基因的等温滚环复制与限制性内切酶检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基因的等温滚环复制与限制性内切酶检测方法及其试剂盒，其主要内容是，在试管内用特定ＤＮＡ探针与目的基因杂交，用ＤＮＡ连接酶把探针连接成环之后，以滚环方式复制、扩增ＤＮＡ模板，然后通过限制性内切酶将扩增的ＤＮＡ降解成一定长度的片段，最后通过电泳来检测目的基因是否被扩增。与通用的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）相比，用本方法检测特定的基因序列不需要价格昂贵的ＤＮＡ扩增仪，可以直接检测ＤＮＡ和ＲＮＡ分子，具有简单、方便、经济、灵敏度高、特异性强等优点。可用于包括动物、植物和微生物的基因检测和基因扩增。试剂盒根据检测对象的性质（动物、植物、真菌、细菌等）提供不同的试剂，令检测更方便。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基因的等温滚环复制与限制性内切酶检测方法，命名为ＲＣＡ－ＲＥＤ，其基本步骤包括：（１）、将ＤＮＡ探针与待检样品的ＤＮＡ或ＲＮＡ混合，使ＤＮＡ探针与目的基因杂交。该引物探针上有特定的限制性内切酶切割位点；（２）、加入ＤＮＡ连接酶， 使ＤＮＡ探针连接成环状；（３）、加入ＤＮＡ聚合酶和复制引物，令其以滚环方式复制并合成双链ＤＮＡ；（４）、加入限制性内切酶，将复制的ＤＮＡ切割成特定长度的片段；（５）、通过电泳，如平板琼脂糖凝胶电泳，垂直聚丙烯酰胺电泳，毛细管电泳 等，检查特定长度的ＤＮＡ片段；

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：葛莘，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学糖业研究院，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]