【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种使用多重PCR方法和多重酶切方法检测猪主要肉质基因多态性的方法，属于基因检测
技术介绍
肉质作为猪的数量性状，受许多基因的调控，其中，氟烷、酸肉以及心脏脂肪酸基因是三个重要肉质基因，这三个基因的突变均会对猪的肉质产生很大影响。其中，氟烷基因的突变是由于氟烷基因cDNA中的C1843-G突变为T1843-A，使受体蛋白第615位精氨酸变为半胱氨酸，从而导致表达产物结构和功能的改变，进而引起猪应激综合症的发生；酸肉基因的突变是由于在酸肉基因外显子3中碱基G — A的突变抑制了磷酸蛋白激酶的活性，导致了终PH值低，颜色苍白，有水分渗出的“汉普夏型猪肉”;猪心脏脂肪酸基因上存在限制性内切酶1、Hae \\\、Hinf I的3个酶切多态性位点，这三个位点的多态性均与肌间脂肪含量呈显著相关。目前，这三个基因已经成为猪DNA标记辅助选择(MAS)育种中的主要DNA标记；检测这三个基因的方法是传统的PCR-RFLP。而传统的PCR-RFLP方法每次只能检测一个基因， 检测效率较低，本专利技术专利使用双重PCR和双重酶切的方法每次同时扩增和酶切两段DN...
【技术保护点】
一种多重PCR和多重酶切检测猪主要肉质基因多态性的方法，其特征在于：按以下步骤进行：（1）、首先针对氟烷、酸肉以及心脏脂肪酸这三个肉质基因的突变位点选择引物和与酶切多态性位点相对应的内切酶，查找内切酶在各种酶切缓冲液条件下的酶切效率，并据此列出酶切效率较高的多重酶切组合；（2）、根据步骤（1）中所选择的引物和所有的多重酶切组合，计算各酶切组合针对相应的DNA扩增片段突变前和突变后的酶切片段长度，分析是否能够辨认因突变造成的电泳结果改变；（3）、筛选出能够辨认出突变的酶切组合，在这些组合中选择几种，并构建与之对应的DNA片段的多重引物PCR扩增体系和多重酶切体系。
【技术特征摘要】
1.一种多重PCR和多重酶切检测猪主要肉质基因多态性的方法，其特征在于按以下步骤进行 (1)、首先针对氟烷、酸肉以及心脏脂肪酸这三个肉质基因的突变位点选择引物和与酶切多态性位点相对应的内切酶，查找内切酶在各种酶切缓冲液条件下的酶切效率，并据此列出酶切效率较高的多重酶切组合； (2)、根据步骤(I)中所选择的引物和所有的多重酶切组合，计算各酶切组合针对相应的DNA扩增片段突变前和突变后的酶切片段长度，分析是否能够辨认因突变造成的电泳结果改变； (3)、筛选出能够辨认出突变的酶切组合，在这些组合中选择几种，并构建与之对应的DNA片段的多重引物PCR扩增体系和多重酶切体系。2.根据权利要求1所述的多重PCR和多重酶切检测猪主要肉质基因多态性的方法，其特征在于步骤(3)中采用内切酶和内切酶对氟烷基因和心脏脂肪酸基因5’ -上游区的双重PCR扩增产物进行双重酶切；采用没srBrl内切酶和#印1内切酶对酸肉基因和心脏脂肪酸基因第二内含子区的双重PCR扩增产物进行双酶切；最后使用Zfeelll内切酶对酸肉基因和心脏脂肪酸基因第二内含子区的双重PCR扩增产物进行单酶切。3.根据权利要求1所述的多重PCR和多重酶切检测猪主要肉质基因多态性的方法，其特征在于首先对氟烷基因和心脏...
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