能存在的SNP,确定SNP在待检序列中的位置;    (2)设计正向引物:根据SNP的位置,设计正向引物,其中正向引物3’端位于SNP位点5’端上游1-47bp处,正向引物5’端含有一种特殊限制性内切酶的识别位点,而在待检核酸序列中,所述的特殊限制性内切酶的酶切位点位于识别位点3’端下游1-25bp处,并位于SNP的5’端上游1-25bp的范围内,其中,所述的位置范围取决于具体的限制性内切酶;    (3)设计反向引物:根据SNP的位置,设计反向引物,其中反向引物位于另一条核酸...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:赵洪斌马庆伟于中连吕芳吕萍萍
申请(专利权)人:毅新兴业北京科技有限公司
类型:发明
国别省市:11[中国|北京]

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1
相关领域技术
  • 暂无相关专利