ＣＡＳＴ基因与ＯＢ基因双酶切方法的建立及其在猪聚合育种中的应用技术

本发明专利技术属于动物基因工程技术领域，研究两个影响肉质性状的候选基因即钙蛋白酶抑制蛋白（ＣＡＳＴ）基因和肥胖（ＯＢ）基因在松辽黑猪标记辅助选择中的应用。在ＣＡＳＴ基因内含子６存在一个Ａ→Ｇ的碱基突变，导致了Ｈｉｎｆ?Ｉ限制性酶切位点的改变，产生多态性片段；ＯＢ基因第３４６９位碱基处存在一个Ｔ→Ｃ的碱基突变，导致限制性片段长度多态性的产生。将两个候选基因两个突变位点作为一个分子标记，通过聚合ＰＣＲ－ＲＦＬＰ的方法，用限制性内切酶Ｈｉｎｆ?Ｉ检测两个突变位点，并将检测结果与松辽黑猪的肉质性状进行关联分析，以期为松辽黑猪的选种、早期选育、杂种优势的利用等提供基础参数，为松辽黑猪改良育种和新品系的培育提供理论依据和实验基础。本发明专利技术的特点在于建立ＣＡＳＴ基因和ＯＢ基因聚合ＰＣＲ，同时建立两个候选基因同一个限制性内切酶Ｈｉｎｆ?Ｉ聚合酶切方法，为松辽黑猪的标记辅助选择提供实验依据。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＣＡＳＴ基因和ＯＢ基因聚合ＰＣＲ的方法（１）采集松辽黑猪肝脏组织；（２）肝脏组织提取基因组ＤＮＡ，（３）设计两对特异性引物并进行ＰＣＲ聚合扩增，所设计一对特异引物为：　　ＣＡＳＴ上游引物：５′－ＡＡＡＧＣＣＴＡＣＣＣＡＣＧＣＡＣＴ－３′ＣＡＳＴ下游引物：５′－ＧＣＡＧＡＴＡＣＡＣＣＡＧＴＡＡＣＡＧＡＡＡ－３′　　ＯＢ上游引物：５′－ＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＣＴＣＴＣＴＣＧＣＴＧＡＧ－３′　　ＯＢ下游引物：５′－ＧＡＣＴＣＣＴＧＧＡＡＧＣＴＣＡＧＧＴＴＴＣＴＴＣ－３′　　ＰＣＲ反应总体系为５０μＬ，其中１０×ｂｕｆｆｅｒ　５．０μＬ，２．５ｍＭ　ｄＮＴＰ　４．０μＬ，１０．０ｐｍｏｌ／μＬ的两对上游引物和下游引物各１．０微升，１Ｕ　Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶，２０－５０纳克基因组ＤＮＡ，最后用四馏水补足至５０微升。循环程序如下：９４℃预变性５ｍｉｎ，９４℃变性１ｍｉｎ，６０．５℃复性４５ｓｅｃ，７２℃延伸１ｍｉｎ，３２个循环，７２℃终延伸１０ｍｉｎ。反应结束后，ＰＣＲ扩增产物用１．０％琼脂糖凝胶电泳检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张永宏，赵志辉，高妍，张嘉保，孙博兴，姜昊，闫守庆，杨润军，牛淑玲，邢沈阳，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]