通用样品制备制造技术

本发明专利技术涉及用于诊断目的的核酸的样品制备。更精确地，本发明专利技术提供了一种用于自多种不同类型的流体样品至少同时分离第一和第二靶核酸并任选地以同时方式扩增所述分离的核酸的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于体外诊断学领域。具体而言，在此领域内，其关注用于诊断目的的核酸的样品制备。更精确地，本专利技术提供了一种用于自多种不同类型的流体样品至少同时分离第一和第二靶核酸的方法。
技术介绍
自复杂的生物学混合物诸如例如临床样品分离生物学材料诸如核酸或蛋白质具有相当大的意义，尤其对于诊断目的。核酸样品制备的诊断性应用的例子包含病毒诸如人乳头状瘤病毒(HPV)、西尼罗病毒(WNV)的制备及随后的检测或针对人免疫缺陷病毒(HIV)、乙肝病毒(HBV)和/或丙肝病毒(HCV)的存在的献血常规筛选。此外，所述扩增技术适用于细菌性靶物诸如分枝杆菌 或沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)和淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae),或对肿瘤标志物的分析。本领域中已经开发出众多不同方法，例如，将样品中不期望的组分变性、沉淀并除去，随后沉淀并分离所讨论的分析物(例如基于醇的核酸沉淀)。另一种办法是将相应的生物学材料结合至固体支持材料，所述固体支持材料可以例如以层析柱形式提供。出于诊断目的，且尤其为了自动化分离随后进行中或高通量分析的生物学材料，经常使用结合颗粒。这类颗粒可以具有功能化表面，即它们经常用抗体、核酸捕捉探针等包被以结合期望的分析物。或者，它们可以具有未修饰的表面诸如特别用于核酸分离的玻璃表面。然而，出于诊断目的而有待分析的靶核酸可以存在于多种不同来源中。实际上，通常使用于不同来源中核酸的样品制备规程适合于1.流体样品的类型2.核酸的类型。在从不同来源分离不同核酸时，也可能不得不考虑其它标准。现有技术已经通过对所述不同类型的样品提供不同制备方法解决了此多样性。本专利技术提供了用于从多种不同类型的流体样品至少分离第一和第二靶核酸的改良方法。专利技术描述本专利技术提供了一种用于从多种不同类型的流体样品至少同时分离第一和第二靶核酸的方法。在第一个方面，本专利技术涉及一种用于从多种不同类型的流体样品至少同时分离第一和第二靶核酸的方法，所述方法包括下列自动化步骤a.在与流体样品数目对应的数目的容器中将固体支持材料和所述多种不同类型的流体样品在一定条件下组合在一起达一段时间，该条件和时间段足以允许包含所述靶核酸的核酸在所述固体支持材料上固定化，b.在分离站中将所述固体支持材料自存在于所述流体样品中的其它物质分离，c.在分离站中纯化所述核酸，其通过将所述流体样品与所述固体支持材料分开，并将所述固体支持材料用清洗缓冲液清洗一次或多次进行，其中物理条件和所述时间段对于所述多种不同类型的流体样品的成员是相同的。特别但不仅对于具有高样品通量的临床实验室，高度有利的是提供用于从多种不同类型的流体样品快速、简便且可靠地同时分离多种靶核酸的这类改良方法。包括上文提及的自动化步骤的方法展示出多种优点。首先，将依照本专利技术的样品制备规程与例如RNA逆转录和靶核酸扩增以自动化方式组合显著降低对手动干预的需要以及由此潜在的污染风险。·此外，提供其中有多种不同样品，即不同核酸来源的单一方法的可能性显著促成降低核酸诊断的总体复杂性。如果例如不得不对每种类型的流体样品应用不同方法，就像现有技术中的情况那样，那么样品制备是复杂、耗时且资源密集得多的。通常，必须采用不同试剂，这导致成本增加，并且阻碍快速且不复杂的自动化解决办法的开发。依照本专利技术的样品制备展现出适合于处理含有不同类型核酸诸如例如DNA和RNA的多种不同样品类型的灵活性和工作流。不同来源，即样品类型包含所有种类的人体液,诸如例如血液、痰、鼻拭样、尿液、汗液或其它，等等。依照本专利技术的方法需要相当少的动手实践时间，并且测试的实施比现有技术中使用的样品制备方法简单得多。依照本专利技术的方法在例如临床病毒学领域中提供一项主要的优点，因为其允许平行实验中数种病毒的平行样品制备和优选地下游扩增。该方法特别可用于管理需要频繁的病毒监测的移植后患者。由此，依照本专利技术的方法促进节省成本的诊断学，并且促成抗病毒剂的使用和病毒性并发症以及住院的降低。这同样适用于临床微生物学领域。一般而言，效率会在更快的周转时间和改善的测试灵活性方面增加。因此，这导致做出诊断对患者要求的测试运行数目的降低和潜在更短的住院期(例如如果可以更快地提供诊断，那么需要抗微生物疗法的患者会更快地接受它，并且因此更早恢复)。另外，患者显示更小的发病率，并且因此引起更少的支持疗法(例如败血症诊断延迟相关的加强监护)相关成本。更快地提供阴性结果对于抗生素的开药过量可以具有重要的含意。例如，如果使用依照本专利技术的方法获得的测试结果能够比用标准样品制备方法，接着用例如实时PCR更快地排除病原体，那么就不会迫使临床医师使用经验抗生素。或者，如果使用经验抗生素，那么可以缩短相应治疗的持续时间。就设计一种包括用依照本专利技术的方法的样品制备的测定法而言，熟练技术人员会特别但不仅仅受益于下列优点 软件复杂性的降低(导致编程错误的风险降低) 将测定法开发努力聚焦于化学优化而非化学以及仪器控制参数 可靠得多的系统，因为总是使用单一方法，并且可以最佳地设计硬件来实施此方案 给实施依照本专利技术方法的熟练技术人员提供作为同一过程的部分平行运行多种不同分离的灵活性籲成本降低。 在本专利技术的意义中，核酸的“纯化”、“分离”或“提取”指如下的情况可以在诊断测定法中例如通过扩增分析核酸前，通常必须从含有不同组分的复杂混合物的生物学样品中将它们纯化、分离或提取。对于第一步，可以使用允许核酸富集的方法。经常，要分析的核酸在所讨论的流体样品内的溶液中不是游离的，而是位于闭合结构诸如例如细胞或病毒内。在诊断用测定法中，目的经常是特别是鉴定流体样品诸如临床样品中病原性细胞或病毒。这类病原体可以例如包含RNA病毒如例如人免疫缺陷病毒(HIV)、丙肝病毒(HCV)、西尼罗病毒(WNV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯(St. Louis)脑炎病毒(SLEV)和其它，或DNA病毒如例如乙肝病毒(HBC)、巨细胞病毒(CMV)和其它，或细菌如例如沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟氏球菌(NG)和其它。依照本专利技术的方法对于从上文提及的以及其它的生物体中提取核酸是有用的。因此，本专利技术的一个优选的方面是上文描述的方法，其中步骤a.进一步包括将核酸从其细胞和/或病毒环境中释放，其通过裂解多种不同流体样品中潜在存在的细胞和/或病毒壳体进行。 为了释放细胞或病毒颗粒的内容物，可以将它们用酶或化学药品处理以将细胞壁或病毒颗粒溶解、降解或变性。此过程通常被称为裂解。所得的含有这类裂解材料的溶液被称为溶胞物。适合于裂解细胞和/或病毒壳体或类似结构的试剂通常在裂解缓冲液内提供。因此，在本专利技术的一个优选的实施方案中，上文所描述的方法在步骤a.中进一步包括向多种不同流体样品添加裂解缓冲液。由于依照本专利技术的方法对于高通量、效率和并行化是特别有利的，本专利技术的一个优选的方面是上文所描述的方法，其中所述裂解缓冲液对于所述多种不同类型的流体样品的成员是相同的。那样，样品制备规程的复杂性得到进一步降低，因为不必对要处理的不同样品单个提供不同裂解试剂。此外，该规程在用单一裂解缓冲液工作时可以更容易地控制。可以例如用多路移液管从单个容器中取出裂解缓冲液，随后同时分配到不同样品中。在本专利技术的一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.09.07 EP 10175533.8;2010.07.29 US 61/368,9701.一种用于自多种不同类型的流体样品至少同时分离第一和第二靶核酸的方法，所述方法包括下列自动化步骤a.在与流体样品数目对应的数目的容器中将固体支持材料和所述多种不同类型的流体样品在一定条件下组合在一起达一段时间，该条件和时间段足以允许包含所述靶核酸的核酸在所述固体支持材料上固定化，b.在分离站中将所述固体支持材料自存在于所述流体样品中的其它物质分离，c.在分离站中纯化所述核酸，其通过将所述流体样品与所述固体支持材料分开，并将所述固体支持材料用清洗缓冲液清洗一次或多次来进行，其中物理条件和所述时间段对于所述多种不同类型的流体样品的成员是相同的。2.权利要求1的方法，其中步骤a.进一步包括将核酸从其细胞和/或病毒环境中释放，其通过裂解所述多种不同流体样品中潜在存在的细胞和/或病毒壳体来进行。3.权利要求2的方法，其中步骤a.进一步包括向所述多种不同流体样品添加裂解缓冲液。4.权利要求3的方法，其中所述裂解缓冲液对于所述多种不同类型的流体样品的成员是相同的。5.权利要求4的方法，其中所述裂解缓冲液包含一种或多种选自下组的组分籲离液剂籲缓冲物质 醇 还原剂。6.权利要求3至5中任一项的方法，其中所述裂解缓冲液具有酸性pH。7.前述权利要求中任一项的方法，其中所述多种不同流体样品中的至少一种流体样品与其它流体样品具有不同体积。8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述容器在同一整...

【专利技术属性】
技术研发人员：M埃克霍夫，E拉斯曼，D齐默尔曼，A沃尔菲尔施奈德，C纽豪斯，ES史密斯，SF博伊尔，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：
国别省市：